腺熱埃里希體探針法熒光定量PCR試劑盒具有下列特點(diǎn)：
1. 一站式，足夠 50 次酶切-連接反應(yīng)、50 次預(yù)擴(kuò)反應(yīng)和 1600 次 AFLP PCR（PCR 按 30 uL 體系計(jì)算），但不包括 DNA 純化和帶型分析試劑（如 PAGE 電泳試劑和 銀染試劑）。
2. 本系列產(chǎn)品提供 EcoRI-MseI 組合，適用于 GC 含量在 50%以上的基因組。對(duì) GC 含量在 50%以下的基因組，需從本公司采購 AFLP（EcoRI-TaqI）組合。
3. 各種參數(shù)都經(jīng)過優(yōu)化，一次 PCR 所得 AFLP 片段數(shù)一般在 10-100 之間，可重復(fù) 性好，誤差小于 0.6%。4. 本產(chǎn)品適用于基因組在 500 Mb-6000 Mb 的材料（如動(dòng)物和植物），對(duì)于基因組 在 50-500 Mb 的材料（如細(xì)菌和真菌）或 50Mb 以下的材料（如質(zhì)粒，cosmid， BAC，YAC 和 PAC 等），需要分別另購專門的+1 型預(yù)擴(kuò)引物混合液和+3 型 EcoRI 引物（8 種）AFLP 引物對(duì)。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

【結(jié)果分析條件設(shè)定】
u 基線（Baseline）設(shè)定：應(yīng)選擇該次實(shí)驗(yàn)指數(shù)擴(kuò)增前所有樣本熒光信號(hào)比較穩(wěn)定的一段區(qū)域（所有樣本熒光信號(hào)無較大波動(dòng)），起始點(diǎn)（Start）應(yīng)避開熒光采集起始階段的信號(hào)波動(dòng)，終止點(diǎn)（End）應(yīng)比最早出現(xiàn)指數(shù)擴(kuò)增的樣本Ct值減少1~3個(gè)循環(huán)，建議基線設(shè)為6~15。
u 閾值(Threshold)設(shè)定：將閾值線設(shè)定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)。
【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】
1.   陰性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性，無指數(shù)擴(kuò)增期，Ct=40或無Ct；
2.   陽性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陽性，有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期，Ct值應(yīng)小于等于35；
3.   以上要求需在一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)滿足，否則該次實(shí)驗(yàn)視為無效。
【結(jié)果判斷】
1.   陽性：有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期，且Ct＜38；
2.可疑：有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期，且38≤Ct<40，此時(shí)樣本為可疑樣本；對(duì)于可疑樣本建議復(fù)核一次，若復(fù)核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴(kuò)增期，則判定為陽性，否則判定為陰性；
3.   陰性：無指數(shù)擴(kuò)增期，Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。
【對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1.   實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染、試劑污染、樣品交叉污染會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果；
2.   試劑運(yùn)輸、保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，可能會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。