PCR實驗方法步驟：
大腸桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒(含致病性和非致病性)方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
| 產(chǎn)品名稱 |
英文名稱 |
貨號 |
| 大腸桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒(含致病性和非致病性) |
E.coli |
XGR96663 |
【結(jié)果分析條件設(shè)定】
u 基線（Baseline）設(shè)定：應選擇該次實驗指數(shù)擴增前所有樣本熒光信號比較穩(wěn)定的一段區(qū)域（所有樣本熒光信號無較大波動），起始點（Start）應避開熒光采集起始階段的信號波動，終止點（End）應比最早出現(xiàn)指數(shù)擴增的樣本Ct值減少1~3個循環(huán)，建議基線設(shè)為6~15。
u 閾值(Threshold)設(shè)定：將閾值線設(shè)定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴增曲線的最高點。
【質(zhì)控標準】
1. 陰性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應為陰性，無指數(shù)擴增期，Ct=40或無Ct；
2. 陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應為陽性，有明顯的指數(shù)擴增期，Ct值應小于等于35；
3. 以上要求需在一次實驗中同時滿足，否則該次實驗視為無效。
【結(jié)果判斷】
1. 陽性：有明顯的指數(shù)擴增期，且Ct＜38；
2.可疑：有明顯的指數(shù)擴增期，且38≤Ct<40，此時樣本為可疑樣本；對于可疑樣本建議復核一次，若復核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴增期，則判定為陽性，否則判定為陰性；
3. 陰性：無指數(shù)擴增期，Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。
【對檢驗結(jié)果的解釋】
1. 實驗室環(huán)境污染、試劑污染、樣品交叉污染會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；
2. 試劑運輸、保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，可能會導致出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
具有下列特點：
1. 一站式，足夠 50 次酶切-連接反應、50 次預擴反應和 1600 次 AFLP PCR（PCR 按 30 uL 體系計算），但不包括 DNA 純化和帶型分析試劑（如 PAGE 電泳試劑和 銀染試劑）。
2. 本系列產(chǎn)品提供 EcoRI-MseI 組合，適用于 GC 含量在 50%以上的基因組。對 GC 含量在 50%以下的基因組，需從本公司采購 AFLP（EcoRI-TaqI）組合。
3. 各種參數(shù)都經(jīng)過優(yōu)化，一次 PCR 所得 AFLP 片段數(shù)一般在 10-100 之間，可重復 性好，誤差小于 0.6%。4. 本產(chǎn)品適用于基因組在 500 Mb-6000 Mb 的材料（如動物和植物），對于基因組 在 50-500 Mb 的材料（如細菌和真菌）或 50Mb 以下的材料（如質(zhì)粒，cosmid， BAC，YAC 和 PAC 等），需要分別另購專門的+1 型預擴引物混合液和+3 型 EcoRI 引物（8 種）AFLP 引物對。
實驗外包:
1.基因組學：基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學分析
2.轉(zhuǎn)錄組學：microRNA芯片、LncRNA芯片、表達譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測：Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測：HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細胞分選
7.代謝組學：GC-MS、LC-MS、NMR
8.細胞及動物模型：原代細胞、細胞模型、動物模型構(gòu)建
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接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。