培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
以下是大鼠腎上皮細胞說明書的訂購信息:
產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號
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大鼠腎上皮細胞說明書
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5×105
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FSX6565
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產(chǎn)品描述:公司提供的原代細胞均來自新鮮組織,公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。公司提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司售后服務(wù)標準。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2,5-二甲氧基四氫呋喃anti- VDAC3 antibody
2,5-二甲氧基四氫呋喃anti- VDAC3 antibody
二氯甲烷anti- VDR antibody
二氯甲烷anti- VEGF antibody
二氯甲烷Anti- VEGF antibody
二氯甲烷anti- VEGFC antibody
二氯甲烷anti- VEGFR-1/FLT-1 antibody
二氯甲烷anti- VEGFR2 antibody
二氯甲烷anti- VEGFR3 antibody
二氯甲烷anti- Vertnin antibody
二氯甲烷anti- VEZT antibody
二氯甲烷anti- VGAT antibody
二氯甲烷anti- VGLL1 antibody
十二烷基苯磺酸anti- VGLL4 antibody
二乙烯三胺五乙酸anti- VGLUT1 antibody
大鼠腎上皮細胞說明書EMP(Human erythrocyte membrane protein) ELISA Kit 人紅細胞膜蛋白T型四氟三通接頭 24#Islet Antigen-2 Antibody,IA-2A ELISA Kit
EMAb(Mouse Endometrium Antibody) ELISA Kit 小鼠抗子宮內(nèi)膜抗體塑料洗瓶 500mlislet cell antibody,ICA ELISA Kit
EMAb(Human eye muscle antibody) ELISA Kit 人抗眼肌抗體橡皮筋insulin autoantibodies,IAA ELISA Kit
EMAb(Human Endometrium Antibody,EMAb ) ELISA Kit 人抗子宮內(nèi)膜抗體干燥器 300mmProinsulin,PI ELISA Kit
EMAb ELISA Kit 大鼠抗子宮內(nèi)膜抗體Ph試紙 1-14insulin-like 3,INSL3 ELISA Kit
EMA(Human Epithelial membrane antigen) ELISA Kit 人上皮膜抗原大口三角燒瓶 500mlIGFBP7 ELISA Kit
EMA IgA(Mouse anti-Endomysial Antibody IgA) ELISA KIT 小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA直三口燒瓶 500mlinsulin-like growth factor binding protein 5,IGFBP-5 ELISA Kit
EMA IgA(Human anti-Endomysial Antibody IgA) ELISA Kit 人抗肌內(nèi)膜抗體IgA具塞三角燒瓶 500mlIGFBP-4 ELISA Kit
EMA IgA ELISA Kit 大鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA茄型燒瓶 500ml 24口 磨口IGFBP-3 ELISA Kit
EM-2(Human endomorphin-2) ELISA Kit 人內(nèi)嗎啡肽-2茄型燒瓶 250ml 24口 磨口IGFBP-2 ELISA Kit
EL(Mouse Endothelial lipase) ELISA Kit 小鼠內(nèi)皮脂肪酶短管標準漏斗 40mmIGFBP-1 ELISA Kit
EL(Human EuglobulinLysis) ELISA Kit 人優(yōu)球蛋白短管標準漏斗 75mmIGF-2R ELISA Kit
EL(Human Endothelial lipase) ELISA Kit 人內(nèi)皮脂肪酶短管標準漏斗 150mmIGF-2 ELISA Kit
實驗報告:
一分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織完全被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
關(guān)鍵字: 大鼠腎上皮細胞;5×105;FSX6565;
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細胞株、原代細胞、細胞培養(yǎng)基、標準溶液產(chǎn)品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué),暨南大學(xué),南京工業(yè)大學(xué),曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標本齊全,有專門針對人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標本的試劑盒;另有針對各種動物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚)的科研試劑。
公司秉承“專注品質(zhì)、信守承諾、積極溝通、創(chuàng)新服務(wù)”的企業(yè)文化積極參與生物領(lǐng)域的技術(shù)創(chuàng)新和技術(shù)服務(wù),力求為我國科研事業(yè)更好的,更專業(yè)的服務(wù)!
公司售后服務(wù)宗旨:有質(zhì)量問題可申請退換,有技術(shù)疑問可隨時給于解答,一對一的客服服務(wù),客戶的需求也是我們不斷的更新服務(wù)。