PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線(xiàn)放線(xiàn)桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng):布氏桿菌(BS)核酸定量試劑盒
英文名稱(chēng):詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
編號(hào): FSP2901
分類(lèi):核酸檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
數(shù)據(jù)采集:
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時(shí),吸收光譜在 471nm,結(jié)合 DNA 時(shí)的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
以 Cps 陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。再以待測(cè)樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過(guò)待測(cè)樣品的 Ct 值計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。
Human MTPAP(Poly(A) RNA polymerase, mitochondrial) ELISA KitHuman FAM19A5 ELISA Kit反式-4-羥基-L-脯氨酸甲酯鹽酸鹽人體SOCS-1基因甲基化檢測(cè)試劑盒
Human HOGA1(Probable 4-hydroxy-2-oxoglutaRate aldolase, mitochondrial) ELISA KitHuman FAM20 ELISA KitL-環(huán)丙基甘氨酸人體SOCS-3基因甲基化檢測(cè)試劑盒
Human ZNF654(Zinc finger protein 654) ELISA KitHuman FAM3C(Family With Sequence Similarity 3 Member C) ELISA KitL-環(huán)丙基甘氨酸人體hMLH1基因甲基化檢測(cè)試劑盒
Human ERN1(Serine/threonine-protein kinase/endoribonuclease IRE1) ELISA KitHuman FANCA(Fanconi anemia group A protein)L-環(huán)丙基甘氨酸人體c-fos基因甲基化檢測(cè)試劑盒
Human TNN(Tenascin-N) ELISA KitHuman FARSB(Phenylalanine--tRNA ligase beta subunit) ELISA KitL-賴(lài)氨酸二鹽酸鹽大鼠PGES基因甲基化檢測(cè)試劑盒
Human HBP1(HMG box-containing protein 1) ELISA KitHuman FBXW4(F-box and WD repeat domain containing 4) ELISA KitL-賴(lài)氨酸二鹽酸鹽大鼠COX-1基因甲基化檢測(cè)試劑盒
Human TSPAN14(Tetraspanin-14) ELISA KitHuman FNIP1(Folliculin-interacting protein 1) ELISA KitL-賴(lài)氨酸二鹽酸鹽小鼠p16基因甲基化檢測(cè)試劑盒
Human HIST2H2BE(Histone H2B type 2-E) ELISA KitHuman FOXA2(Forkhead box protein A2) ELISA Kit卵磷脂大鼠p16基因甲基化檢測(cè)試劑盒
布氏桿菌(BS)核酸定量試劑盒FITC-C6-DEVD-FMK20mg 1003043-34-2Rat Anti-Thrombin Ⅲ, AT-Ⅲ Elisa KitHPLC98%FITC-C6-DEVD-FMK20mgFA進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)牛奶和乳制品中乳酸菌檢測(cè)和增菌培養(yǎng)英文名稱(chēng):Cyclomethicone 4200mg重組人 ARL2BP / BART1 蛋白 (His 標(biāo)簽)特價(jià)促銷(xiāo)123048-17-996T胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%FITC-C6-DEVD-FMK20mgFA58632-95-4高端化學(xué)試劑Human desmogleins 1, DGS-E1 Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)沙門(mén)氏菌分離培養(yǎng)英文名稱(chēng):Cyclomethicone 5200mg重組人 CARHSP1 蛋白 (His 標(biāo)簽)61328-41-496T胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%FITC-C6-LEHD-FMK20mgOVX1123333-53-9高端化學(xué)試劑Human CA724 Elisa Kit
FITC-C6-LEHD-FMK20mg 1003043-40-0Rat Anti-Thrombin Ⅲ, AT-Ⅲ Elisa KitHPLC98%FITC-C6-LEHD-FMK20mgOVX1進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)沙門(mén)氏菌分離培養(yǎng)英文名稱(chēng):Cyclomethicone 5200mg重組人 CARHSP1 蛋白 (His 標(biāo)簽)61328-41-496T胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%FITC-C6-LEHD-FMK20mgOVX1123333-53-9高端化學(xué)試劑Human CA724 Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)分離志賀氏菌屬和沙門(mén)氏菌英文名稱(chēng):Cyclomethicone 6200mg重組人 ING4 蛋白 (His 標(biāo)簽)特價(jià)供應(yīng)178468-00-396T胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Ac-IETD-AFC20mgTPPA123333-53-9高端化學(xué)試劑Human CA724 Elisa Kit
Ac-IETD-AFC20mg 1003043-40-0Rat neuropeptide Y, NP-Y Elisa KitHPLC98%Ac-IETD-AFC20mgTPPA進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)分離志賀氏菌屬和沙門(mén)氏菌英文名稱(chēng):Cyclomethicone 6200mg重組人 ING4 蛋白 (His 標(biāo)簽)特價(jià)供應(yīng)178468-00-396T胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Ac-IETD-AFC20mgTPPA123333-53-9高端化學(xué)試劑Human CA724 Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定和分離培養(yǎng),沙門(mén)氏菌分離培養(yǎng)英文名稱(chēng):20mg重組人 AKR1C2 蛋白 (His 標(biāo)簽)現(xiàn)貨促銷(xiāo)91590-76-096T載脂蛋白A2(APOA2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Ac-IETD-AMC 20mgCT-IgG123333-53-9高端化學(xué)試劑Human neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL Elisa Kit
Ac-IETD-AMC 20mg 1003-04-9Rat neuropeptide Y, NP-Y Elisa KitHPLC98%Ac-IETD-AMC 20mgCT-IgG進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定和分離培養(yǎng),沙門(mén)氏菌分離培養(yǎng)英文名稱(chēng):20mg重組人 AKR1C2 蛋白 (His 標(biāo)簽)現(xiàn)貨促銷(xiāo)91590-76-096T載脂蛋白A2(APOA2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC98%Ac-IETD-AMC 20mgCT-IgG123333-53-9高端化學(xué)試劑Human neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)致病性腸桿菌的分離英文名稱(chēng):20mg重組人 RCAS1 / EBAG9 蛋白 (His 標(biāo)簽)特價(jià)促銷(xiāo)118525-37-496T脂聯(lián)素(ADP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Ac-IETD-CHO20mgJNK123333-53-9高端化學(xué)試劑Human neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL Elisa Kit
Ac-IETD-CHO20mg 1003-04-9Rat Growth Hormone Releasing Peptide, GHRP Elisa KitHPLC95%Ac-IETD-CHO20mgJNK進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)致病性腸桿菌的分離英文名稱(chēng):20mg重組人 RCAS1 / EBAG9 蛋白 (His 標(biāo)簽)特價(jià)促銷(xiāo)118525-37-496T脂聯(lián)素(ADP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Ac-IETD-CHO20mgJNK123333-53-9高端化學(xué)試劑Human neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)病源標(biāo)本和其他標(biāo)本中甘露醇陽(yáng)性金黃色葡萄球菌的選擇性分離英文名稱(chēng):Malic Acid 500mg重組人 MID1IP1 蛋白 (His 標(biāo)簽)53584-43-396T腫瘤壞死因子α(TNFα)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Z-IETD-pNA20mgSMAD-36066-82-6高端化學(xué)試劑Human nonsmall cell lung cancer/Lung tumor Antigen, LTA Elisa Kit
Z-IETD-pNA20mg 1003-04-9Rat Growth Hormone Releasing Peptide, GHRP Elisa KitHPLC95%Z-IETD-pNA20mgSMAD-3進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)病源標(biāo)本和其他標(biāo)本中甘露醇陽(yáng)性金黃色葡萄球菌的選擇性分離英文名稱(chēng):Malic Acid 500mg重組人 MID1IP1 蛋白 (His 標(biāo)簽)53584-43-396T腫瘤壞死因子α(TNFα)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Z-IETD-pNA20mgSMAD-36066-82-6高端化學(xué)試劑Human nonsmall cell lung cancer/Lung tumor Antigen, LTA Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)假單胞菌屬分離培養(yǎng)英文名稱(chēng):Diacetylated Monoglycerides200mg重組人 B3GALTL 蛋白 (His 標(biāo)簽)特價(jià)供應(yīng)83104-86-396T脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(CETP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%D-氨基蟲(chóng)熒光素20mgmgs6066-82-6高端化學(xué)試劑Human nonsmall cell lung cancer/Lung tumor Antigen, LTA Elisa Kit
D-氨基蟲(chóng)熒光素20mg 100306-33-0Rat Gelsolin Elisa KitHPLC95%D-氨基蟲(chóng)熒光素20mgmgs進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)假單胞菌屬分離培養(yǎng)英文名稱(chēng):Diacetylated Monoglycerides200mg重組人 B3GALTL 蛋白 (His 標(biāo)簽)特價(jià)供應(yīng)83104-86-396T脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(CETP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%D-氨基蟲(chóng)熒光素20mgmgs6066-82-6高端化學(xué)試劑Human nonsmall cell lung cancer/Lung tumor Antigen, LTA Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)霉菌分離培養(yǎng)和霉菌酵母菌計(jì)數(shù)英文名稱(chēng):Monoglycerides125mg重組人 Lysozyme 2 / LYZL2 蛋白 (His 標(biāo)簽)現(xiàn)貨促銷(xiāo)83104-87-496T神經(jīng)型一氧化氮合酶(NOS1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Z-DEVD-AFC 20mgVEGF-Ab6066-82-6高端化學(xué)試劑Human tumor marker DR-70 for lung cancer, DR-70TM Elisa Kit
Z-DEVD-AFC 20mg 100306-33-0Rat Gelsolin Elisa KitHPLC95%Z-DEVD-AFC 20mgVEGF-Ab進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)霉菌分離培養(yǎng)和霉菌酵母菌計(jì)數(shù)英文名稱(chēng):Monoglycerides125mg重組人 Lysozyme 2 / LYZL2 蛋白 (His 標(biāo)簽)現(xiàn)貨促銷(xiāo)83104-87-496T神經(jīng)型一氧化氮合酶(NOS1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Z-DEVD-AFC 20mgVEGF-Ab6066-82-6高端化學(xué)試劑Human tumor marker DR-70 for lung cancer, DR-70TM Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)沙門(mén)氏菌分離培養(yǎng)英文名稱(chēng):25mg重組人 IL22 / IL-22 / Interleukin 22 蛋白特價(jià)促銷(xiāo)167882-66-896T轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGFβ1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Z-DEVD-AMC 20mgCXCL56066-82-6高端化學(xué)試劑Human tumor marker DR-70 for lung cancer, DR-70TM Elisa Kit
Z-DEVD-AMC 20mg 100306-33-0Rat receptor activator of nuclear factor kappa B ligand, RANKL Elisa KitHPLC95%Z-DEVD-AMC 20mgCXCL5進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)沙門(mén)氏菌分離培養(yǎng)英文名稱(chēng):25mg重組人 IL22 / IL-22 / Interleukin 22 蛋白特價(jià)促銷(xiāo)167882-66-896T轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGFβ1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Z-DEVD-AMC 20mgCXCL56066-82-6高端化學(xué)試劑Human tumor marker DR-70 for lung cancer, DR-70TM Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)用于梭菌增菌培養(yǎng)英文名稱(chēng):Piroctone Olamine 200mg重組人 LFA-3 / CD58 蛋白 (His 標(biāo)簽)87064-16-296T丙酮酸脫氫酶酸酶(PDP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Z-DEVD-pNA20mgTPOR56-12-2高端化學(xué)試劑Human fetal sulfoslycoprotein antigen, FSA Elisa Kit
Z-DEVD-pNA20mg 100306-34-1Rat receptor activator of nuclear factor kappa B ligand, RANKL Elisa KitHPLC95%Z-DEVD-pNA20mgTPOR進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)用于梭菌增菌培養(yǎng)英文名稱(chēng):Piroctone Olamine 200mg重組人 LFA-3 / CD58 蛋白 (His 標(biāo)簽)87064-16-296T丙酮酸脫氫酶酸酶(PDP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Z-DEVD-pNA20mgTPOR56-12-2高端化學(xué)試劑Human fetal sulfoslycoprotein antigen, FSA Elisa Kit進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng)基及溶血試驗(yàn),梭菌的檢測(cè)英文名稱(chēng):Astemizole200mg重組人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白特價(jià)供應(yīng)1163728-89-996Tα2-纖溶酶抑制因子(α2PI)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)HPLC95%Z-IETD-AFC20mgGCMC-IgM56-12-2高端化學(xué)試劑Human fetal sulfoslycoprotein antigen, FSA Elisa Kit
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關(guān)鍵字: 布氏桿菌(BS);核酸定量試劑盒;48T;FSP2901;
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷(xiāo)售。主營(yíng)產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測(cè)試劑盒、分光光度法檢測(cè)試劑盒、熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷(xiāo)售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué),暨南大學(xué),南京工業(yè)大學(xué),曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標(biāo)本齊全,有專(zhuān)門(mén)針對(duì)人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標(biāo)本的試劑盒;另有針對(duì)各種動(dòng)物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚(yú))的科研試劑。
公司秉承“專(zhuān)注品質(zhì)、信守承諾、積極溝通、創(chuàng)新服務(wù)”的企業(yè)文化積極參與生物領(lǐng)域的技術(shù)創(chuàng)新和技術(shù)服務(wù),力求為我國(guó)科研事業(yè)更好的,更專(zhuān)業(yè)的服務(wù)!
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