PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱:雞痘病毒PCR 試劑盒
英文名稱:詳見說明書
編號: FSP2526
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
數(shù)據(jù)采集:
具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時,吸收光譜在 471nm,結(jié)合 DNA 時的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
小鼠支氣管上皮細胞Human ENPP2(Ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase family member 2) ELISA Kit2-雙環(huán)已基膦-2 ',6'-二異丙氧基聯(lián)苯腎動脈內(nèi)皮細胞
小鼠主動脈內(nèi)皮細胞Human PLG(Plasminogen) ELISA Kit4,6-二氯-5-嘧啶甲醛腎動脈平滑肌細胞
小鼠主動脈平滑肌細胞Human PPY(Pancreatic prohormone) ELISA Kit4,6-二氯-5-嘧啶甲醛氣管上皮細胞
小鼠主動脈外膜成纖維細胞Human AGRP(Agouti-related protein) ELISA Kit2,6-二甲基哌嗪氣道平滑肌細胞
小鼠自然殺傷T細胞Human SLPI(Secretory leukocyte protease inhibitor) ELISA Kit2,6-二甲基哌嗪支氣管上皮細胞
小鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞Human CDH5(Cadherin-5) ELISA Kit果糖二丙酮支氣管成纖維細胞
小鼠子宮平滑肌細胞Human APCS(Serum amyloid P-component) ELISA Kit果糖二丙酮Ⅱ型肺泡上皮細胞
豬甲狀腺細胞Human IFNW1(Interferon omega-1) ELISA KitD-丙氨酸甲酯鹽酸鹽肺成纖維細胞
雞痘病毒PCR 試劑盒Klebsiella pneumoniae subsp.pneumoniae ( ..Rabbit Anti-Goat IgM/HRP 辣根過氧化物酶標記的兔抗羊IgM 硬脂酸鎘硝基咪唑快速檢測試劑說明書
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Rabbit Anti-Goat IgM/Bio 生物素標記的兔抗羊IgM 甲亢平酮康唑(去屑洗發(fā)類)快速篩查試劑盒說明書
Naegleria italica De JonckheereRabbit Anti-Goat IgM/AP 堿性磷酸酶(AP)標記的兔抗羊IgM Cyprosulfamide銻化物的快速檢測試劑說明書
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Rabbit Anti-Goat IgM/Gold 膠體金標記的兔抗羊IgM 4-苯氧基苯甲酸糖皮質(zhì)激素快速篩查試劑說明書
frozenRabbit Anti-Goat IgM/Cy3 Cy3標記的兔抗羊IgM 1-甲基-3-苯基丙胺四環(huán)素快速篩查試劑說明書
Streptomyces mediocidicus (Labeda) Wellingt ..Rabbit Anti-Goat IgM/Cy5 Cy5標記的兔抗羊IgM 2-[[2-(二甲氨基)乙基]甲氨基]乙醇砷的快速檢測試劑說明書
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Rabbit Anti-Goat IgM/Cy5.5 Cy5.5標記的兔抗羊IgM 5-氨磺酰基-2-甲氧基苯甲酸鉛化合物快速檢測試劑說明書
Pseudomonas reptilivora Caldwell and RyersonRabbit Anti-Goat IgM/Cy7 Cy7標記的兔抗羊IgM 1-(嘧啶-2-基)-1H-吲哚氯霉素快速檢測試劑說明書
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關鍵字: 雞痘病毒;PCR試劑盒;50T;FSP2526;
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