PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱：鼻疽假單胞菌PCR檢測試劑盒
英文名稱：詳見說明書
編號： FSP2419
分類：PCR檢測試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集：
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時(shí)，吸收光譜在 471nm，結(jié)合 DNA 時(shí)的吸收光譜在 500nm，發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸，以 Ct 值為縱軸，通過待測樣品的 Ct 值計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。
大鼠胸大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，A7R5細(xì)胞anti- UCHL5 antibody角叉(菜)膠大鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元

大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞，INS-1細(xì)胞anti- UCHL5IP antibody角叉(菜)膠大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，EBMEC細(xì)胞

大鼠胰腺外分泌細(xì)胞，AR42J細(xì)胞anti- UCK1 antibody氯化銫大鼠腦血管周細(xì)胞，RBVP細(xì)胞

大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，ATR5細(xì)胞anti- UCK2 antibody氯化銫大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞

非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，H1792細(xì)胞anti- UCKL1 antibody香豆素大鼠皮膚成纖維細(xì)胞，RDF細(xì)胞

非洲綠猴腎細(xì)胞 SV40轉(zhuǎn)化，COS7細(xì)胞anti- UCMA antibody香豆素大鼠脾基質(zhì)細(xì)胞

非洲綠猴腎細(xì)胞，VERO細(xì)胞anti- UCN2 antibody3-氯-4-碘吡啶大鼠脾源性內(nèi)皮祖細(xì)胞

高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞，HCC-LM3細(xì)胞anti- UCP1 antibody3-氯-4-碘吡啶大鼠破骨細(xì)胞
鼻疽假單胞菌PCR檢測試劑盒Wu Zhuyu basephospho-NTRK2/TrkB (Tyr515)  磷酸化酪氨酸激酶B抗體3-異丙基-5-氨基異噁唑杏仁源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

Evodiaminephospho-TrkB (Tyr705)  磷酸化酪氨酸激酶B抗體N-苯基咔唑熊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

Wu ZhuyuTrk C  酪氨酸激酶C抗體(神經(jīng)生長因子受體的一種)4-溴-2-氟苯乙酸鱈魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

Body fatTrop-2  原肌球蛋白抗體2-氟-4-溴苯乙腈鴨源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

The CTRP2  酪氨酸酶相關(guān)蛋白2抗體2-氰基-4'-甲基聯(lián)苯羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

The fruit of FructusTRPC6  瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白6抗體1-Boc-3-羥甲基吡咯烷腰果源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

A vegetarianThioredoxin  硫氧還蛋白抗體3-(4-氯苯基)戊二酸單酰胺魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

Fructus BTRP1/gp75  酪氨酸酶相關(guān)蛋白1抗體2-氟-3-碘吡啶羽扇豆源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。