PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:猿猴錐蟲PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Trypanosoma simiaePCR
編號(hào): FSP2353
分類:PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集:
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時(shí),吸收光譜在 471nm,結(jié)合 DNA 時(shí)的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
以 Cps 陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測(cè)樣品的 Ct 值計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。
Rabbit Anti-dog IgG/FITCFITC標(biāo)記的兔抗狗IgG特價(jià)促銷anti- TIMMDC1 antibody1,2-環(huán)己二酸酐吲哚-3-甲酸
Rabbit Anti-dog IgG/Alexa Fluor 488Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗狗IgG特價(jià)促銷anti- TIMP-1 antibody1,2-環(huán)己二酸酐4-吡啶甲酰胺
Rabbit Anti-dog IgG/Alexa Fluor 555Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗狗IgG特價(jià)促銷anti- TIMP-2 antibody對(duì)氯苯乙酮異辛酸鈉
Rabbit Anti-Goat IgG/PE-CY5PE-CY5標(biāo)記的兔抗羊IgG特價(jià)促銷anti- Timp-3 antibody對(duì)氯苯乙酮異喹啉
Rabbit Anti-Goat IgG/APCAPC標(biāo)記的兔抗羊IgG特價(jià)促銷anti- TIMP-4 antibody氧化銅N-乙氧羰基鄰苯二甲酰亞胺
Rabbit Anti-Goat IgG/AP堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的兔抗羊IgG特價(jià)促銷anti- TIN2 antibody納米氧化銅2-乙氧基-1-乙氧碳?;?1,2-二氫喹啉
Rabbit Anti-Goat IgG/FITCFITC標(biāo)記的兔抗羊IgG特價(jià)促銷anti- TINAGL1 antibody納米氧化銅(S)-2-乙氧基-3-{4-[2-(4-甲磺?;交?-乙氧基-苯基]-丙酸
Rabbit Anti-Goat IgG/Cy3Cy3標(biāo)記的兔抗羊IgG特價(jià)促銷anti- TINAG-Specific antibody納米氧化銅乙氧基甲叉基氰乙酸乙酯
猿猴錐蟲PCR檢測(cè)試劑盒Rat Leptin receptor,LR/Ob-R ELISA試劑盒Rbms3 抑癌基因Rbms3抗體1,3-雙環(huán)己基巴比妥酸馬立克氏病病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒
Rat Leptin Soluble Receptor,sLR ELISA試劑盒RET/C ret 指狀蛋白R(shí)ET抗體3-羥基戊二酸二乙酯馬立克氏病病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒
Rat Leptin,LEP ELISA試劑盒 Phospho-Ret (Tyr905) 磷酸化指狀蛋白R(shí)ET抗體葉綠素銅鈉馬立克氏病病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
Rat Leptospira IgG,Lep IgG ELISA試劑盒 Phospho-Ret (Tyr1062) 磷酸化指狀蛋白R(shí)ET抗體3-溴-2-甲氧基-5-三氟甲基吡啶折光馬爾太蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
Rat leukemia inhibitory factor receptor,LIFR ELISA試劑盒 Resistin 抵抗素抗體反式-2-(3-甲氧基苯基)乙烯基硼酸頻那醇酯馬爾太蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒
Rat leukemia inhibitory factor,LIF ELISA試劑盒Resistin 抵抗素抗體(S)-3-芐氧基-1,2-丙二醇悉尼馬爾太蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
Rat Leukotriene B4,LT-B4 ELISA試劑盒RELMa/RELM alpha 抵抗素樣分子α抗體五溴甲苯牛捻轉(zhuǎn)胃蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
Rat Leukotriene C4,LT-C4 ELISA試劑盒RelB 核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體4,4,4-三氯乙酰乙酸乙酯蜂房蜜蜂球菌(歐洲蜂幼蟲腐臭病)探針法熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關(guān)鍵字: 猿猴錐蟲;PCR檢測(cè)試劑盒;50T;FSP2353;
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營(yíng)產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測(cè)試劑盒、分光光度法檢測(cè)試劑盒、熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
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