PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱:人免疫缺陷病毒型群PCR檢測試劑盒
英文名稱:Human Immunodeficiency Virus 1(HIV1M)1MRTPCR
編號: FSP1771
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時,吸收光譜在 471nm,結(jié)合 DNA 時的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
CCL3/MIP 1α巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α抗體特價促銷anti- IGSF11 antibody細(xì)胞肌酸激酶同工酶肌肉型(CK-MM)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒SCN2A抗體
CCL4/MIP-1 Beta巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β抗體特價促銷anti- IGSF2 antibody組織肌酸激酶同工酶肌肉型(CK-MM)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒SEL1L抗體
CCL5/RANTEST細(xì)胞特異性趨化因子抗體特價促銷anti- IGSF21 antibody體液肌酸激酶同工酶肌肉型(CK-MM)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒5-羥色胺轉(zhuǎn)運蛋白抗體
CCL6/C10嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白CCL6抗體特價促銷anti- IGSF8 antibody細(xì)胞肌酸激酶同工酶腦型(CK--BB)活性比色法定量檢測試劑盒鏈霉素抗體
CCL11/Eotaxin 1嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白抗體特價促銷anti- IHH antibody組織肌酸激酶同工酶腦型(CK--BB)活性比色法定量檢測試劑盒感覺神經(jīng)性耳聾常染色體隱性遺傳61抗體
CCL12/MCP5單核細(xì)胞趨化蛋白5抗體特價促銷anti- IIP45 antibody體液肌酸激酶同工酶腦型(CK--BB)活性比色法定量檢測試劑盒信號感應(yīng)增殖相關(guān)蛋白1抗體
CCL13/MCP-4單核細(xì)胞趨化蛋白4抗體特價促銷anti- IkB alpha antibody細(xì)胞肌酸激酶同工酶腦型(CK--BB)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒抗冠狀表面S蛋白抗體
CCL14/HCC-1嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白14抗體特價促銷anti- IkB alpha antibody組織肌酸激酶同工酶腦型(CK--BB)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒突觸素抗體/突觸相關(guān)蛋白-1
人免疫缺陷病毒型群PCR檢測試劑盒GloNaxTM 20/20 Luminometer Auto-InjectorLRCH4 富含亮氨酸重復(fù)家庭蛋白4抗體馬胃葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒Irisflorentin;次野鳶尾黃素
GloNaxTM 20/20 LuminometerGamma-Adaptin/γ-Adaptin 銜接蛋白γ抗體溶血葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒Ginsenoside Rb1;人參皂苷Rb1
pGL3-Promoter VectorNHLRC1 肌痙攣性癲癇病相關(guān)EPM2蛋白抗體人葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒Trans-Anethole;反式茴香腦
Reporter Lysis 5X BufferNHLRC2 非霍奇金淋巴瘤重復(fù)蛋白2抗體豬葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒Bezafibrate;苯扎貝特
pCAT?3-Enhancer VectorNHLRC3 非霍奇金淋巴瘤重復(fù)蛋白3抗體中間葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒Acetyl-trans-resveratrol;乙?;邹继J醇
pCAT?3-Basic VectorRanBP3 RAN結(jié)合蛋白3抗體路鄧葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒(-)-Gallocatechin gallate/GCG;沒食子兒茶素沒食子酸酯
pCAT?3-Promoter VectorMARCH1 膜相關(guān)環(huán)指蛋白1抗體尼泊爾葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒Crocin;西紅花苷
pCAT?3-Control VectorMARCH2 膜相關(guān)環(huán)指蛋白2抗體偽中間型葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒Flumequine;氟甲喹
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關(guān)鍵字: 人免疫缺陷病毒型群;PCR檢測試劑盒;50T;FSP1771;
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
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