PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱:鉛黃腸球菌PCR試劑盒
英文名稱:Enterococcus casseliflavusPCR
編號: FSP1606
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時,吸收光譜在 471nm,結(jié)合 DNA 時的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
PGBD1/Cerebral protein 4腦蛋白4抗體特價促銷anti- EXPH5 antibody冰凍切片制片預(yù)處理脫水液卵巢癌相關(guān)基因1抗體
PGBD3PGBD3蛋白抗體特價促銷anti- EXT2 antibody冰凍切片制片處理OCT包埋液氧化應(yīng)激誘導(dǎo)生長抑制因子1抗體
PGGT1β香葉烯基轉(zhuǎn)移酶1β抗體特價促銷anti- EXTL2 antibody細胞蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒-LEPTIN結(jié)腸癌過度表達蛋白1抗體
MYCBP2MYC結(jié)合蛋白2抗體特價促銷anti- EXTL3 antibody載玻片細胞蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒-LEPTIN卵巢癌免疫反應(yīng)抗原抗體
MURF3肌肉特定環(huán)指蛋白3抗體特價促銷anti- EYA1 antibody冰凍切片組織蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒-LEPTIN口腔癌高表達的蛋白1抗體
MMS2/EDPF1腸細胞分化相關(guān)因子1抗體特價促銷anti- EYA2 antibody石蠟切片組織蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒-LEPTIN氧化固醇結(jié)合蛋白4抗體
MKRN1/RNF61環(huán)指蛋白61抗體特價促銷anti- EYA3 antibody載玻片細胞蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒-LEPTIN抗細胞凋亡蛋白OLFM44抗體
MKRN2/RNF62環(huán)指蛋白62抗體特價促銷anti- EYA4 antibody冰凍切片組織蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒-LEPTIN固生蛋白M抗體
鉛黃腸球菌PCR試劑盒Human MGAT4C ELISA KitBAT3/BAG6 Bcl2相關(guān)抗凋亡基因6抗體四甲基氫氧化銨溶液格列喹進口/國產(chǎn)CAMKK2 鈣調(diào)蛋白激酶激酶β抗體含量:含量測定
Human mGluR1 ELISA KitCTNNBL1/Beta catenin like 1 β連環(huán)蛋白樣蛋白1抗體四甲基氫氧化銨溶液格列吡嗪進口/國產(chǎn)IMPDH1 肌苷單酸脫氫酶1抗體含量:含量測定
Human KLK8(Kallikrein-8) ELISA KitDATF1 死亡相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1抗體四氯化錫(IV) 五水合物4-[2-(5-吡嗪-2-酰氨)]磺酰進口/國產(chǎn)STK38 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶38抗體含量:檢查
Human MFSD7 ELISA KitTFDP2/DP2 轉(zhuǎn)錄因子E2F二聚體蛋白2抗體二硫化鎢核黃酸鈉進口/國產(chǎn)Phospho-Bcr(Tyr360) 酸化T淋巴細胞受體抗體含量:含量測定(HPLC)
Human mGluR2 ELISA KitEAF2 睪酮調(diào)節(jié)細胞凋亡誘導(dǎo)和腫瘤抑制基因抗體二縮三丙二醇二丙烯酸酯(stabilized with MEHQ)吉非羅齊進口/國產(chǎn)MIRK/Dyrk1B 雙特異性酪氨酸酸化調(diào)節(jié)激酶1B含量:含量測定
Human MFSD8 ELISA KitFLI1 尤文肉瘤FLI1蛋白抗體二縮三丙二醇二丙烯酸酯(stabilized with MEHQ)尿進口/國產(chǎn)KIST/UHMK1 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶KIST抗體(激酶相互作用與白血病相關(guān)因)含量:含量測定
Human MGAT4C ELISA KitMDMX MDM2樣P53蛋白結(jié)合抗體2,2'-硫代二乙酸高烏進口/國產(chǎn)NEK3 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶Nek3抗體含量:含量測定
Human MGAT1 ELISA KitTMUB1 跨膜和泛素樣結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體2,2'-硫代二乙酸酸依沙吖啶進口/國產(chǎn)TRIB2 MAPK調(diào)控蛋白TRB2抗體含量:含量測定
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關(guān)鍵字: 鉛黃腸球菌;PCR試劑盒;50T;FSP1606;
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