PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產品名稱:腸侵襲性大腸桿菌PCR試劑盒
英文名稱:Enterinvasive E.coli(EIEC)PCR
編號: FSP1600
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產品中所含的熒光染料在不結合DNA 時,吸收光譜在 471nm,結合 DNA 時的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
RanBP1RAN結合蛋白1抗體特價促銷anti- ESF1 antibodyHARRIS蘇木素復染試劑盒轉化神經突起蛋白抗體
RanBP2RAN結合蛋白2/核孔蛋白抗體特價促銷anti- ESPN antibodyGILLS蘇木素復染試劑盒NK細胞受體2C抗體
ASZ1錨定蛋白樣蛋白1抗體特價促銷anti- ESR2 antibodyMallory蘇木素(PTAH)復染試劑盒細胞核受體Rev-Erbα抗體
GDAP2神經節(jié)苷脂誘導分化相關蛋白2抗體特價促銷anti- ESR2 antibody甲苯酚紫(cresyl violet)復染試劑盒可溶性載質轉運蛋白22A17抗體
LRCH1富含亮氨酸重復家庭蛋白1抗體特價促銷anti- ESR2 antibody硫素(thionin)復染試劑盒神經肽Y1受體抗體
LRCH2富含亮氨酸重復家庭蛋白2抗體特價促銷anti- ESR2 Beta-3 antibody中性紅復染試劑盒醌氧化還原酶抗體
LRCH3富含亮氨酸重復家庭蛋白3抗體特價促銷anti- ESR2 Beta-6 antibody亞甲基藍(METHYLENE BLUE)復染試劑盒活化T細胞核因子1蛋白抗體
LRCH4富含亮氨酸重復家庭蛋白4抗體特價促銷anti- ESRP2 antibody淡綠(LIGHT GREEN)復染試劑盒神經細胞發(fā)育相關調控蛋白抗體
腸侵襲性大腸桿菌PCR試劑盒Human OPRM1(Mu-type opioid receptor) ELISA KitETHE1 乙基丙二酸腦病蛋白抗體β-四氫萘酮鹽酸醇進口/國產CIKS 核因子NFκB激活蛋白1抗體含量:含量測定用
Human MPP3 ELISA KitGTSE1/G2 and S phase expressed 1 G2期/S期應答相關蛋白1抗體2,2':6',2''-三吡啶鹽酸美律進口/國產MYBBP1A/p53 activated protein 2 p53激活蛋白2抗體含量:含量測定
Human TLR9(Toll-like receptor 9) ELISA KitHIPK4 同源相互作用蛋白激酶4抗體2,2':6',2''-三吡啶鹽酸酚芐明進口/國產NCKAP1 膜相關的蛋白質HEM2抗體含量:含量測定
Human MPPE1 ELISA KitAMBRA1 自噬相關基因AMBRA1抗體2,2':6',2''-三吡啶氫醌進口/國產TMED4 跨膜蛋白TMED4抗體含量:供檢查用
Human MOGAT2 ELISA KitIBRDC2/RNF144B E3泛素蛋白連接酶144B抗體(環(huán)指蛋白144B)4-吲哚硼酸頻那醇酯鹽酸羅通定進口/國產NRIP 雄激受體復合物相關蛋白抗體(核受體相互作用蛋白)含量:鑒別
Human MOGAT1 ELISA KitJMY 連接介導調節(jié)蛋白抗體4-吲哚硼酸頻那醇酯鹽酸維拉帕米進口/國產PCMT1 天門冬氨酸轉移酶PCMT抗體含量:含量測定
Human MOK ELISA KitLRDD/PIDD 富含亮氨酸重復死亡結構域蛋白抗體4-吲哚硼酸頻那醇酯異維A酸進口/國產ERRB2/Estrogen Related Receptor beta 雌激相關受體β抗體含量:含量測定
Human MPPED1 ELISA KitMCG10 RNA相關結合蛋白MCG10抗體四乙基四氟硼酸銨貝諾酯進口/國產ESRRG/Estrogen Related Receptor gamma 雌激受體相關蛋白3抗體含量:含量測定
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關鍵字: 腸侵襲性大腸桿菌;PCR試劑盒;50T;FSP1600;
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細胞株、原代細胞、細胞培養(yǎng)基、標準溶液產品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產品。
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)先后與天津中醫(yī)學院、復旦大學、上海交通大學醫(yī)學院、上海交通大學、華東師范大學、第二軍醫(yī)大學、南京大學,暨南大學,南京工業(yè)大學,曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標本齊全,有專門針對人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標本的試劑盒;另有針對各種動物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚)的科研試劑。
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