PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱:牛肺線蟲PCR試劑盒
英文名稱:Dictyocaulus viviparusPCR
編號: FSP1564
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時,吸收光譜在 471nm,結(jié)合 DNA 時的吸收光譜在 500nm,發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
鸚鵡熱衣原體PCR試劑盒品牌以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸,以 Ct 值為縱軸,通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
EFHC1EFHC1蛋白抗體特價促銷anti- DYNC1I1 antibody動物細(xì)胞糖蛋白高碘酸希爾(PAS)法品紅亞硫酸鹽(FUCHSIN SULFITE)染色試劑盒SH2結(jié)構(gòu)域蛋白3A抗體
EFHC2EFHC2蛋白抗體特價促銷anti- DYNC1I2 antibody動物組織石蠟切片糖蛋白高碘酸希爾(PAS)法 品紅亞硫酸鹽(FUCHSIN SULFITE)染色試劑盒神經(jīng)上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化基因1抗體
EFHD1EFHD1蛋白抗體特價促銷anti- DYNC1LI1 antibody動物組織冰凍切片糖蛋白高碘酸希爾(PAS)法品紅亞硫酸鹽(FUCHSIN SULFITE)染色試劑盒螺旋環(huán)螺旋蛋白2抗體
EF-CBP2突觸結(jié)合蛋白2抗體特價促銷anti- DYNC1LI2 antibody動物全組織糖蛋白高碘酸希爾(PAS)法品紅亞硫酸鹽(FUCHSIN SULFITE)染色試劑盒細(xì)胞粘附分子3抗體(脊髓灰質(zhì)炎受體相關(guān)蛋白3)
IQCDIQCD蛋白抗體特價促銷anti- DYNC2LI1 antibody糖蛋白電泳高碘酸希爾(PAS)法品紅亞硫酸鹽(FUCHSIN SULFITE)染色試劑盒絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶Nek3抗體
IQCEIQCE蛋白抗體特價促銷anti- DYNLL2 antibody聚糖對氨基苯甲酸(2-AA)熒光標(biāo)記試劑盒天冬氨酸蛋白酶ASP4抗體
IQCCIQCC蛋白抗體特價促銷anti- DYNLRB1 antibody聚糖對氨基苯甲酰胺(2-AB)熒光標(biāo)記試劑盒核因子活化T細(xì)胞胞漿蛋白2抗體
IQCA1IQCA1蛋白抗體特價促銷anti- DYNLT1 antibody聚糖鄰氨基吡啶(2-AP)熒光標(biāo)記試劑盒核因子活化T細(xì)胞胞漿蛋白3抗體
牛肺線蟲PCR試劑盒Human Osteoglycin ELISA KitASMTY/HIOMT 松果體N甲基乙酰羥色胺抗體2-噻吩乙醇香蒲新苷進口/國產(chǎn)Salmonella paratyphi a 型副傷寒沙門氏菌抗體含量:HPLC≥98%
Human ORC5L ELISA KitGNAO1/G0 Protein alpha G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白O亞基A2抗體2-噻吩乙醇哈巴俄苷進口/國產(chǎn)Salmonella enteritidis/SE 腸炎沙門氏菌抗體含量:HPLC≥98%
Human ORC6 ELISA KitLPAP 淋巴細(xì)胞磷蛋白磷酸酶相關(guān)蛋白抗體2-噻吩乙醇哈巴苷進口/國產(chǎn)pig cholerae salmonella 豬霍亂沙門氏菌抗體含量:HPLC≥98%
Human OS9 ELISA KitPMA/Prostate Mucin Antigen 前列腺粘蛋白抗原抗體3,4,5-三甲氧基肉桂酸安格洛甙C進口/國產(chǎn)Duck salmonella 鴨沙門氏菌抗體含量:HPLC≥98%
Human OSBP ELISA KitSEMA4D/CD100 臂板蛋白4D抗體3,4,5-三甲氧基肉桂酸10-脫酰巴卡亭進口/國產(chǎn)USP3 去泛化酶3抗體含量:HPLC≥98%
Human OSBPL10 ELISA Kitp47-phox NADPH氧化酶活化蛋白p47抗體三(羥甲基)甲基甘氨酸知母皂苷BII進口/國產(chǎn)ATXN3L 小腦脊髓共濟失調(diào)蛋白3抗體含量:HPLC≥98%
Human OSBPL11 ELISA KitAnkyrin B/Ankyrin brain 錨定蛋白B抗體三(羥甲基)甲基甘氨酸知母皂苷A3進口/國產(chǎn)Endomucin 內(nèi)皮粘蛋白EMCN抗體含量:HPLC≥98%
Human OSBPL2 ELISA KitFOXN1 叉頭蛋白N1抗體三(羥甲基)甲基甘氨酸麥冬皂苷A進口/國產(chǎn)KLK3/Prostate Specific Antigen 激肽釋放酶3/舒血管3抗體含量:HPLC≥98%
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關(guān)鍵字: 牛肺線蟲;PCR試劑盒;50T;FSP1564;
上海撫生實業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.,China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測試劑盒、分光光度法檢測試劑盒、熒光定量PCR檢測試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
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