細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC法)
貨號(hào)：RS3010
規(guī)格：100T
保存：12個(gè)月有效。
產(chǎn)品內(nèi)容：
產(chǎn)品名稱 規(guī)格 Storage 
試劑(A): MDC Stain  1ml  -20℃ 避光 
試劑(B): 10×Wash buffer  20ml  4℃ 
試劑(C): Collection buffer  10ml  4℃ 
產(chǎn)品說(shuō)明：
自噬(autophagy)是細(xì)胞受到刺激后吞噬自身的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器，最終將吞噬物在溶酶體內(nèi)降解的過(guò)程，自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu)，內(nèi)含細(xì)胞質(zhì)、長(zhǎng)壽蛋白質(zhì)和異常蛋白聚集物，損傷或多余細(xì)胞器如線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體、病毒和細(xì)菌等。 
單丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine，MDC )是一種熒光色素，是嗜酸性染色劑，通常被用于檢測(cè)自噬體形成的特異性標(biāo)記染色劑，其檢測(cè)激發(fā)濾光片波長(zhǎng)355nm。阻斷濾光片波長(zhǎng)512nm。細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC法)，適用于培養(yǎng)細(xì)胞的自噬染色，又稱為MDC染色液，可與EB合用雙染。
自備材料：
熒光顯微鏡、低速離心機(jī)、EB 、載玻片、蓋玻片
操作步驟（僅供參考）：
(一)、MDC單獨(dú)染色： 
1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer至1×。 
2、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞1次，棄上清。 
3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至106/ml。 
4、 取適量90μl的細(xì)胞懸液至新的EP管中，加入10μl的MDC Stain，輕輕混勻。 
5、 室溫避光染色15～45min。 
6、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞2次，棄上清。 
7、 加入100μl的Collection buffer重懸細(xì)胞，滴加于載玻片上并加蓋玻片。 
8、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長(zhǎng)355nm，阻斷濾光片波長(zhǎng)512nm)，計(jì)數(shù)并拍照。 
(二)、與EB雙染色： 
1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer至1×。 
2、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞1次，棄上清。 
3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至106/ml。 
4、 取適量90μl的細(xì)胞懸液至新的EP管中，分別加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB染色液，輕輕混勻。
5、 滴加于在玻片上，室溫避光染色15～30min，加蓋玻片。 
6、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長(zhǎng)512nm)，計(jì)數(shù)并拍照。
染色結(jié)果：
正常細(xì)胞  細(xì)胞被均勻染成黃綠色熒光 
凋亡細(xì)胞  染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞核碎裂成點(diǎn)狀，被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒 
注意事項(xiàng)：
1、 MDC Stain和EB試劑有一定毒性，請(qǐng)小心操作。 
2、 吖啶橙染色常與EB染色合用，可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。 
3、 操作過(guò)程中應(yīng)注意減少試劑暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。 
4、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。