"CA46細胞:人burkitt淋巴瘤細胞系 細胞背景資料:該細胞源自Burkitt's淋巴瘤患者的B淋巴細胞,EBNA、Fc陰性。 細胞形態(tài):淋巴母細胞樣 細胞生長:懸浮 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:1:2傳代 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 細胞生長特性:懸浮生長 細胞培養(yǎng)方面注意的幾點:無菌意識要強:實驗進行前,超凈臺以紫外燈照射30分鐘滅菌,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面,并開啟超凈工作臺風扇運轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后,才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置,其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以70%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應在中央無菌區(qū)域,一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基:不同的細胞可能培養(yǎng)基不同,甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當時培養(yǎng)神經(jīng)干細胞,有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基,而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的,而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分,此時,我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:4℃冰箱全溶后再分裝,在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到56℃后,將血清放入,待溫度升高到56℃后計時,一般5分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須,一般不要作此熱處理,因為會造成沉淀物之顯著增多,且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。 凍存和復蘇的原則:慢凍快融》當細胞冷到零度以下,可以產(chǎn)生以下變化:細胞器脫水,細胞中可溶性物質(zhì)濃度升高,并在細胞內(nèi)形成冰晶。如果緩慢冷凍,可使細胞逐步脫水,細胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶;相反,結(jié)晶就大,大結(jié)晶會造成細胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復蘇過程應快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重結(jié)晶。慢凍程序》1.標準程序:采用細胞凍存器》當溫度在-25℃以上時,1~2℃/min;當溫度達-25℃以下時,5~10℃/min;當溫度達-100℃時,可迅速放入液氮中。2.簡易程序:將冷凍管(管口要朝上)放入紗布袋內(nèi),紗布袋系以線繩,通過線繩將紗布袋固定于液氮罐罐口,按每分鐘溫度下降1~2℃的速度,在40min內(nèi)降至液氮表面過夜,次晨投人液氮中。3.傳統(tǒng)程序:冷凍管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。細胞凍存方法:1.預先配制凍存液》(1)8%DMSO+細胞生長液(92%血清)2.取對數(shù)生長期細胞,經(jīng)胰酶消化后,加入適量凍存液,用吸管吹打制成細胞懸液(1×10(6)~5×10(6)細胞/ml)。3.加入1ml細胞于凍存管中,密封后標記冷凍細胞名稱和冷凍日期。液氮長期保存。保存細胞的復蘇方法:1.快速解凍》凍存細胞從液氮中取出后,立即放入37℃水浴中,輕輕搖動冷凍管,使其在1分鐘內(nèi)全部融化(不要超過3分鐘)。2.解凍后的細胞可直接接種到含完全生長培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶中直接進行培養(yǎng),24小時后再用新鮮完全培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液,以去除DMSO。3.如果細胞對冷凍保護劑特別敏感解凍后的細胞應先通過離心去除冷凍保護劑,然后再接種到含完全生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。 細胞培養(yǎng)相關(guān)問題總結(jié):冷凍管應如何解凍?取出冷凍管后,須立即放入37°C水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化,并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時,必須注意安全,預防冷凍管之爆裂;細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時,是否應馬上去除DMSO?除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細胞外,絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞),在解凍之后,應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中,待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可,如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題;可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活;可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活;培養(yǎng)細胞時應使用5%或10%CO2?或根本沒有影響?一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時,細胞培養(yǎng)時應使用10%CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時,則應使用5%CO2培養(yǎng)細胞。何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。培養(yǎng)基中是否須添加抗生素?除于特殊篩選系統(tǒng)中外,一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,培養(yǎng)基中不應添加任何抗生素。 RT4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-118-MG細胞、OLN 93細胞、SVOG細胞 H82細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FRTL-5細胞、H596細胞、OCM-1細胞 OE-33細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MEC1細胞、Hs 934.T細胞、KM12 SM細胞 NCI H747細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NKL細胞、HeLa-S3細胞、Colon 26細胞 EBTr (NBL-4)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hep3B細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-134-VI細胞、HHL5細胞 H1693細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC-14細胞、QGY7703細胞、NE1-E6E7細胞 UWB1.289+BRCA1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Capan 1細胞、MDA-MB-435細胞、SUM149細胞 C3H/10T1/2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JIMT-1細胞、SF763細胞、RTMC細胞 Vero 76 clone E-6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK HEP 01細胞、JEKO細胞、SKNSH細胞 RGC6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF-295細胞、MFE 296細胞、KYSE 180細胞 H4-II-E細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hmy.2 CIR細胞、PANC 203細胞、624細胞 J82細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Y1細胞、SW-480細胞、CAKI 1細胞 OEC19細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE671細胞、PE/CA-PJ34細胞、Mia PACA 2細胞 Baby Hamster Kidney 21細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2087細胞、DHBE細胞、H520細胞 H-2198細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KMS-11細胞、NCCIT細胞、JJN-3細胞 6-10B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-ChA-1細胞、OVCA8細胞、SU-86-86細胞 ECC-12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC10細胞、SCL1細胞、Lec1細胞 SBC-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SACC-LM細胞、Soleus clone 8細胞、253J-Bladder-V細胞 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No. 2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RBL 2H3細胞、Immortalized Human Hepatocytes細胞、OVCAR8/ADR細胞 Japanese Tissue Culture-39細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT-8細胞、Human Embryo Lung-1細胞、LLC-PK(1)細胞 H1770細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-209細胞、HuH1細胞、Ku812細胞 B16F0細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK-293-FT細胞、NCI H2106細胞、MLA144細胞 CACO2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PCI:SG231細胞、HFB細胞、GBCSD細胞 H1703細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DAKIKI Clone 1細胞、MDA1386細胞、CACO2細胞 RPE D407細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM115F細胞、MGHU3細胞、SW-480細胞 CWR22Rv1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2110細胞、Det 562細胞、HME-1細胞 M4e細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GBCSD細胞、JeKo 1細胞、H676B細胞 OCI-AML-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS-294T細胞、MHCC-97細胞、UMUC3細胞 H2023細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUPT-1細胞、Hmy.2 CIR細胞、H1651細胞 SHSY5Y細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1666細胞、MEF細胞、FL-83B細胞 GMK,BSC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE 85 ClF-5細胞、HEK-AD293細胞、HARA-B細胞 LoVo細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE 270細胞、SNU878細胞、NCI-H1105細胞 N2a細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MPP89細胞、Gejiu Lung Carcinoma-82細胞、SNU16細胞 NCIH1385細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P 815細胞、NCI H345細胞、Kobe university Oral Squamous Cell culture-2細胞 K562/ADR細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LCMS細胞、PG-4細胞、HSC-I細胞 SCC4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 201細胞、SMA 560細胞、Pt K2細胞 HN 4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTERA2細胞、EFM-192A細胞、NCI-H1915細胞 H-157細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U266 B1細胞、NCI-H1876細胞、Panc10.05細胞 3D4/21細胞系相關(guān)產(chǎn)品:32D CL3細胞、MNNG/HOS Cl #5細胞、TFH細胞 VMM39細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A498細胞、SK-ML2細胞、KCL22細胞 HOS-MNNG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GB1細胞、HUC細胞、H187細胞 NB.4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FHL 124細胞、SK-HEP-1細胞、Instituto Biologico-Rim Suino-2細胞 MDA-MB 453細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LoVo細胞、S-16細胞、IHH-4細胞 OE-33細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MEC1細胞、Mouse Colon 38細胞、M3 Clone M-3細胞 WERIRb1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD 841 CoN細胞、Mouse Bladder Tumor line-2細胞、Human Embryo Lung-1細胞 "
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