"RPMI-8226細(xì)胞:人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:來源于一位61歲的男性漿細(xì)胞瘤患者;可產(chǎn)生免疫球蛋白輕鏈,未檢測到重鏈。 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 細(xì)胞生長:懸浮 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:按1:2傳代,5-6小時可以看到細(xì)胞分裂 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 細(xì)胞生長特性:懸浮生長 細(xì)胞培養(yǎng)方面注意的幾點(diǎn):無菌意識要強(qiáng):實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,超凈臺以紫外燈照射30分鐘滅菌,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面,并開啟超凈工作臺風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后,才開始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株,以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置,其它個人實(shí)驗(yàn)用品用完應(yīng)立即拿出。實(shí)驗(yàn)用品以70%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在中央無菌區(qū)域,一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基:不同的細(xì)胞可能培養(yǎng)基不同,甚至不同的文獻(xiàn)可能對相同的細(xì)胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當(dāng)時培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞,有文獻(xiàn)就選用neurobase培養(yǎng)基,而我的實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕亲隹寡趸脱趸矫娴?,而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分,此時,我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:4℃冰箱全溶后再分裝,在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到56℃后,將血清放入,待溫度升高到56℃后計(jì)時,一般5分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份去活化。除非必須,一般不要作此熱處理,因?yàn)闀斐沙恋砦镏@著增多,且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清(包括不同批次)對細(xì)胞的影響。 我們都知道世界宇宙浩瀚無極,除了我們知道的地球、太陽、月球、銀河系以外還有好多其他宇宙行星,這樣的世界對于很多人來說很陌生稀奇甚至無法想象,這樣的世界同樣也是我們無法觸摸的,然而還有一個微觀的世界也是我們無法接觸的,這個就是——細(xì)胞里的微觀世界。對于很多人來說,除了從書本上簡單了解植物細(xì)胞的知識以外,在行業(yè)外人的意識里,細(xì)胞還是一個讓人一頭霧水的詞語,甚至都是一個無形的存在,更別提描述和看見這個東西,但是對于行業(yè)內(nèi)的生物科學(xué)研究者和醫(yī)學(xué)研究者,這是個經(jīng)常被運(yùn)用到的必需之物,用宇宙世界的包含于被包含的關(guān)系把細(xì)胞的微觀世界剖析開來,讓我們了解到細(xì)胞是什么樣的東西及應(yīng)用和未來世界細(xì)胞在生命中的重要作用。細(xì)胞發(fā)炎——心臟疾病;DNA受損——癌癥;細(xì)胞能量衰退——腎功能衰竭、關(guān)節(jié)炎、帕金森氏;老化蛋白堆積——糖尿病、癡呆癥、心腦血管疾?。凰械乃ダ虾图膊《际菣C(jī)體內(nèi)細(xì)胞開的損傷、衰老和死亡造成的。所以細(xì)胞在科學(xué)研究和醫(yī)學(xué)研究中有著重要的應(yīng)用作用,尤其是原代細(xì)胞,它是從機(jī)體組織中分離提取培養(yǎng),它可以作為一種科研材料幫助研究者進(jìn)行項(xiàng)目研究和課題研究,也可以幫助醫(yī)學(xué)者進(jìn)行疾病研究和疾病試驗(yàn),試想從人體組織中分離培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)過醫(yī)學(xué)藥物的試驗(yàn)再運(yùn)用到人體身上,無論從功效還是結(jié)果上效果都是。 細(xì)胞傳代時消化的問題:可以這樣說,對于需要消化傳代的細(xì)胞,每一次的消化都是對這個細(xì)胞存活與否,狀態(tài)好與不好最至關(guān)重要的考驗(yàn)。很多同學(xué)都遇到過這個問題,自己養(yǎng)的細(xì)胞開始的幾代長的還挺好的,可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞,狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題,可以非??隙ǖ卣f,你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細(xì)胞受到較大損傷了。所以,越長越差。在消化的過程中,你加入胰酶后,所有細(xì)胞都在被胰酶消化著,但是我們忽視了一個問題就是,細(xì)胞的生長狀態(tài)是不一樣的,每一個細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的,有的貼壁牢固,有的貼壁沒有那么牢固的,所以,讓所有的細(xì)胞消化同樣的時間對細(xì)胞是不公平的,他們受到了差別待遇當(dāng)然會有脾氣啊。我后來對消化的方法進(jìn)行了改良。爭取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。(以難消化細(xì)胞為例);具體操作:1)首先不加胰酶,倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍,(這是前奏,即為步,目的是將漂浮著的死細(xì)胞之類盡量洗掉。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍,這一遍是把貼壁不牢固的細(xì)胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍,兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步(你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng),以與后面胰酶消化過的細(xì)胞對比觀察看誰長的更好一點(diǎn)就知道該細(xì)胞對胰酶的敏感度了。)3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體,加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍,吸掉棄之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察,待細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶與干凈子彈頭里備用,加入新培養(yǎng)基開始吹打,吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(你也可以傳入新瓶培養(yǎng),以與后面及前面的做對比。)這是第三步。4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進(jìn)去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細(xì)胞。當(dāng)然你也可以用新的胰酶,如果你們那比較富裕的話,呵呵。繼續(xù)鏡下觀察,待剩余細(xì)胞間隙明顯,細(xì)胞獨(dú)立開來的時候,吸掉胰酶,加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)(根據(jù)實(shí)際情況你自己把握)。這是第四步。其實(shí)還可以有第五步,對于特別難消化的細(xì)胞和對胰酶特別敏感的細(xì)胞的話,你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細(xì)胞更好的狀態(tài),更漂亮的樣子,沒辦法,你必須分多批多次消化,這樣才能限度地將胰酶對細(xì)胞的損傷降到最低,保證細(xì)胞的狀態(tài)能夠。當(dāng)然了,如果細(xì)胞是屬于那種很容易消化的細(xì)胞,像RAW264.7,僅僅第二步就搞定了。就沒必要第三步第四步了。這個是需要你在實(shí)驗(yàn)中能夠自己用心去體會的。建議你接受一個新細(xì)胞時把各步消化的細(xì)胞分別培養(yǎng)起來做比較,去摸索好細(xì)胞對胰酶的要求。便于你后續(xù)實(shí)驗(yàn)的開展。將細(xì)胞消化分成這幾步,除了是為了避免胰酶對細(xì)胞的損傷之外,還有一個更重要的作用就是,可以程度地把細(xì)胞吹打成單個單個的狀態(tài),不成片不連體。 624mel細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO206細(xì)胞、K-562細(xì)胞、HUT-28細(xì)胞 Mc Coy細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FHs74 Int細(xì)胞、526細(xì)胞、KASUMI1細(xì)胞 MESSA-DX5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GLC-15細(xì)胞、PLA801D細(xì)胞、OCI-AML2細(xì)胞 Panc_05_04細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JIMT1細(xì)胞、H2172細(xì)胞、McARH7777細(xì)胞 CNE1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OE33細(xì)胞、KMS-11細(xì)胞、HEK-293細(xì)胞 SKCol1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AtT 20細(xì)胞、NCIH250細(xì)胞、OVCAR-8/ADR細(xì)胞 BMSC/hBMSCs細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-398細(xì)胞、H-820細(xì)胞、251MG細(xì)胞 HPAF-I細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KM.12細(xì)胞、HC11 Mammary Epithelium細(xì)胞、Hs 832(C).T細(xì)胞 H250細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VM-CUB1細(xì)胞、RERF-LC-MS細(xì)胞、NU-GC-2細(xì)胞 NSC-34細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CMK細(xì)胞、FRhK-4細(xì)胞、SKRC 39細(xì)胞 NKT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MASMC細(xì)胞、Tca8113細(xì)胞、SKMEL5細(xì)胞 Molm14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL78細(xì)胞、HCE-2 [50.B1]細(xì)胞、HS 445T細(xì)胞 KYSE 180細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2108細(xì)胞、OVCAR-8細(xì)胞、SBC-3細(xì)胞 HMEC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTEP-sm 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