"SGC-7901細胞：人胃癌細胞系
細胞背景資料：１９７９年建系；這株細胞源自一位５６歲女性胃腺癌患者的淋巴結轉移灶。RPMI-１６４０培養(yǎng)１２天，細胞開始生長，首次傳代１０天；３１個月中傳代１８６代。免疫抑制的ICR小鼠、乳犬皮下移植成功，家兔、乳犬眼前房移植成功；淋巴結轉移，從小鼠皮下侵襲至肌層。
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２傳代
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
細胞生長特性：貼壁生長
解凍細胞常見實驗問題分析及推薦解決方法：在解凍凍存細胞時，發(fā)現(xiàn)會出現(xiàn)存活率低、大量細胞碎片及生長緩慢等問題，究竟是什么原因導致，我們該怎么進行解決？以下是國內外細胞培養(yǎng)專家針對解凍細胞實驗問題，總結的一些解決方案！出現(xiàn)低存活率的可能原因及推薦解決方案如下：１)解凍過程中細胞裂解，推薦的解決方案：可預期到一定量的細胞死亡，因此細胞的濃度應足夠高，考慮到這一損失。起始濃度為１*１０(６)至１*１０(７)細胞/毫升；２)解凍過程中的問題，推薦的解決方案：在-７０℃至-８０℃下保存冷凍的培養(yǎng)物，保存時間為１-５天，但這不是保存的方法。在３７℃充分解凍后應立即開始培養(yǎng)；３)對冷凍液過敏，推薦的解決方案：A.完全或部分更換培養(yǎng)基，減少培養(yǎng)基中冷凍液的量。在２４小時后更換培養(yǎng)液體可全部去除冷凍液。B.留出更多時間供培養(yǎng)物恢復。有時細胞需要幾周時間才能形成單層或密集的懸浮物，取決于冷凍時細胞的年齡或傳代次數(shù)或在生長階段中的位置。冷凍的條件在對數(shù)期；４)被冷凍的原種細胞的年齡或冷凍時培養(yǎng)物的年齡，推薦的解決方案：解凍最近冷凍的細胞。細胞處于冷凍狀態(tài)的時間越長，存活率越低。檢查冷凍細胞的時間和方法。在冷凍時細胞應處于對數(shù)期。
細胞培養(yǎng)更好經驗詳解：1)收到細胞，首先要鏡檢：觀察細胞形態(tài)是否正常，對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好，觀察細胞密度，有疑議及時咨提供細胞的技術人員。 由于運輸?shù)臅r間或者溫度的變化，很多貼壁細胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時會有點不一樣，主要是貼壁牢固問題。比如293T，平時貼壁就不是很牢，在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面，會發(fā)生大片的脫落，細胞聚集在一起，但是細胞生長還是正常的，通過離心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的貼壁生長。2)當通過上一步的觀察，細胞初步沒有問題時，進行下一步操作。當收到的細胞密達到80%左右時，則處理如下：棄除瓶中大部分培養(yǎng)基，僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基；或更換新鮮的培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中，隨后每天觀察。 細胞在低于正常生長溫度情況下，會調整為靜止期，或者慢速生長期，恢復37度的環(huán)境至少3個小時左右，才能重新調整到接近對數(shù)生長期的狀態(tài)，在對數(shù)生長期進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率，和細胞的存活率。3)如果經步觀察發(fā)現(xiàn)細胞密度超過90%，并且細胞狀態(tài)很好時，則復溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應依據(jù)不同的細胞而定。對于生長比較快，狀態(tài)穩(wěn)定，不易受外界影響的細胞可以一次多傳幾瓶；對于生長較慢，細胞比較薄，狀態(tài)容易波動的細胞類型，一次少傳些，每瓶細胞密度大些，便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細胞，次處理也可以依照第二種情況。
常規(guī)的細胞實驗(增殖，凋亡，遷移，分化之類的)，受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話(難消化細胞例外)。但少數(shù)實驗，比如病毒包裝，對細胞代數(shù)，對細胞狀態(tài)要求極高。這個時候，胰酶消化，就是潤洗，都會對細胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多，細胞包裝能力就會逐漸下降(當然也有其它因素影響包裝效率)。這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液(不是EDTA液)即可。這些鹽溶液通過影響ECM相關酶的活性，來使得細胞脫離基質附著表面，但不切割任何蛋白；EDTA的作用。許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白，trypsin切割ECM的一些負責粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca離子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者對付特別難消化的細胞，添加多一些EDTA，就是這個道理。一般不要試圖延長消化時間(如果１０min還消化不徹底的話)，而應該想其它辦法；PBS洗滌。消化之前用PBS洗滌，是常見的操作，因為Serum含有抑制trypsin的蛋白。但這里面也有學問可以講，對于一些難消化細胞，那么可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因為這些離子也會抑制trypsin的活性。但對于絕大部分胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化的細胞，不需要配制如此溶液。
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