"BCaP-37細胞：人乳腺癌細胞系
細胞背景資料：源自一位４８歲女性乳癌患者。
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：消化３-５分鐘，１：２,３天內可長滿
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
細胞生長特性：貼壁生長
解凍細胞出現(xiàn)大量細胞碎片的可能原因及推薦解決方案如下：１)冷凍時細胞密度過低：推薦的解決方案：縮短解凍過程中的時間。將細胞取出后，立即將凍存管浸入在３７℃的水浴中，并震蕩至全部融化，然后迅速地轉移到預熱的培養(yǎng)基中；２)不適當?shù)睦鋬鲞^程：推薦的解決方案：解凍不同冷凍室總的試管。確保在凍存過程中采用的適當?shù)募夹g，并確保使用了適量和適合的冷凍液。出現(xiàn)生長緩慢的可能原因及推薦解決方案如下：１)培養(yǎng)瓶的大?。阂话憬鉀Q方案是一些細胞在培養(yǎng)基中傾向于維持一定的密度。將培養(yǎng)物轉移到較小的培養(yǎng)瓶中，使細胞密度上升；如，根據培養(yǎng)基的體積，從T７５培養(yǎng)瓶轉移到２或３個T２５培養(yǎng)瓶中；２)細胞密度過低：通常解決方案是提高未來冷凍物種細胞的凍存密度，或使用較小的培養(yǎng)容器，或解凍多個試管來進行培養(yǎng)。
在細胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細胞生長角度來說，針對細胞培養(yǎng)過程中生長不好、甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養(yǎng)細胞生長不好》可能原因：細胞本身的狀態(tài)》1)細胞傳代次數(shù)多，細胞老化；2)細胞的接種量：接種量過低，細胞生長緩慢；3)細胞傳代時間過晚：細胞中毒，影響傳代后的細胞生長；4)胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細胞死亡；時間過短，細胞未完全分離而成團，細胞死亡；5)細胞的凍存與復蘇：慢凍速融。污染：1)支原體污染；2)霉菌污染；培養(yǎng)基或血清：1)更換血清或培養(yǎng)基之前未進行驗證；2)選擇的培養(yǎng)基是否合適；3)培養(yǎng)基配制是否準確無誤；培養(yǎng)環(huán)境：1)CO2供應是否正常；2)培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確；解決方法：根據以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案》1)注意細胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等；2)避免產生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）；3)要用合適的血清或培養(yǎng)基，經過驗證；4)注意實驗室的環(huán)境；二、培養(yǎng)細胞死亡》可能原因：1)培養(yǎng)箱內無CO2；2)培養(yǎng)箱內溫度波動太大；3)細胞凍存或復蘇過程中損傷；4)培養(yǎng)液滲透壓不正確；5)培養(yǎng)液中有毒代謝產物堆積；解決方法：1)檢測培養(yǎng)箱內CO2；2)檢查培養(yǎng)箱內溫度；3)取新的保存細胞種；4)檢測培養(yǎng)液滲透壓；5)換入新鮮培養(yǎng)液。
常規(guī)的細胞實驗(增殖，凋亡，遷移，分化之類的)，受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話(難消化細胞例外)。但少數(shù)實驗，比如病毒包裝，對細胞代數(shù)，對細胞狀態(tài)要求極高。這個時候，胰酶消化，就是潤洗，都會對細胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多，細胞包裝能力就會逐漸下降(當然也有其它因素影響包裝效率)。這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液(不是EDTA液)即可。這些鹽溶液通過影響ECM相關酶的活性，來使得細胞脫離基質附著表面，但不切割任何蛋白；EDTA的作用。許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白，trypsin切割ECM的一些負責粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca離子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者對付特別難消化的細胞，添加多一些EDTA，就是這個道理。一般不要試圖延長消化時間(如果１０min還消化不徹底的話)，而應該想其它辦法；PBS洗滌。消化之前用PBS洗滌，是常見的操作，因為Serum含有抑制trypsin的蛋白。但這里面也有學問可以講，對于一些難消化細胞，那么可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因為這些離子也會抑制trypsin的活性。但對于絕大部分胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化的細胞，不需要配制如此溶液。
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