"Calu-3細胞：人肺腺癌細胞系
細胞背景資料：該細胞是從一名２５歲的白人男性肺腺癌患者的胸水中分離建立的；該患者曾使用過環(huán)磷酰胺、博來霉素、阿霉素進行治療。該細胞接種至裸鼠可成瘤；可作轉染宿主。
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：消化２０分鐘。１：２。５-６天長滿。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系
細胞生長特性：貼壁生長
體內細胞培養(yǎng)及其操作步驟：【瘤細胞懸液接種】１)無菌選取生長良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或對數生長期培養(yǎng)瘤細胞；２)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經８０～１００目篩網過濾成細胞懸液；３)培養(yǎng)細胞應用PBS洗兩遍；４)計數并調整細胞濃度至１０７～１０８／ml；５)常規(guī)消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(０.１ml／部位，＞１０６細胞)。初次接種成功率低，細胞數盡可能多一些；６)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，最后固定為一個相對穩(wěn)定的時間?！靖顾龅慕⑴c腹水瘤的接種】將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細胞，將這種腹水反復傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時，腹水常呈血性(含大量紅細胞)，反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下。１)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細胞離心和洗滌，進行細胞計數；２)消毒動物，左下腹穿刺接種１０６腹水瘤細胞；３)接種腹水瘤細胞后約７~１２d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用９號針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽３~５ml；４)抽取的腹水經３０００rpm離心１５min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?br /> 細胞培養(yǎng)更好經驗詳解：1)收到細胞，首先要鏡檢：觀察細胞形態(tài)是否正常，對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好，觀察細胞密度，有疑議及時咨提供細胞的技術人員。 由于運輸的時間或者溫度的變化，很多貼壁細胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時會有點不一樣，主要是貼壁牢固問題。比如293T，平時貼壁就不是很牢，在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面，會發(fā)生大片的脫落，細胞聚集在一起，但是細胞生長還是正常的，通過離心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的貼壁生長。2)當通過上一步的觀察，細胞初步沒有問題時，進行下一步操作。當收到的細胞密達到80%左右時，則處理如下：棄除瓶中大部分培養(yǎng)基，僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基；或更換新鮮的培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中，隨后每天觀察。 細胞在低于正常生長溫度情況下，會調整為靜止期，或者慢速生長期，恢復37度的環(huán)境至少3個小時左右，才能重新調整到接近對數生長期的狀態(tài)，在對數生長期進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率，和細胞的存活率。3)如果經步觀察發(fā)現細胞密度超過90%，并且細胞狀態(tài)很好時，則復溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應依據不同的細胞而定。對于生長比較快，狀態(tài)穩(wěn)定，不易受外界影響的細胞可以一次多傳幾瓶；對于生長較慢，細胞比較薄，狀態(tài)容易波動的細胞類型，一次少傳些，每瓶細胞密度大些，便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細胞，次處理也可以依照第二種情況。
細胞傳代培養(yǎng)(消化法)標準操作規(guī)程【原理】細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續(xù)生長，同時也將細胞數量擴大，就必須進行傳代(再培養(yǎng))。傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化后才能分瓶?！静牧虾驮噭浚?無菌生理緩沖液(PBS)；２)胰酶-EDTA溶液(０.０５%胰酶-０.５３mM EDTA-４Na): 以１０ml分裝于１５ ml無菌離心管中，保存于–２０℃，使用前放在３７℃水槽回溫；３)新鮮培養(yǎng)基；４)無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶【傳代前準備操作】１)預熱培養(yǎng)用液：把已經配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入３７℃水浴鍋內預熱；２)用７５％酒精擦拭經過紫外線照射的超凈工作臺和雙手；３)正確擺放使用的器械：保證足夠的操作空間，不僅便于操作而且可減少污染；４)點燃酒精燈：注意火焰不能太小；５)準備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶；６)取出預熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內；７)從培養(yǎng)箱內取出細胞：注意取出細胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面，再在鏡下觀察細胞；８)打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時要在酒精燈上燒口消毒。
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