"CCD-112CoN 人結腸成纖維細胞系

細胞背景資料：詳見相關文獻介紹 

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣 

細胞培養(yǎng)方面注意的幾點：無菌意識要強：實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射３０分鐘滅菌，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風扇運轉數(shù)分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以７０%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約４５°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當時培養(yǎng)神經干細胞，有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基，而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:４℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀。熱滅活是指５６℃，３０分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到５６℃后，將血清放入，待溫度升高到５６℃后計時，一般５分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。 

細胞生長：貼壁 

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源 

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細胞產品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支) 

可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)好與不好至關重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺好的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非?？隙ǖ卣f，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣的，大家爭取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。（以難消化細胞為例），具體操作：1)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉）。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更好一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了）3)吸干凈瓶內剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據實際情況把握）。 

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。 

細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 

細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分 

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如何把細胞養(yǎng)的形態(tài)更好更漂亮。１.不同的細胞，喜歡的環(huán)境是不一樣的。這個不僅僅是說培養(yǎng)基的不同，還有就是細胞生長的空間密度問題。有一些細胞是數(shù)量多一點比較好生長，生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內皮細胞。而有一些是細胞是數(shù)量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較好，譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞，生長速度非常得快，貼壁速度很快，所以傳代時就應該留很少量的細胞，這樣細胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長，而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候，細胞形態(tài)基本上就會差了，老化的會比較多，對后期實驗結果是不好的。所以在養(yǎng)細胞的時候應該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。２.對于有些人總是會遇到養(yǎng)的細胞形態(tài)怎么都不好的問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞，如果細胞形態(tài)不好，（或者細胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等）可以在傳代的時候進行如下操作：首先，倒掉舊的培養(yǎng)基，加入３ml新的培養(yǎng)基（有無血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入３ml的培養(yǎng)基，進行預吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過一遍，然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。（巨噬細胞我們只吹打，不消化的）；其次，把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，按時間點觀察細胞貼壁情況。１０分鐘觀察一次，２０分鐘，３０分鐘觀察一次。選擇一個時間點，已經有部分細胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入３ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。我稱之為“二傳”。呵呵。如果一次效果還不理想，可重復多次。直到找到細胞完美形態(tài)。其中要注意，結合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。３.關于培養(yǎng)瓶內加入培養(yǎng)基的量的問題。這個是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細胞的。并不是小的玻璃方瓶１２ml，大方瓶１４ml的。有些細胞反而是培養(yǎng)基少一點相反細胞形態(tài)會長得比較好。（可能也是競爭很大，有優(yōu)勝劣汰吧。呵呵。）對于生長速度快的細胞，易生長的細胞加少一點培養(yǎng)基細胞形態(tài)會更好。但是要注意換液掌握。４.關于選擇培養(yǎng)瓶的問題。個人發(fā)現(xiàn)生長速度快的細胞在玻璃瓶內生長的狀態(tài)會比一次性相對好一些。而對于同一種細胞，在其生長旺盛快速的時期在玻璃瓶內的生長狀態(tài)也比內好。這可能是因為比玻璃瓶更容易貼壁。生長速度快的細胞在這種相對“更安逸”的環(huán)境里反而長得狀態(tài)不如玻璃瓶好。所以對于生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài)，比玻璃瓶會好，對于生長速度慢的細胞，玻璃瓶則會更好。同樣，對于同一種細胞，在其生長速度慢的時候，會好一點，比如剛剛復蘇的時候，或者原代培養(yǎng)的時候。而在其生長旺盛的時候，玻璃瓶則相對會好一點。 

細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書 

H1355細胞系相關產品：NBL-3細胞、SN-12C細胞、NCI-H250細胞 

HuP-T4細胞系相關產品：LAN-6細胞、OCI/AML-2細胞、EL4細胞 

C-33 A細胞系相關產品：ST2細胞、KRC-Y細胞、VP 229細胞 

RT 112細胞系相關產品：PLC/PRF5細胞、H-2291細胞、KYSE0520細胞 

COR L279細胞系相關產品：LAN-1細胞、BLO 11細胞、MDA-157細胞 

MB-49細胞系相關產品：HT29細胞、KOPN-8細胞、UC-3細胞 

H19-7細胞系相關產品：GM07404細胞、OCI AML2細胞、SCL-II細胞 

PANC-08-13細胞系相關產品：SUM102細胞、JROECL21細胞、KYSE 150 KYSE150 Kyse150 KY150

細胞 

BS-C-1細胞系相關產品：U87-MG細胞、RCC-4細胞、H-1693細胞 

JB-6 Cl 30細胞系相關產品：U-343 MG細胞、EC-109細胞、V79細胞 

CP70細胞系相關產品：HUTU80細胞、HEL-92-1-7細胞、NCI-N87細胞 

102PT細胞系相關產品：KMH2細胞、COLO 16細胞、C2C12細胞 

GBC-SD細胞系相關產品：Alexander細胞、Hx-147細胞、PL5細胞 

SKMel-5細胞系相關產品：WC00097細胞、Hepatoma-22細胞、HL-1細胞 

EB3 [Human Burkitt lymphoma]細胞系相關產品：Okayama University Medical School-27細胞、H929細胞、SW480E細胞 

CEMC1細胞系相關產品：DK-MG細胞、H9c2 (2-1)細胞、MDCK.2細胞 

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SVGp12細胞系相關產品：H-2066細胞、SW-1573細胞、TE354T細胞 

VK2 (E6/E7)細胞系相關產品：COLO-320細胞、GM0637細胞、CNE1-LUC細胞 

LS1034細胞系相關產品：NRK-52E細胞、NCL-H548細胞、SK-N-F1細胞 

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H-508細胞系相關產品：LLCPK1細胞、NCIH727細胞、University of Arizona Cell Culture-812細胞 

Vero-76細胞系相關產品：Jurkat Clone E6-1細胞、KMS26細胞、NCIH1694細胞 

LAN1細胞系相關產品：HCE細胞、SKG-IIIa細胞、Mac-1細胞 

GL-261細胞系相關產品：Hs-746T細胞、NCI-H1623細胞、CCLP-1細胞 

RS 4;11細胞系相關產品：MPC5細胞、H-1404細胞、D-341 Med細胞 

WI38細胞系相關產品：NCIH748細胞、WC00059細胞、CCRF/CEM-C7細胞 

CHO-ori細胞系相關產品：FL 62891細胞、X63-Ag 8.6.5.3細胞、HCASMC細胞 

C-6細胞系相關產品：MRC9細胞、JIMT細胞、GM-637細胞 

HM細胞系相關產品：HCC1143細胞、P388D1細胞、SK-Mel 1細胞 

RCC4細胞系相關產品：KM933細胞、NCI-SNU-423細胞、HEK 293-F細胞 

MDCC-MSB-1細胞系相關產品：C-33-A細胞、RDES-1細胞、NCI-H1623細胞 

HL-60細胞系相關產品：Panc-813細胞、CX-1細胞、KNS62細胞 

HAEC細胞系相關產品：Baby Hamster Kidney 21細胞、A-72細胞、DU4475細胞 

GM00637B細胞系相關產品：Neukoplast細胞、L-M(TK-)細胞、alphaTC1 Clone 6細胞 

LS123細胞系相關產品：HS-68細胞、A-172 MG細胞、HSMC細胞 

FRTL5細胞系相關產品：HPASMC細胞、HARA-B細胞、FDCP-1細胞 

PNT1A細胞系相關產品：RPE-1細胞、HCCLM6細胞、HLEC-SRA 01/04細胞 

BC-028細胞系相關產品：FHC細胞、H446細胞、IAR20細胞 

MZCRC1細胞系相關產品：PNT-1A細胞、YD15細胞、HLF-a細胞 

YH細胞系相關產品：NL-20細胞、Virginia Mason Research Center-Lung Cancer D細胞、NCIH596細胞 

Panc 03.27細胞系相關產品：Scott細胞、PANC-04-03細胞、MAVER1細胞 

L- cell細胞系相關產品：UMR 106細胞、32D CL3細胞、SK MEL-28細胞 

G402細胞系相關產品：MOLP2細胞、TE353.SK細胞、PANC403細胞 

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MDA.MB.435細胞系相關產品：B-cell with DC Morphology細胞、PCI-4.2細胞、Liver-02細胞 

NALM6細胞系相關產品：Ramos (RA)細胞、IPEC-J2細胞、CTV1細胞 

HRA 19細胞系相關產品：Rat Lung Epithelial-6-T-antigen Negative細胞、NCI-H2444細胞、L02細胞 

102PT細胞系相關產品：KMH2細胞、COLO 16細胞、C2C12細胞 

NCIH1666細胞系相關產品：MDCK (NBL-2)細胞、SUDHL10細胞、Murine Lung Epithelial-12細胞 

HCC9204細胞系相關產品：BEL 7402細胞、RKO_AS45細胞、Roswell Park Memorial Institute 7666細胞 

CCD 841 CoN細胞系相關產品：SUD4細胞、DF-1細胞、GM05887A細胞 

NKM-1細胞系相關產品：ZYM-SVEC01細胞、SCL-1細胞、Roswell Park Memorial Institute 1788細胞 

WEHI-231細胞系相關產品：NCI-H2170細胞、CCC-HPF-1細胞、SW-900細胞 

OV 1063細胞系相關產品：Pt K2 (NBL-5)細胞、B6Tert-1細胞、RL細胞 

HCC 2185細胞系相關產品：H-1930細胞、P3X63Ag8-6-5-3細胞、N2a細胞 

G519細胞系相關產品：NCI H747細胞、OVCAR-432細胞、GTL 16細胞 

H-2195細胞系相關產品：H-226細胞、Hs683細胞、D324 Med細胞 

Hs-746T細胞系相關產品：NOZAWA細胞、CCRF/CEM-C7細胞、EAhy926細胞 

EHEB細胞系相關產品：KYSE-270細胞、SK-N-DZ細胞、Rh30細胞 

Hs683細胞系相關產品：293-F細胞、LK 2細胞、Line 697細胞 

MESSA Dx5細胞系相關產品：PASMCS細胞、CCD19-Lu細胞、U251細胞 

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Clone Y1細胞系相關產品：COR-L23/P細胞、RPE1-hTERT細胞、H1876細胞 

TF1細胞系相關產品：NB1-RGB細胞、SHEP1細胞、BetaTC6細胞 

PNEC30細胞系相關產品：Ly7細胞、FHC細胞、BCPAP細胞 

SKBr3細胞系相關產品：Hs-281-T細胞、HFTF細胞、OAW 42細胞 

NK62a細胞系相關產品：OV-1063細胞、ZYM-SVEC01細胞、PG-LH7細胞 

H2170細胞系相關產品：MBdSMC細胞、IM95細胞、MADB 106細胞 

NCI-H1869細胞系相關產品：LS-1034細胞、ssMCF7細胞、TGHAVSMC細胞 

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RH35細胞系相關產品：Hs606T細胞、AN3 CA細胞、HEK-AD 293細胞 

H-1792細胞系相關產品：Detroit 562細胞、NPC-TW 039細胞、DKMG細胞 

C-33 A細胞系相關產品：ST2細胞、L-6TG細胞、U-CH1細胞 

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