"SNU-398 Thawing人肝癌細胞系
細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
細胞形態(tài):上皮細胞樣
SNU-398 Thawing人肝癌細胞系
細胞生長:貼壁
體內細胞培養(yǎng)及其操作步驟:【瘤細胞懸液接種】1)無菌選取生長良好(有光澤,淡紅色)瘤組織或對數生長期培養(yǎng)瘤細胞;2)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨,經80~100目篩網過濾成細胞懸液;3)培養(yǎng)細胞應用PBS洗兩遍;4)計數并調整細胞濃度至107~108/ml;5)常規(guī)消毒后,于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(0.1ml/部位,>106細胞)。初次接種成功率低,細胞數盡可能多一些;6)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期,以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短,最后固定為一個相對穩(wěn)定的時間。【腹水瘤的建立與腹水瘤的接種】將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位,引起腹水,腹水中含有瘤細胞,將這種腹水反復傳代,即可成為腹水瘤。初次傳代時,腹水常呈血性(含大量紅細胞),反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下。1)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細胞離心和洗滌,進行細胞計數;2)消毒動物,左下腹穿刺接種106腹水瘤細胞;3)接種腹水瘤細胞后約7~12d,待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部,用9號針頭抽取腹水,也可行腹部解剖后,用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml;4)抽取的腹水經3000rpm離心15min,收集上清,分裝凍存?zhèn)溆谩?/span>
細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
細胞產品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法:1:2傳代
傳代的操作步驟注意事項:1)操作前要洗手,進入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。2)點燃酒精燈,操作在火焰附近進行,耐熱物品要經常在火焰上燒灼,金屬器械燒灼時間不能太長,以免退火,并冷卻后才能夾取組織,吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼,以免燒焦形成碳膜。3)操作動作要準確敏捷,但又不能太快,以防空氣流動,增加污染機會。4)不能用手觸已消毒器皿的工作部分,工作臺面上用品要布局合理。5)瓶子開口后要盡量保持45℃斜位。6)吸溶液的吸管等不能混用。貼壁細胞傳代的操作步驟:1)吸除培養(yǎng)瓶內舊培養(yǎng)液。2)向瓶內加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許,以能覆滿瓶底為限。3)置溫箱中2-5分鐘,當發(fā)現(xiàn)細胞質回縮,細胞間隙增大后,立即終止消化。4)吸除消化液,向瓶內注入Hanks液數毫升,輕輕轉動培養(yǎng)瓶,把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細胞時,動作要輕,以免把已松動的細胞沖掉流失,如用胰蛋白酶液單獨消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液沖洗,直接加入培養(yǎng)液。5)用吸管吸取營養(yǎng)液輕輕反復吹打瓶壁細胞,使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。6)計數板計數后,把細胞懸液分成等份分裝入數個培養(yǎng)瓶中,置溫箱中培養(yǎng)。懸浮細胞傳代的操作步驟:1)吸出細胞培養(yǎng)液,放入離心管中,離心1000rpm5分鐘。2)吸掉上清液,加入適量之新鮮培養(yǎng)基,混和均勻后,依稀釋比例轉移至新的培養(yǎng)瓶中,以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系
SNU-398 Thawing人肝癌細胞系
細胞生長特性:貼壁生長
我常看到一個比較復雜的四步消化法,這個挺有意思,我也是次聽說,應該是網友自己發(fā)展出來的方法,很有參考價值。但我估計這個方法可能對付少數非常怪異的細胞才需要這么復雜的程序。我目前養(yǎng)過的近300株細胞里面,還沒遇到這么怪異的。比如Caco2其實是很好消化的細胞,不需要胰酶孵育即可,只是有點成片分布。不要以為成片分布是自己沒養(yǎng)好,這個視細胞而定。如果和標準形態(tài)不一致,那可能是自己沒消化好導致的,但如果消化方法正確,仍然成片分布,甚至完全吹打成單細胞懸液,貼壁后仍然成片分布,這是細胞的特性,是因為貼壁過程中重新聚集了。這個時候你拼了命要去讓它均勻分布,你的細胞之后會對你越來越不好;比較難消化的細胞(潤洗方法5min還不能消化),就以colon cancer為例,比如HCT15, LS411和KM12,這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100 mm dish,一次最多加入500ul,就足夠了,一般我加300ul。即使這樣難消化的細胞,一般不超過5min,即可見細胞成片移動,就應該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候,比如tsDC細胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動。
細胞形態(tài)特性:上皮樣
Vero-76細胞系相關產品:Jurkat Clone E6-1細胞、KMS26細胞、NCIH1694細胞
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WISH細胞系相關產品:OLN 93細胞、OVCA433細胞、SW-1116細胞
MDA-MB-175-VII細胞系相關產品:SW-1463細胞、KOSC2細胞、NB.4細胞
NCI-H1155細胞系相關產品:H-146細胞、MDCK-II細胞、RSMC細胞
NCIH2227細胞系相關產品:OK細胞、RCC-JF細胞、HMrSV5細胞
Adeno-293細胞系相關產品:VMRC-LCD細胞、TSCC1細胞、8402細胞
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UMR106細胞系相關產品:TGW-nu細胞、Panc203細胞、Mouse INsulinoma 6細胞
266 Bl細胞系相關產品:GM03671C細胞、KM-H2細胞、SACC-83細胞
KNS62細胞系相關產品:LLC-MK-2細胞、AML12細胞、SKNEP-1細胞
ACCM細胞系相關產品:Rat Skin 1細胞、143B細胞、SW626細胞
PANC1005細胞系相關產品:H-2198細胞、N-87細胞、MOLM-16細胞
BC-022細胞系相關產品:EL-4細胞、COLO 206F細胞、RPMI-7666細胞
KYSE 70細胞系相關產品:REC細胞、MFC細胞、NCI-SNU-C2B細胞
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UMR106細胞系相關產品:TGW-nu細胞、Panc203細胞、Mouse INsulinoma 6細胞
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NCM460細胞系相關產品:Metastatic Variant 522細胞、Panc-02細胞、NCI-H774細胞
MC38細胞系相關產品:QG56細胞、H-1238細胞、OCM1A細胞
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SNU-398 Thawing人肝癌細胞系
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SNU-398 Thawing人肝癌細胞系
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