"TH1 Adherent小鼠調(diào)節(jié)T細胞系
細胞背景資料:調(diào)節(jié)T細胞
細胞形態(tài):上皮細胞樣
細胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項:1.取細胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。此項尤為重要,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會造成細胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng),第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復(fù)蘇,結(jié)果無異常。5.細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細胞分裝的問題:試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復(fù)蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。
細胞生長:貼壁
細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
TH1 Adherent小鼠調(diào)節(jié)T細胞系
細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支)
為了防止因污染或技術(shù)原因使長期培養(yǎng)功虧一簣,考慮到培養(yǎng)細胞因傳代而遲早會出現(xiàn)變異,有時因寄贈、交換和購買,培養(yǎng)細胞從一個實驗室轉(zhuǎn)運到另一個實驗室,的策略是進行低溫保存。這對于維持一些特殊細胞株的遺傳特性極為重要?,F(xiàn)簡要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點。細胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時,細胞內(nèi)的酶活性均己停止,即代謝處于完全停止狀態(tài),故可以長期保存。細胞低溫保存的關(guān)鍵,在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi),水晶呈針狀,極易招致細胞的嚴重損傷。凍存細胞的復(fù)蘇:凍存細胞較脆弱,要輕柔操作。凍存細胞要快速融化,并直接加入完全生長培養(yǎng)基中。若細胞對凍存劑(DMSO或甘油)敏感,離心去除凍存培養(yǎng)基,然后加入完全生長培養(yǎng)基中。直接鋪板方法:取出貯存細胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生長培養(yǎng)基鋪板細胞。1ml凍存細胞使用10~20ml完全生長培養(yǎng)基。進行活細胞計數(shù),細胞接種應(yīng)該至少在3×10(5)活細胞/ml;培養(yǎng)細胞12到24小時,更換新鮮的完全生長培養(yǎng)基,去除凍存劑。離心方法:取出貯存細胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml凍存細胞加入到大約25ml完全生長培養(yǎng)基,輕輕混勻;以大約80x離心2到3分鐘;棄去上清。在完全生長培養(yǎng)基輕輕再次懸浮細胞,并且進行活細胞計數(shù)。細胞鋪板,細胞接種應(yīng)該至少為3×10(5)活細胞/ml。細胞的分化:一個成年人全身細胞總數(shù)約1012個,可以區(qū)分為200多種不同類型的細胞:形態(tài)結(jié)構(gòu),代謝,行為,功能等各不相同。追根溯源,這么多種細胞均來自一個受精卵細胞。所以,通常把發(fā)育過程中,細胞后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程稱為細胞分化。細胞分化發(fā)生在胚胎階段,也發(fā)生在胎兒出生以后,乃至成人階段。例如,人體血細胞的產(chǎn)生和分化,這個過程在人的一生中一直持續(xù)著。由旺盛生長不斷分裂的細胞,轉(zhuǎn)入分化,通常從細胞周期中G1期開始時一個確定的點G0點“逃逸”出細胞周期。旺盛生長分裂的細胞和各種分化了的細胞,它們的基因表達和代謝活動各不相同。
IGR.OV1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT 1197細胞、C38細胞、GM17346細胞
PLC/PRF/5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos.G6.C10細胞、HEY A8細胞、OS-RC-2細胞
751-NA-15細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SMA-560細胞、SW 480細胞、KYSE 70細胞
細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。
細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
NCIH2405細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-865細胞、SHG 44細胞、143TK-細胞
MG-63細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TEV-1細胞、NRK-52E細胞、FK81細胞
alphaTC clone 6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:L細胞、PK(15)細胞、Hs 683.T細胞
細胞生長特性:懸浮
TH1 Adherent小鼠調(diào)節(jié)T細胞系
細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書
培養(yǎng)細胞真的不難,最關(guān)鍵幾點:1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的,真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細胞計數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細胞的實驗穿插進行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實驗;5)個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細胞不能進去太多人,避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗教訓(xùn)可以分享呢?1)嚴格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套;3)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進去);5)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。
SNUC2B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PaTu 8988 S細胞、H-727細胞、C-28/I2細胞
BEL-7402細胞系相關(guān)產(chǎn)品:5-8F細胞、P-36細胞、Epithelioma Papulosum Cyprini細胞
HuPT3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LU165細胞、624-mel細胞、COLO-738細胞
NG-108-15細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TC-1 [Mouse lung]細胞、CL11細胞、BNL CL.2細胞
G-292, clone A141B1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 766.T細胞、SCC-1395細胞、MT4細胞
BEL 7402細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HTR-8/SVneo細胞、SW403細胞、NT-2細胞
EU-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FUOV1細胞、ZYM-DIEC02細胞、HEK-293F細胞
Leydig細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CTSC-3細胞、BPH-1細胞、MC3T3-L1細胞
PE CA PJ34細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-716細胞、H-2286細胞、U-hth74細胞
TGW-I-nu細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NOK細胞、N1E-115細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-157細胞
DHL-8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NS-1細胞、CAL-51細胞、PTK 2細胞
MDAMB-231細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KTCTL140細胞、SUM 149PT細胞、PC3-M細胞
SF17細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC2157細胞、OCI-Ly3細胞、SK-N-BE-2細胞
TH1 Adherent小鼠調(diào)節(jié)T細胞系
SL-29細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MB39細胞、LED-WiDr細胞、E0771細胞
SKNF1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HAC-84細胞、SNU638細胞、AtT-20細胞
4175細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR433細胞、MDCK II細胞、Human Melanoma Cell Bowes細胞
4175細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR433細胞、MDCK II細胞、Human Melanoma Cell Bowes細胞
IPAM-WT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mink細胞、Hs 822.T細胞、BEND細胞
ACC-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:4T1-LUC細胞、HRA 19細胞、SUM-149細胞
WEHI-3B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Okayama University Medical School-23細胞、H1385細胞、GA-10-Clone-4細胞
SKN-AS細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1238細胞、Glioma-261細胞、Earle's L cells細胞
F56 [Human neoplasm]細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CL-11細胞、PANC-02-03細胞、TE-85 clone 5細胞
NALM 6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-1386細胞、BT-549細胞、EC-109細胞
BC3 H1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-27細胞、Los Angeles Prostate Cancer-4細胞、LAC細胞
NCIH2135細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MES-SA-Dx5細胞、OE-21細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-468細胞
NCIH1651細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KG-1細胞、HuT 78細胞、NCIH1792細胞
BGC-823細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Pa17C細胞、7404細胞、H-2106細胞
Opossum Kidney細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK RC 52細胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-1細胞、NHA細胞
CEK細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BEAS 2B細胞、HS 445T細胞、Calu-1細胞
HPAF-I細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KM.12細胞、HC11 Mammary Epithelium細胞、Hs 832(C).T細胞
7860細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPAF II細胞、IMR90細胞、RS411細胞
UCLA-SO-M20細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-2935細胞、Henrietta Lacks cells細胞、BC-3H-1細胞
H-820細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC-3M IE8細胞、HNE-2細胞、Onda 11細胞
OVISE細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC1954BL細胞、H2087細胞、HM細胞
HCCLM6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LM3細胞、639 V細胞、Capan 2細胞
GB1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 680N細胞、HL1細胞、rUCMSCs細胞
HeLa229細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RT-BM-1細胞、CA-46細胞、OCI-Ly 7細胞
HTh-74細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mel-MeWo細胞、HSC-I細胞、YD-15細胞
HCEC-12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM-637細胞、HSF2細胞、Normal Rat Kidney-49F細胞
HNE-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KOPN-8細胞、CL1.0細胞、Hepa 1-6細胞
SW 1271細胞系相關(guān)產(chǎn)品:J774 A1細胞、T-T細胞、COLO-699細胞
H-1838細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SVG p12細胞、H1734細胞、WM-239A細胞
H4IIE細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1975細胞、M109細胞、C4I細胞
MN60細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-679細胞、VMRCRCZ細胞、WISH細胞
HTh-74細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mel-MeWo細胞、HSC-I細胞、YD-15細胞
WEHI-3B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Okayama University Medical School-23細胞、H1385細胞、GA-10-Clone-4細胞
Bovine ENDometrial cells細胞系相關(guān)產(chǎn)品:N9細胞、MDA-MB-134-VI細胞、CF Pac1細胞
D407細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NIH:OVCAR-3細胞、IB-RS-2細胞、Panc5.04細胞
HOP62細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UM-RC-2細胞、SK-OV-3細胞、Ku812F細胞
H2227細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ARPE19細胞、TW01細胞、COLO 741細胞
TE 354.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NFHIOSE-80細胞、EB-1細胞、RPMI 7951細胞
WIL2 Secreting細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-441細胞、SNU-1細胞、Human fetal lung fibroblast 1細胞
SKMel-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WC00097細胞、Hepatoma-22細胞、HL-1細胞
OVCAR-433細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB-435 S細胞、BC3H1細胞、Hs578Bst細胞
NK10a細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuTu 80細胞、UMUC14細胞、SN12PM6細胞
TH1 Adherent小鼠調(diào)節(jié)T細胞系
SCC9細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2135細胞、CCD-841-CoTr細胞、NIH:OVCAR-10細胞
McA-RH 8994細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-375細胞、Baby Hamster Kidney-21細胞、SCL II細胞
Mouse Bladder Tumor line-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPA87-1細胞、Porcine Kidney-15細胞、IPLB-SF-21細胞
HCT GEO細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ISHI細胞、Rainbow Trout Embryo細胞、T_T_細胞
H-1819細胞系相關(guān)產(chǎn)品:5637細胞、SKNDZ細胞、OCI-Ly3細胞
ST細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HGF-1細胞、THPI細胞、RGM-1細胞
UPCISCC090細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LA-4 [Mouse lung adenoma]細胞、2PK-3細胞、3T3F442A細胞
624mel細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO206細胞、K-562細胞、HUT-28細胞
FRH-0201細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LNCaP-Clone-FGC細胞、H-125細胞、SCLC-21H細胞
NCI-SNU-407細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAMA1細胞、BC-3H-1細胞、A2780/CP70細胞
NCI-H1819細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2110細胞、TGW-nu-1細胞、A-427細胞
HuO9細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW1990細胞、Nb-2細胞、MCF 7B細胞
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