"KB Adherent口腔表皮樣癌細胞系
細胞背景資料:最初認為這個細胞源自口腔表皮癌,但隨后通過同工酶分析、HeLa標記染色體和DNA指紋分析發(fā)現(xiàn),起源細胞已被HeLa污染。 角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。 有報告稱KB細胞含有人乳頭狀瘤病毒18 (HPV-18)序列。
細胞形態(tài):上皮細胞樣
細胞培養(yǎng)過程中,總是會出現(xiàn)各種意想不到的問題,一不留神就會全盤皆輸。所謂細胞虐我千百遍,我待細胞如初戀。下面是貼壁細胞的保藏方法,希望對細胞培養(yǎng)初學操作者有所幫助:1)觀察細胞狀態(tài):貼壁細胞密度達到85-90%,即可以細胞凍存形式進行保藏,拍照,記錄細胞狀態(tài);2)細胞清洗:培養(yǎng)皿表面消毒后,轉移至生物安全柜中,去除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)液,加入12mlPBS,輕輕搖晃培養(yǎng)皿清洗細胞,隨后吸除PBS清洗液;3)細胞消化:將2ml胰酶加入培養(yǎng)皿中,完全覆蓋細胞,置于顯微鏡下觀察(期間禁止搖晃培養(yǎng)皿),當細胞剛開始脫落時,立即轉移至生物安全柜中,除去大部分胰酶,剩余約0.5ml胰酶,轉移至培養(yǎng)箱內繼續(xù)消化,每30秒肉眼觀察細胞狀態(tài),至細胞成流沙狀完全脫落,轉移至生物安全柜中,加入12ml完全培養(yǎng)基,終止消化;4)細胞離心:將終止消化后的細胞懸液吹打均勻,吸取至15ml離心管中,1000r/min(110g),離心3min;5)細胞凍存:離心后去除細胞上清液,按照凍存細胞量5*10^5/ml,吸取凍存液重懸細胞沉淀,吹打均勻后分裝至相應的凍存管中,進行凍存;6)細胞保藏:凍存管做好標記,放至程序降溫盒中,于4℃冰箱放置30min,轉移至-80℃超低溫冰箱過夜,將過夜后的凍存細胞轉移至液氮中保藏。
細胞生長:貼壁
細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
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細胞產品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支)
【胰蛋白酶消化操作】1)加入消化液:小心吸出舊培養(yǎng)液,用PBS清洗(沖洗),加入適量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以蓋住細胞,消化溫度是37℃;2)顯微鏡下觀察細胞:倒置顯微鏡下觀察消化細胞,若胞質回縮,細胞之間不再連接成片,表明此時細胞消化適度;(3)吸棄消化液加入培養(yǎng)液:棄去胰蛋白酶液,注意更換吸管,加入新鮮的培養(yǎng)液?!敬荡蚍稚⒓毎僮鳌浚?吹打制懸:用滴管將已經(jīng)消化細胞吹打成細胞懸液;2)吸細胞懸液入離心管:將細胞懸液吸入10ml離心管中;3)平衡離心:平衡后將離心管放入臺式離心機中,以1000轉/分鐘離心6-8分鐘;4)棄上清液,加入新培養(yǎng)液:棄去上清液,加入2ml培養(yǎng)液,用滴管輕輕吹打細胞制成細胞懸液?!痉盅b稀釋細胞操作】1)顯微鏡下觀察細胞:倒置顯微鏡下觀察細胞量,必要是計數(shù)。注意密度過小會影響傳代細胞的生長,傳代細胞的密度應該不低于5×105/ml。最后要做好標記;2)分裝:將細胞懸液吸出分裝至2~3個培養(yǎng)瓶中,加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋;3)繼續(xù)培養(yǎng):用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶,適當旋松瓶蓋,放入CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。傳代細胞2小時后開始貼附在瓶壁上。
H-1876細胞系相關產品:DHL-6細胞、SNU-182細胞、AML-193細胞
SUDHL-16細胞系相關產品:F-81細胞、Porcine Kidney-13細胞、NCIH1781細胞
H1651細胞系相關產品:OVSAHO細胞、LC-2-Ad細胞、SkChA1細胞
細胞傳代方法:1:2傳代
細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
SupB15W細胞系相關產品:SNU387細胞、EOMA細胞、COLO-16細胞
P3X63 Ag8.653細胞系相關產品:Factor Dependent Cell-Paterson 1細胞、HHL-5細胞、MDA231-LM2-4175細胞
NCI-H1573細胞系相關產品:CCD19-Lu細胞、CNE1-LUC細胞、Scott細胞
細胞生長特性:懸浮生長
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細胞形態(tài)特性:上皮細胞樣
【細胞培養(yǎng)中支原體、黑蛟蟲、真菌的污染情況總結】支原體:黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁,原體感染,國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后,細胞病變不很明顯,只是慢慢死去。用泰樂菌素,獸用支原體病的藥,但可用于細胞培養(yǎng),無任何不良反應。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度;黑蛟蟲:可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養(yǎng)液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態(tài)良好,且觀測到的運動物無明顯增多,且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化,可在同一批號的血清養(yǎng)的細胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對細胞生長狀態(tài)不會有明顯影響,在細胞增殖旺盛之后會自然消失,除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話,可以增加細胞的種板密度,以提高細胞的生存率;真菌:一般培養(yǎng)液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細胞碎片分不清,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢,不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了,也很難救活了。
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