"TMD8 Lymphoblastoid cells人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:彌漫大B淋巴瘤;男性 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 貼壁細(xì)胞消化傳代時(shí)通常采用兩種方法:一、加入胰酶等細(xì)胞脫落后,再加培養(yǎng)基中止胰酶作用,離心傳代;二、加入胰酶后,鏡下觀察待細(xì)胞始脫落時(shí),棄胰酶,加培養(yǎng)液分瓶。但前者太麻煩,而后者有可能對(duì)細(xì)胞施加胰酶選擇,因?yàn)榭偸琴N壁不牢的細(xì)胞先脫落,對(duì)腫瘤細(xì)胞來(lái)說(shuō),這部分細(xì)胞有可能是惡性程度較高的細(xì)胞亞群。一種簡(jiǎn)單的消化傳代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(30s),棄之,再加入適量胰酶作用10s-40s(根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度),棄之,這樣依賴殘余的胰酶就可將細(xì)胞消化單細(xì)胞。對(duì)于較難消化的細(xì)胞,可以用2%利多卡因消化5-8分鐘,然后再棄去,加培養(yǎng)基吹打也可以,對(duì)細(xì)胞的影響不大。不用PBS也不用Hanks洗,只要把舊培養(yǎng)液吸的干凈一點(diǎn),直接加酶消化應(yīng)該不會(huì)有什么問(wèn)題。棄培養(yǎng)液后,用0.04%的EDTA沖洗一次,再用1/4v的0.04%的EDTA室溫孵育5min,棄取大部分EDTA,加入與剩余EDTA等量的胰酶(預(yù)熱)總體積1/10v。消化到有細(xì)胞脫落。不過(guò)有人說(shuō)EDTA對(duì)細(xì)胞不好,有證據(jù)嗎?培養(yǎng)的BASMC:倒掉舊培養(yǎng)液加入少量胰酶沖一下,倒掉再加入0.125-0.25%胰酶約6-10滴或1ml(25ml bottle)消化再加入適量新培養(yǎng)基中和,并分瓶這種方法簡(jiǎn)單、省事;效果很好并且不損失細(xì)胞! PL 45細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RK 13細(xì)胞、HC-11細(xì)胞、Human Embryo Lung-1細(xì)胞 HCS-2/8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293 c18細(xì)胞、PVEC細(xì)胞、GM03570細(xì)胞 TE8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RASMC細(xì)胞、NKM-1細(xì)胞、PLA-801D細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):懸浮 TMD8 Lymphoblastoid cells人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞的凍存:為避免污染造成的損失,最小化連續(xù)細(xì)胞系的遺傳改變和避免有限細(xì)胞系的老化和轉(zhuǎn)化,需要凍存哺乳細(xì)胞。凍存細(xì)胞前,細(xì)胞應(yīng)該特性化并檢查是否污染。有幾種普通培養(yǎng)基用來(lái)凍存細(xì)胞。對(duì)于包含有血清的培養(yǎng)基,成分可能如下:包含10%甘油的完全培養(yǎng)基;包含10%二甲基亞砜(DMSO)的完全培養(yǎng)基;50%細(xì)胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%甘油的新鮮培養(yǎng)基或50%細(xì)胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。對(duì)于無(wú)血清培養(yǎng)基,一些普通的培養(yǎng)基成分可能是:50%細(xì)胞條件無(wú)血清培養(yǎng)基和50%包含有7.5%二甲基亞砜的新鮮的無(wú)血清培養(yǎng)基或包含有7.5%二甲基亞砜和10%細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)BSA的新鮮無(wú)血清培養(yǎng)基。懸浮細(xì)胞凍存:計(jì)數(shù)將要凍存的活細(xì)胞。細(xì)胞應(yīng)該處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。以大約200~400g離心5分鐘沉淀細(xì)胞,使用移液管移去上清到最小體積,不要攪亂細(xì)胞。以1×10(7)到5×10(7)細(xì)胞/ml密度,在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細(xì)胞,或者以0.5×10(7)到1×10(7)在無(wú)血清培養(yǎng)基中,再次懸浮細(xì)胞。分裝進(jìn)凍存管,將凍存管置于濕冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內(nèi)開(kāi)始冷凍步驟。細(xì)胞以1℃/分鐘進(jìn)行冷凍,可以通過(guò)可編程序的冷凍器進(jìn)行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。貼壁細(xì)胞凍存:使用分離試劑從基層分離細(xì)胞,分離時(shí)盡可能溫和,使對(duì)細(xì)胞的損傷減少到最小。在完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,再次懸浮分離細(xì)胞,確定有活力細(xì)胞數(shù)。以大約200g離心5分鐘沉淀細(xì)胞。使用移液管移去上清到最小體積,不要攪亂細(xì)胞。以5×10(6)到1×10(6)細(xì)胞/ml密度,在凍存液中懸浮細(xì)胞。分裝進(jìn)凍存管,將凍存管置于濕的冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內(nèi)開(kāi)始冷凍步驟。細(xì)胞以1℃/分鐘進(jìn)行冷凍,可以通過(guò)可編程序的冷凍器進(jìn)行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 NPA87細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DU 145細(xì)胞、Sc-1細(xì)胞、SHEP1細(xì)胞 HEK-293-H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LK-2細(xì)胞、Reh細(xì)胞、SHG 44細(xì)胞 HSC6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOP 92細(xì)胞、Dami細(xì)胞、SNU620細(xì)胞 L5178-R細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Karpas-299細(xì)胞、GM3190細(xì)胞、P3X63-Ag8.653細(xì)胞 JEKO細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-520細(xì)胞、NCIH1975細(xì)胞、33604細(xì)胞 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 TMD8 Lymphoblastoid cells人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:懸浮 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū) 細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作):1)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加2-3ml 0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通常控制在1-2min);2)鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰酶,加6-8ml完全培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散;3)取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng);4)注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存;特別注意:(如使用公共實(shí)驗(yàn)室或者初次接觸細(xì)胞培養(yǎng),建議添加雙抗培養(yǎng))1)收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶,請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清,(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長(zhǎng)不宜超過(guò)72小時(shí));2)貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化,請(qǐng)將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代,請(qǐng)優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng);3)如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室。 Murine Carcinoma-38細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-739細(xì)胞、95-D細(xì)胞、87MG細(xì)胞 CCRF-SB細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RT-BM 1細(xì)胞、NS1-1 Ag4.1細(xì)胞、C12細(xì)胞 OE21細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H508細(xì)胞、ECV304細(xì)胞、H64細(xì)胞 UCD-MLA-144細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-900細(xì)胞、L132細(xì)胞、SK MEL 5細(xì)胞 A875細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU182細(xì)胞、U2932細(xì)胞、H820細(xì)胞 T/G HA-VSMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR-433細(xì)胞、PLC/PRF5細(xì)胞、NCI-H1563細(xì)胞 KYSE-150細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BJA-B細(xì)胞、74Int細(xì)胞、Ly1細(xì)胞 SNU-761細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HM1900細(xì)胞、MES 13細(xì)胞、769P細(xì)胞 CHO/dhFr-細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDBK細(xì)胞、NOK細(xì)胞、HT 115細(xì)胞 SW527細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:R3/1細(xì)胞、P3/NS-1細(xì)胞、RCM-1 [Human rectum adenocarcinoma]細(xì)胞 TMD8 Lymphoblastoid cells人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞系 NCI-H1385細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TCCSUP細(xì)胞、H1703細(xì)胞、LYR細(xì)胞 SKN-SH細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs606細(xì)胞、GOS-3細(xì)胞、B16-F0細(xì)胞 C17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-453細(xì)胞、SK-MEL-31細(xì)胞、Tn5B1-4細(xì)胞 Hs 636 T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNG-M細(xì)胞、Hs.27細(xì)胞、A-101D細(xì)胞 M-14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW626細(xì)胞、NIH 3T6細(xì)胞、BNL-CL.2細(xì)胞 MCF7ADR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-5細(xì)胞、A549ATCC細(xì)胞、BrCL12細(xì)胞 MCF7ADR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-5細(xì)胞、A549ATCC細(xì)胞、BrCL12細(xì)胞 H87細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LNCaP-ATCC細(xì)胞、HEK293F細(xì)胞、RC-2細(xì)胞 RLE-6TN細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C3H10T1/2CL8細(xì)胞、U-251MG細(xì)胞、RWPE-1細(xì)胞 Caco2-BBE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs729細(xì)胞、OCI-AML5細(xì)胞、Embryonic Bovine Tracheal cells細(xì)胞 LAPC-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MESSA Dx5細(xì)胞、COR-L51細(xì)胞、B95.8細(xì)胞 CV-1 in Origin Simian-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1993細(xì)胞、PG-4 (S+L-)細(xì)胞、TF-1a細(xì)胞 TE-10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NGEC細(xì)胞、SK-N-BE(2)-C細(xì)胞、SUPB-15細(xì)胞 HCC9724細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BIU87細(xì)胞、MRAEC細(xì)胞、T-47D細(xì)胞 RAOEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KNS62細(xì)胞、WSU-HN13細(xì)胞、H-1355細(xì)胞 AML-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-Ly7細(xì)胞、NCI-H1755細(xì)胞、C-28I2細(xì)胞 HEK 293 EBNA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Rca-B細(xì)胞、Hs 683.T細(xì)胞、CHL-CL-11細(xì)胞 Colon38細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H125細(xì)胞、RC13細(xì)胞、JF305細(xì)胞 OCILY-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HLEB3細(xì)胞、SUM149細(xì)胞、CV-1細(xì)胞 OCILY-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HLEB3細(xì)胞、SUM149細(xì)胞、CV-1細(xì)胞 C32 mel細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MESSA-DX5細(xì)胞、C1R細(xì)胞、NGEC細(xì)胞 MDA MB231細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GS-9L細(xì)胞、T-ALL1細(xì)胞、KMST-6細(xì)胞 H1618細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-12細(xì)胞、TCMK-1細(xì)胞、H810細(xì)胞 MN-60細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Wien133細(xì)胞、H-838細(xì)胞、HCC1599細(xì)胞 H35細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OV 2008細(xì)胞、6T-CEM細(xì)胞、OVCAR8細(xì)胞 WB F344細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:T-HSC細(xì)胞、LS-174T細(xì)胞、RPMI8226/S細(xì)胞 TE-9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS-79細(xì)胞、MCF/Adr細(xì)胞、ECC10細(xì)胞 MESSA-DX5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GLC-15細(xì)胞、PLA801D細(xì)胞、OCI-AML2細(xì)胞 SNU-484細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:T.T細(xì)胞、KTC-1細(xì)胞、EBNA293細(xì)胞 SJ-Rh 30細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LLC PK1細(xì)胞、H716細(xì)胞、RKN細(xì)胞 WIL2-S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 824細(xì)胞、TH1細(xì)胞、HRPEpiC細(xì)胞 McG-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Y3.AG.1.2.3細(xì)胞、HPDEC細(xì)胞、ECV-304細(xì)胞 OVCAR-8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:578T細(xì)胞、Epstein-Barr-1細(xì)胞、BJA-B1細(xì)胞 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