"EL4 Lymphoblastoid cellsEL4小鼠淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:EL4是從用9,10-二甲基-1,2-并蒽在C57BL小鼠中誘導(dǎo)的淋巴瘤中建立的。 能抗0.1 mM 化可的松,對(duì)20 mcg/ml PHA敏感。 還有一個(gè)亞株(EL4.IL-2, ATCC TIB-181)可以生成高水平的IL-2。 檢測(cè)表明肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 貼壁細(xì)胞消化傳代時(shí)通常采用兩種方法:一、加入胰酶等細(xì)胞脫落后,再加培養(yǎng)基中止胰酶作用,離心傳代;二、加入胰酶后,鏡下觀察待細(xì)胞始脫落時(shí),棄胰酶,加培養(yǎng)液分瓶。但前者太麻煩,而后者有可能對(duì)細(xì)胞施加胰酶選擇,因?yàn)榭偸琴N壁不牢的細(xì)胞先脫落,對(duì)腫瘤細(xì)胞來(lái)說(shuō),這部分細(xì)胞有可能是惡性程度較高的細(xì)胞亞群。一種簡(jiǎn)單的消化傳代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(30s),棄之,再加入適量胰酶作用10s-40s(根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度),棄之,這樣依賴殘余的胰酶就可將細(xì)胞消化單細(xì)胞。對(duì)于較難消化的細(xì)胞,可以用2%利多卡因消化5-8分鐘,然后再棄去,加培養(yǎng)基吹打也可以,對(duì)細(xì)胞的影響不大。不用PBS也不用Hanks洗,只要把舊培養(yǎng)液吸的干凈一點(diǎn),直接加酶消化應(yīng)該不會(huì)有什么問(wèn)題。棄培養(yǎng)液后,用0.04%的EDTA沖洗一次,再用1/4v的0.04%的EDTA室溫孵育5min,棄取大部分EDTA,加入與剩余EDTA等量的胰酶(預(yù)熱)總體積1/10v。消化到有細(xì)胞脫落。不過(guò)有人說(shuō)EDTA對(duì)細(xì)胞不好,有證據(jù)嗎?培養(yǎng)的BASMC:倒掉舊培養(yǎng)液加入少量胰酶沖一下,倒掉再加入0.125-0.25%胰酶約6-10滴或1ml(25ml bottle)消化再加入適量新培養(yǎng)基中和,并分瓶這種方法簡(jiǎn)單、省事;效果很好并且不損失細(xì)胞! HBL100細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PLB985細(xì)胞、Mel RM細(xì)胞、SU-DHL-10細(xì)胞 HNE-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SP-2細(xì)胞、DMS 79細(xì)胞、NCI-SNU-119細(xì)胞 Daoy細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KMB-17細(xì)胞、UMRC-2細(xì)胞、Rat-2細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):懸浮 EL4 Lymphoblastoid cellsEL4小鼠淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗(yàn)分享:支原體是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細(xì)胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細(xì)胞培養(yǎng)中生長(zhǎng),營(yíng)養(yǎng)要求比細(xì)菌高。細(xì)胞培養(yǎng)(特別是傳代細(xì)胞)被支原體污染是個(gè)世界性問(wèn)題。在細(xì)胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細(xì)胞的DNA,RNA及蛋白表達(dá),又不能通過(guò)可視法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè),而且它對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)率影響較小,不易引起注意。國(guó)內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無(wú)膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見(jiàn)的污染細(xì)胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細(xì)胞的支原體種類是很多的,國(guó)外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細(xì)胞,有的細(xì)胞株可以同時(shí)污染兩種以上的支原體。支原體污染的來(lái)源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來(lái)的污染和用來(lái)制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。組織細(xì)胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個(gè)方面來(lái)預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作;細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無(wú)菌;在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細(xì)胞后,特別是重要的細(xì)胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補(bǔ)體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒(méi)有細(xì)胞壁,一般來(lái)講,對(duì)作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素,如萬(wàn)古霉素等完全不敏感;對(duì)多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對(duì)支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對(duì)支原體有較小抑制作用,所以常不用來(lái)作為支原體感染的化學(xué)治療劑。 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代 Statens Seruminstitut Rabbit Cornea細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUDHL4細(xì)胞、HT細(xì)胞、HCEC-B4G12細(xì)胞 HLCL9B10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC1599細(xì)胞、8402細(xì)胞、BSC40細(xì)胞 Hs 746T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:APRE-19細(xì)胞、KHYG1細(xì)胞、EnCa1細(xì)胞 J-774A.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEM-CCRF細(xì)胞、OCI-Ly 19細(xì)胞、PC12(高分化)細(xì)胞 DHL10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1793細(xì)胞、TB-1 Lu細(xì)胞、32D CL3細(xì)胞 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 EL4 Lymphoblastoid cellsEL4小鼠淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:懸浮生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū) 細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作):1)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加2-3ml 0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通常控制在1-2min);2)鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰酶,加6-8ml完全培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散;3)取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng);4)注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存;特別注意:(如使用公共實(shí)驗(yàn)室或者初次接觸細(xì)胞培養(yǎng),建議添加雙抗培養(yǎng))1)收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶,請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清,(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長(zhǎng)不宜超過(guò)72小時(shí));2)貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化,請(qǐng)將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代,請(qǐng)優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng);3)如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室。 TE-15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MV4:11細(xì)胞、CHOS細(xì)胞、NCI-H820細(xì)胞 NCIH1651細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KG-1細(xì)胞、HuT 78細(xì)胞、NCIH1792細(xì)胞 H9c2(2-1)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MFE296細(xì)胞、PLCPRF5細(xì)胞、HCC0044細(xì)胞 COLO 320DM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:4T1.2細(xì)胞、R2C細(xì)胞、C3H/10T1/2 CL8細(xì)胞 GM00215細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OS-RC-2細(xì)胞、NCIH524細(xì)胞、OCI AML2細(xì)胞 KMS26細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kuramochi細(xì)胞、NCI-441細(xì)胞、3T3 Swiss Albino細(xì)胞 NCI-H2052細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE 180細(xì)胞、H22細(xì)胞、16HBE140細(xì)胞 H1666_DA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RK13細(xì)胞、NCI-SNU-387細(xì)胞、ARO細(xì)胞 MN9D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U251n細(xì)胞、Vero from pool #76細(xì)胞、HAPI細(xì)胞 WEHI-3B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Okayama University Medical School-23細(xì)胞、H1385細(xì)胞、GA-10-Clone-4細(xì)胞 EL4 Lymphoblastoid cellsEL4小鼠淋巴瘤細(xì)胞系 H2023細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUPT-1細(xì)胞、Hmy.2 CIR細(xì)胞、H1651細(xì)胞 HOS-TE85細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SkMel31細(xì)胞、MS1細(xì)胞、OCI/AML-4細(xì)胞 HCC1954 BL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Sun Yat-sen university Ophtalmic center-Retinoblastoma 50細(xì)胞、HPC-Y5細(xì)胞、SW 900細(xì)胞 EBNA293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC-I細(xì)胞、OV-1063細(xì)胞、MiaPaCa2細(xì)胞 IAR20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 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