"IB-RS-2 epithelioid cells豬腎細胞系 細胞背景資料:腎;自發(fā)永生 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復蘇相關(guān)注意事項:1.取細胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。此項尤為重要,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復蘇溫度太慢,會造成細胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng),第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇,結(jié)果無異常。5.細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。6.復蘇細胞分裝的問題:試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 NCIH2122細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LN-382細胞、OVTOKO細胞、NCIH1581細胞 QGY 7701細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H23細胞、HOPC細胞、MS1細胞 Hs274T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1437細胞、CAOV3細胞、PC-9/S1細胞 細胞生長:貼壁 IB-RS-2 epithelioid cells豬腎細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞的凍存:為避免污染造成的損失,最小化連續(xù)細胞系的遺傳改變和避免有限細胞系的老化和轉(zhuǎn)化,需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前,細胞應該特性化并檢查是否污染。有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細胞。對于包含有血清的培養(yǎng)基,成分可能如下:包含10%甘油的完全培養(yǎng)基;包含10%二甲基亞砜(DMSO)的完全培養(yǎng)基;50%細胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%甘油的新鮮培養(yǎng)基或50%細胞條件培養(yǎng)基和50%含有10%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。對于無血清培養(yǎng)基,一些普通的培養(yǎng)基成分可能是:50%細胞條件無血清培養(yǎng)基和50%包含有7.5%二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基或包含有7.5%二甲基亞砜和10%細胞培養(yǎng)級BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。懸浮細胞凍存:計數(shù)將要凍存的活細胞。細胞應該處于對數(shù)生長期。以大約200~400g離心5分鐘沉淀細胞,使用移液管移去上清到最小體積,不要攪亂細胞。以1×10(7)到5×10(7)細胞/ml密度,在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細胞,或者以0.5×10(7)到1×10(7)在無血清培養(yǎng)基中,再次懸浮細胞。分裝進凍存管,將凍存管置于濕冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細胞以1℃/分鐘進行冷凍,可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。貼壁細胞凍存:使用分離試劑從基層分離細胞,分離時盡可能溫和,使對細胞的損傷減少到最小。在完全生長培養(yǎng)基中,再次懸浮分離細胞,確定有活力細胞數(shù)。以大約200g離心5分鐘沉淀細胞。使用移液管移去上清到最小體積,不要攪亂細胞。以5×10(6)到1×10(6)細胞/ml密度,在凍存液中懸浮細胞。分裝進凍存管,將凍存管置于濕的冰上或放入4℃冰箱中,5分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細胞以1℃/分鐘進行冷凍,可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 NeHepLxHT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-C2A細胞、SLMT1細胞、SNU449細胞 TE 32細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Pro-5 Lec1.3c細胞、T-ALL 1細胞、NCI-H23細胞 MuM-2B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MNNG細胞、KYSE 70細胞、CL34細胞 Cates 1B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KP2細胞、67NR細胞、A549細胞 EMT-6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CTLL2細胞、MCM細胞、GA-10細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 IB-RS-2 epithelioid cells豬腎細胞系 細胞生長特性:貼壁 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 培養(yǎng)細胞真的不難,最關(guān)鍵幾點:1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的,真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細胞計數(shù),傳相應數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細胞的實驗穿插進行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實驗;5)個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細胞不能進去太多人,避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗教訓可以分享呢?1)嚴格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套;3)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進去);5)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。 CCRF SB細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1355細胞、KTCTL-140細胞、A101D細胞 HTh74細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1568細胞、KG1A細胞、KY-50細胞 UACC-812細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT144-mel細胞、CL 1-5細胞、H69C細胞 H1838細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DCS細胞、P3.NS-1/1.Ag4.1細胞、MDAMB157細胞 H-2066細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCA433_Bast細胞、RKO-AS-45-1細胞、Panc 02細胞 COLO320 DM細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC 7860細胞、A431/P細胞、MDA-1386細胞 SKNF1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HAC-84細胞、SNU638細胞、AtT-20細胞 HEK 293 c18細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBEpiC細胞、OVCAR 420細胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-2細胞 SUM52PE細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AtT-20細胞、451Lu細胞、JM1細胞 Murine Thymic Epithelial Cell line 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:T-84細胞、Lilly Laboratories Cell-Porcine Kidney 1細胞、PA I細胞 IB-RS-2 epithelioid cells豬腎細胞系 Lu-99A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3X63 Ag8細胞、HPAF II細胞、CHO K1細胞 Nthy ori 3.1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKOV-3細胞、CAMA1細胞、RDES細胞 L5178Y-R細胞系相關(guān)產(chǎn)品:mIMCD3細胞、RT-BM細胞、HK2細胞 SUM 149細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Detroit-562細胞、CHL1細胞、HT(H9)細胞 H87細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LNCaP-ATCC細胞、HEK293F細胞、RC-2細胞 SW 1088細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTera2/D1細胞、Hs888T細胞、ECV 304細胞 SC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1105細胞、3AO細胞、RH30SJ細胞 NCIH1618細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CFSC-2G細胞、LAN1細胞、KP-N-YN細胞 SK-MEL 28細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NS1-Ag4細胞、OSC19細胞、IHC-ST1細胞 Ishikawa細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C166細胞、CCD19Lu細胞、SUM-102PT細胞 MGH-U1 (EJ)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Lewis lung carcinoma line 1細胞、HBL-100細胞、H1436細胞 A2780 CP70細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Cor L88細胞、B958細胞、HELA-GFP細胞 COLO-699細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LI7細胞、CMT-64細胞、BSC-1細胞 H2108細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MES-13細胞、H-2405細胞、NCIH69細胞 HARAB細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EA. hy 926細胞、Jurkat FHCRC細胞、FUOV1細胞 SGC-7901細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH596細胞、NK-92細胞、V-79-4細胞 KP-N-RT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1563細胞、Ca-Ski細胞、HG2855細胞 Suzhou Human Glioma-44細胞系相關(guān)產(chǎn)品:52PE細胞、H-157細胞、B16 melanoma F10細胞 MAVER細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuH 6細胞、FL-83B細胞、P3.NS-1/1.Ag4.1細胞 OC 316細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF-539 BT細胞、Nittby-Salford 1細胞、MNNG-HOS (Cl#5)細胞 B16/F0細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3/ag細胞、SW-839細胞、ATN1細胞 MBT-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEY-A8細胞、HT-1376細胞、EC109細胞 NCI H82細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SP2/0 Ag-14細胞、SNU668細胞、Clone Y-1細胞 RPMI2650細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H747細胞、HEC-1-A細胞、HS688AT細胞 C-Li-7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-780細胞、SJSA1細胞、KU 812F細胞 JROECL33細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS-411N細胞、HEK AD293細胞、OCI-AML5細胞 WERI-Rb 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C4-2細胞、RK13細胞、Y3-Ag1,2,3細胞 OCI-Ly 10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IEC 18細胞、HLE B-3細胞、WILL-2細胞 TE15細胞系相關(guān)產(chǎn)品:N-Tera-2細胞、PAEC細胞、4T1-LUC細胞 H522細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HUASMC細胞、JHH-2細胞、Daudi細胞 AGS細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Glioma 261細胞、B 95.8細胞、H-596細胞 MDA231細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JURKAT E-61細胞、Panc813細胞、KU-812細胞 RPMI1846細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE50細胞、RSC-96細胞、HASMC細胞 P-36細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT_116細胞、Chinese Hamster Ovary細胞、VM-CUB-1細胞 UO31細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MHH-CALL-2細胞、MV-4:11細胞、293 HEK細胞 CCC-HHM-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CL40細胞、NCIH2171細胞、CCD19-Lu細胞 SW 982細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Danio rerio Gill細胞、UWB1.289細胞、WERI-Rb 1細胞 TE-671細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LM8細胞、P3/NS1/Ag4-1細胞、ROS 17/28細胞 KYSE 510細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1105細胞、RK 13細胞、Hs737T細胞 Huh 7.5.1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LM(TK-)細胞、SuDHL 2細胞、UM2細胞 CCC-HHM-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CL40細胞、NCIH2171細胞、CCD19-Lu細胞 HUT-226細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC23細胞、COLO-699細胞、OVCAR10細胞 P3X63Ag8-6-5-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM102PT細胞、RINm5F細胞、RT112細胞 NCI-H660細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-MEL5細胞、GM03573細胞、LS 1034細胞 BNL.1ME A.7R.1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H740細胞、NCI-SNU-C1細胞、3T3-Swiss albino細胞 ID8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IPI-2I細胞、RA 1細胞、FHs 74 Int細胞 MEF細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OKAC1細胞、SNT-8細胞、C8-D1A細胞 Hs888 Lu細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NE-4C細胞、NTERA-2 cl.D1細胞、Ca9-22細胞 Madin Darby Bovine Kidney細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LU65細胞、JB6 [Mouse]細胞、H1623細胞 SKRC-20細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2342細胞、JOSK-M細胞、SUM 52細胞 OK-WT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BBE細胞、AML-193細胞、PLA-801C細胞 IB-RS-2 epithelioid cells豬腎細胞系 U-118MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PK-15細胞、293EBNA細胞、HPDEC細胞 ECV304細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H82細胞、MCF-7/AdrR細胞、HC11 Mammary Epithelium細胞 16-HBEo細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Normal Rat Kidney-49F細胞、Pan02細胞、GB-1細胞 UACC-812細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT144-mel細胞、SKMEL28細胞、ELD-1細胞 "
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