"TE-13 epithelioid cells人食管癌細胞系 細胞背景資料:食管鱗癌;男性 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復(fù)蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題。總結(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復(fù)蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當(dāng)會事。 Karpas299細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DAN-G細胞、PL-11細胞、MDAPCa2b細胞 AdHek細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BHT101細胞、WPE-int細胞、Hs 766細胞 Potorous tridactylus Kidney 2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE30細胞、RCC 7860細胞、Farage細胞 細胞生長:貼壁 TE-13 epithelioid cells人食管癌細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗分享:支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養(yǎng)中生長,營養(yǎng)要求比細菌高。細胞培養(yǎng)(特別是傳代細胞)被支原體污染是個世界性問題。在細胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細胞的DNA,RNA及蛋白表達,又不能通過可視法對其進行檢測,而且它對細胞的生長率影響較小,不易引起注意。國內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見的污染細胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細胞的支原體種類是很多的,國外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細胞,有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。組織細胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個方面來預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴(yán)格實驗操作;細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細胞后,特別是重要的細胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細胞壁,一般來講,對作用于細胞壁生物合成的抗生素,如萬古霉素等完全不敏感;對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對支原體有較小抑制作用,所以常不用來作為支原體感染的化學(xué)治療劑。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 PC3-M細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 611.T細胞、H-647細胞、HO-8910細胞 QGY7701細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U343細胞、CX1細胞、AM細胞 IOSE-80細胞系相關(guān)產(chǎn)品:mouse Inner Medullary Collecting Duct-3細胞、LO2細胞、H1781細胞 CAL 12T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOS-TE85細胞、SW-1990細胞、MES-SA/Dx-5細胞 H-2591細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HTori-3細胞、A549細胞、CCRF CEM細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 TE-13 epithelioid cells人食管癌細胞系 細胞生長特性:貼壁 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復(fù)蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應(yīng),造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 J-774細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IMR 90細胞、A9細胞、Rat-1細胞 CHL-11細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U373 MG細胞、Chang Cells細胞、HC11 Mammary Epithelium細胞 H676B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEM T4細胞、AN3細胞、ROS1728細胞 Anglne細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COC1/CDDP細胞、HO-8910 PM細胞、GM03573細胞 OVCAR 5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Nb-2細胞、MTC-TT細胞、SW527細胞 U 266細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUDHL-4細胞、AML-EOL-1細胞、HCS-2/8細胞 HR8348細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DHL10細胞、LS174T細胞、DMS153細胞 ME1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE9細胞、Tb 1 Lu (NBL-12)細胞、NCI-H2228細胞 HL1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EM-3細胞、KU-812F細胞、Human Foreskin Fibroblast細胞 RPMI8226/S細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFL-1細胞、SMA-560細胞、BEL7404細胞 TE-13 epithelioid cells人食管癌細胞系 MOLT 16細胞系相關(guān)產(chǎn)品:R.K.13細胞、HANK1細胞、NS20-Y細胞 OUMS27細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tu-177細胞、SK-GT-2細胞、Panc_02_03細胞 MEG-01細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H165細胞、CAL 33細胞、LOU-NH91細胞 OCI-Ly 19細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-HEP-1細胞、UCLA RO-81-A-1細胞、J 82細胞 TR 146細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW1222細胞、SNB19細胞、KM H-2細胞 CAL51細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB231細胞、HEK/293細胞、HSC細胞 CAL51細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB231細胞、HEK/293細胞、HSC細胞 BRL3A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WEHI-164細胞、NTera-2D1細胞、COLO-205細胞 EAhy 926細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU86_86細胞、SK-MES-1細胞、huH 1細胞 SMA 560細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPAF-II細胞、H2444細胞、I90細胞 Vertebral Cancer of the Prostate細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CT26.WT細胞、JTC-39細胞、MMVECs細胞 CAL 51細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Bac 1.2F5細胞、Hs27細胞、L540細胞 KY-270細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B78細胞、H1688細胞、COV362細胞 CAL78細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MFE-296細胞、Hs 737.T細胞、OEC19細胞 Centre Antoine Lacassagne-62細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MESSA細胞、IHC-ST1細胞、CEM-CCRF (CAMR)細胞 HIT-T15細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SMA560細胞、H747細胞、SNU886細胞 SUSM1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 527細胞、KNS-42細胞、Eca109細胞 Hca-F細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ARO81細胞、RASMCs細胞、SK Mel 2細胞 YH-13細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEp-2細胞、NT2細胞、SHEE細胞 U87MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OE-19細胞、EFM-192C細胞、BHK 21細胞 SNU-739細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-498細胞、HGBEC細胞、AM-38細胞 H-1792細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Detroit 562細胞、NTERA-2 clone D1細胞、HuPT3細胞 Ca-Ski細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LIM1215細胞、KPNRTBM1細胞、L-1210細胞 HEY-A8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1395細胞、SNU520細胞、CHO cell clone K1細胞 Hs888Lu細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 829細胞、Y79細胞、SUM52PE細胞 TMK1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HMEC細胞、NCIH1819細胞、RSC-96細胞 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