"Evsa-T epithelioid cells人乳腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:乳腺癌;腹水轉(zhuǎn)移;女性 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項(xiàng):細(xì)胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯(cuò),就是記得到時(shí)間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個(gè)最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個(gè)液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點(diǎn):當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時(shí),有可能會(huì)出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實(shí),細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡單的實(shí)驗(yàn),不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會(huì)盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對(duì)細(xì)胞的損傷等等。 OCI-LY-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC-251細(xì)胞、SK-ES-1細(xì)胞、Hamster Islet Transformed-Tioguanine resistant clone 15細(xì)胞 ChaGo-K1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-118 MG細(xì)胞、MDA-330細(xì)胞、alpha TC1.6細(xì)胞 MC-CAR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NSH細(xì)胞、SKLU1細(xì)胞、BE2M17細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 Evsa-T epithelioid cells人乳腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代的一般方法:開始細(xì)胞傳代前,仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全:一般主要有:細(xì)胞(單層細(xì)胞,鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或199等適合細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1萬單位)、7.5%NaHC03溶液、0.25%胰蛋白酶、PBS洗液。用具:小方瓶(100m1)、克氏瓶、膠塞、吸管(10ml、1m1)、細(xì)胞吹打管(20ml)(以上用具需經(jīng)121℃至少15分鐘高壓滅菌)、C02 孵箱、超凈臺(tái)、倒置顯微鏡、4℃、-20℃冰箱;操作步驟:鏡檢細(xì)胞,挑選生長狀態(tài)良好,細(xì)胞界限清晰,具有立體感,形態(tài)好無污染、無異常及可疑病變細(xì)胞。配制細(xì)胞培養(yǎng)液:按以下配比配制MEM-0.2%LH培養(yǎng)液100ml內(nèi),加入滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。消化細(xì)胞;先用PBS洗液沖洗細(xì)胞表面1-2次,每次10m1,棄去洗液,向細(xì)胞瓶內(nèi)加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細(xì)胞瓶平放,使消化液完全覆蓋細(xì)胞表面。至細(xì)胞完全脫落到胰酶中。每瓶加入10m1細(xì)胞培養(yǎng)液吹打分散細(xì)胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再加入10m1細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝,然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量。加塞,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4天成片。(由細(xì)胞接種濃度決定);填寫傳代記錄。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 SU-DHL2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCoEpiC細(xì)胞、Oka-C1細(xì)胞、TMD8細(xì)胞 CCLP1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS0578T細(xì)胞、P3X63-Ag8.653細(xì)胞、F442-A細(xì)胞 RT-BM-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HUC-1細(xì)胞、HCC1806細(xì)胞、GM 2132細(xì)胞 C-32細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EST81細(xì)胞、Cloudman M3細(xì)胞、UK Pan-1細(xì)胞 Acanthosis Nigricans 3rd attempt-CArcinoma細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U251細(xì)胞、SNU1040細(xì)胞、MLFC細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 Evsa-T epithelioid cells人乳腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長會(huì)產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因?yàn)楹窟^低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞營養(yǎng)不足,過高則會(huì)破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會(huì)有脫落?因?yàn)檫\(yùn)輸?shù)倪^程中不可避免的會(huì)有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 WBF344細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC1428細(xì)胞、TF-1細(xì)胞、WRL 68細(xì)胞 B95-8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE 32.T細(xì)胞、CoC1細(xì)胞、118MG細(xì)胞 Hs600T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNK1細(xì)胞、Hs832T細(xì)胞、U20-S細(xì)胞 FRO細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H441-4細(xì)胞、hUC-MSC細(xì)胞、H716細(xì)胞 Colo699細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2330細(xì)胞、H-661細(xì)胞、HCT116/L細(xì)胞 RPTEC TERT1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:786O細(xì)胞、H2591細(xì)胞、CF PAC-1細(xì)胞 HFL1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC3T3細(xì)胞、COLO-684細(xì)胞、SKO-007細(xì)胞 A2780/CP70細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-375SM細(xì)胞、SNU-16細(xì)胞、alpha TC1-6細(xì)胞 H-2108細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK;293細(xì)胞、KM932細(xì)胞、HS578細(xì)胞 C-4I細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BMF細(xì)胞、YH-13細(xì)胞、Pa18C細(xì)胞 Evsa-T epithelioid cells人乳腺癌細(xì)胞系 HCC-94細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPE D407細(xì)胞、8226/S細(xì)胞、H2081細(xì)胞 TGHAVSMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC70細(xì)胞、Hs839.T細(xì)胞、Raji細(xì)胞 GTL 16細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FO [Mouse myeloma]細(xì)胞、UPCISCC154細(xì)胞、MDAMB436細(xì)胞 SJCRH30細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SBC-3細(xì)胞、RCC-10RGB細(xì)胞、NCI660細(xì)胞 BC-020細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C-8161細(xì)胞、Vero E6細(xì)胞、B-16細(xì)胞 SW-962細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2126細(xì)胞、Jiyoye (P-2003)細(xì)胞、CFPAC1細(xì)胞 SW-962細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2126細(xì)胞、Jiyoye (P-2003)細(xì)胞、CFPAC1細(xì)胞 PAN 02細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MFM-223細(xì)胞、MTEC1細(xì)胞、RAW-264.7細(xì)胞 KMS-26細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ARH-77細(xì)胞、H-2110細(xì)胞、HME1細(xì)胞 CCLP-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW-039細(xì)胞、CORL51細(xì)胞、A20細(xì)胞 COLO829細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS-695T細(xì)胞、L-02細(xì)胞、H341細(xì)胞 U-2 OS細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CL 1-0細(xì)胞、HSAS3細(xì)胞、MMQ細(xì)胞 NF639細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MKN74細(xì)胞、MDAPCa-2b細(xì)胞、SJRH 30細(xì)胞 Lu-99A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3X63 Ag8細(xì)胞、HPAF II細(xì)胞、CHO K1細(xì)胞 HSAEC1-KT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-403細(xì)胞、Duke University 4475細(xì)胞、H-1623細(xì)胞 C8161細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1238細(xì)胞、H196細(xì)胞、FO [Mouse myeloma]細(xì)胞 COR-L88細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FLC-7細(xì)胞、JCA1細(xì)胞、H-1385細(xì)胞 OV2008細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NS1-Ag4/1細(xì)胞、HRC-99細(xì)胞、NCI-H727細(xì)胞 SUPB-15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD-841-CoN細(xì)胞、HCT-8細(xì)胞、NCI-H446細(xì)胞 NS-1-Ag4-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H661細(xì)胞、Tb1Lu細(xì)胞、OUMS27細(xì)胞 PF-382細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuT-102細(xì)胞、Hs888 Lu細(xì)胞、SNU-398細(xì)胞 NCI-H716細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM 637細(xì)胞、NT2-D1細(xì)胞、PK13細(xì)胞 CTSC-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFF細(xì)胞、Nb2-11細(xì)胞、SU-DHL-5細(xì)胞 OVCA-420細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RIN-m5F細(xì)胞、Fetal Rhesus Kidney-4細(xì)胞、Pa14C細(xì)胞 OCI-Ly7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NRK 49F細(xì)胞、HFT 8810細(xì)胞、PC-2 [Human pancreatic carcinoma]細(xì)胞 GM03320D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TK.10細(xì)胞、HLEB3細(xì)胞、RH35細(xì)胞 Rat Lung Epithelial-6-T-antigen Negative細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-87 MG細(xì)胞、LAN-1細(xì)胞、MeT 5A細(xì)胞 FHs74 Int細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HRC-99細(xì)胞、Med 283細(xì)胞、LO2細(xì)胞 Nthy ori 3.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKOV-3細(xì)胞、CAMA1細(xì)胞、RDES細(xì)胞 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Lacassagne-85-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHP-212細(xì)胞、Caco2BBe細(xì)胞、MDA330細(xì)胞 WERI-Rb1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GCT細(xì)胞、Human Intestinal Epithelial Cell-6細(xì)胞、CAOV3細(xì)胞 293c18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH23細(xì)胞、UO31細(xì)胞、BC-023細(xì)胞 RDES細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RC-4B/C細(xì)胞、CD 18細(xì)胞、BT 549細(xì)胞 MC3T3-E1 Subclone 24細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1666_DA細(xì)胞、526mel細(xì)胞、Lung cancer-1/squamous細(xì)胞 HRMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Institute for Medical Research-90細(xì)胞、3T3-Swiss細(xì)胞、Hs852T細(xì)胞 OVCAR 8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCRF-CEM/S細(xì)胞、Ball 1細(xì)胞、JIMT細(xì)胞 SUM159PT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS153細(xì)胞、KMH2細(xì)胞、BJA-B-1細(xì)胞 University of Michigan-Urothelial Carcinoma-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC366細(xì)胞、CG4細(xì)胞、COLO-680N細(xì)胞 Evsa-T epithelioid cells人乳腺癌細(xì)胞系 MDA157細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mink Lung細(xì)胞、T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1細(xì)胞、UCLA NPA-87-1細(xì)胞 HPAC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JVM-3細(xì)胞、Psi-2-DAP細(xì)胞、EB-3細(xì)胞 BALB/c 3T3 clone A31細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SVHUC細(xì)胞、RPMI7666細(xì)胞、LL/2(LLc1)細(xì)胞 Hs-600-T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1781細(xì)胞、MDAMB157細(xì)胞、CCC-ESF-1細(xì)胞 "
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