"MCF-10A epithelioid cells人正常乳腺上皮細胞系 細胞背景資料:乳腺;上皮細胞;自發(fā)永生;女性 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復蘇相關注意事項:1.取細胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。此項尤為重要,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內使凍存液完全融化。如果復蘇溫度太慢,會造成細胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng),第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉速和時間,轉的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉過了活細胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇,結果無異常。5.細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗中的經驗總結為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。6.復蘇細胞分裝的問題:試驗中我的經驗總結為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候對一般細胞沒有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 CHO-S細胞系相關產品:OPM-2細胞、NTera2 cl.D1細胞、KMB17細胞 Los Angeles Prostate Cancer-4細胞系相關產品:SF295細胞、HKBML細胞、HRVEC細胞 RKOAS451細胞系相關產品:T2(174 x CEM.T2)細胞、H-2141細胞、H-820細胞 細胞生長:貼壁 MCF-10A epithelioid cells人正常乳腺上皮細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞培養(yǎng)中支原體污染的經驗分享:支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養(yǎng)中生長,營養(yǎng)要求比細菌高。細胞培養(yǎng)(特別是傳代細胞)被支原體污染是個世界性問題。在細胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細胞的DNA,RNA及蛋白表達,又不能通過可視法對其進行檢測,而且它對細胞的生長率影響較小,不易引起注意。國內外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見的污染細胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細胞的支原體種類是很多的,國外調查證明,大約有二十多種支原體能污染細胞,有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。組織細胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個方面來預防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴格實驗操作;細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細胞后,特別是重要的細胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯合處理。支原體最突出的結構特征是沒有細胞壁,一般來講,對作用于細胞壁生物合成的抗生素,如萬古霉素等完全不敏感;對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對支原體有較小抑制作用,所以常不用來作為支原體感染的化學治療劑。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 BT.549細胞系相關產品:H1755細胞、KU19-19細胞、DV90細胞 DMS 53細胞系相關產品:CCRF-CEM C7細胞、VB細胞、Eca 109細胞 H358細胞系相關產品:P3/NS1/1-Ag4.1細胞、NK-92 transfected with MFG-hIL2細胞、ACC-2細胞 Lec1細胞系相關產品:ChaGo-K-1細胞、Caco-2/BBe 1細胞、EOMA細胞 Calu-3細胞系相關產品:H-378細胞、OP-9細胞、Hs 611.T細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系 MCF-10A epithelioid cells人正常乳腺上皮細胞系 細胞生長特性:貼壁 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 培養(yǎng)細胞真的不難,最關鍵幾點:1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的,真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細胞計數,傳相應數目的細胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細胞的實驗穿插進行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實驗;5)個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細胞不能進去太多人,避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細胞時有哪些經驗教訓可以分享呢?1)嚴格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套;3)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進去);5)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。 HUT125細胞系相關產品:MLE 12細胞、P3X63Ag8653細胞、32D clone3細胞 GM00215A細胞系相關產品:HOSEpiC細胞、H2122細胞、GM02219D細胞 U14細胞系相關產品:IFRS1細胞、DR2R 1610細胞、H-1838細胞 JIMT1細胞系相關產品:SKMel-28細胞、CL40細胞、Calu-6細胞 NCI-H719細胞系相關產品:Ca 9-22細胞、HLEC細胞、JG細胞 KYSE0410細胞系相關產品:H929細胞、GTL-16細胞、SKG-IIIa細胞 KYSE 140細胞系相關產品:KU19-19細胞、SG231細胞、LC1/Sq細胞 GM16136細胞系相關產品:RGM1細胞、MUS-M1細胞、C3H10T1-2細胞 Panc02細胞系相關產品:P815細胞、KTA-7細胞、CHOS細胞 OCIAML5細胞系相關產品:Leukemia 1210細胞、HS-294細胞、HEL-92-1-7細胞 MCF-10A epithelioid cells人正常乳腺上皮細胞系 SK UT 1細胞系相關產品:SNU216細胞、HD11細胞、MN60細胞 32D-Cl3細胞系相關產品:FT-293細胞、Co 115細胞、H1581細胞 YAC細胞系相關產品:NUGC-2細胞、SUDHL5細胞、MCA-205細胞 EMT-6細胞系相關產品:CTLL2細胞、MCM細胞、GA-10細胞 SW 962細胞系相關產品:OCI-Ly07細胞、MMAc.SF細胞、SNU-119細胞 MHHCALL2細胞系相關產品:SK-MEL-24細胞、Mouse Forestomach Carcinoma細胞、WM35細胞 MHHCALL2細胞系相關產品:SK-MEL-24細胞、Mouse Forestomach Carcinoma細胞、WM35細胞 786-0細胞系相關產品:NCIH716細胞、TOG細胞、NCIH2291細胞 L-M (TK-)細胞系相關產品:Sp2/0細胞、SKGT2細胞、SKG IIIa細胞 CCRF-CEM C7細胞系相關產品:1301細胞、Colon 26細胞、Alexander細胞 LNCaP-FGC細胞系相關產品:CORL26細胞、NCI-H250細胞、RA 1細胞 BE(2)C細胞系相關產品:SUM 149PT細胞、NT2/D1細胞、BALB/c 3T3 clone A31細胞 343MG細胞系相關產品:Fox/NY細胞、ECC-12細胞、BCP-1細胞 C32 [Human melanoma]細胞系相關產品:T/GHA-VSMC細胞、WC00097細胞、SCC-15細胞 MLM細胞系相關產品:NCI-H1581細胞、NPA-87細胞、GM03320D細胞 HDQ-P1細胞系相關產品:HCT.116細胞、A-673細胞、HIEC細胞 HCC38細胞系相關產品:NCI-H2171細胞、Hs 766.T細胞、MGC803細胞 SK-MEL-24細胞系相關產品:HL 60細胞、EM-3細胞、NuTu 19細胞 HCC-70細胞系相關產品:Swiss/3T3細胞、HBL100細胞、C8D1A細胞 SJSA-1細胞系相關產品:PECAPJ34細胞、HAC-84細胞、MDA.MB.435細胞 OCI-Ly19細胞系相關產品:T84細胞、K-1735細胞、TNC-1B12B4細胞 EM-3細胞系相關產品:WERI-Rb-1細胞、SUP T1細胞、CNE-2細胞 P 815細胞系相關產品:SPCA1細胞、SNU354細胞、EU-3細胞 EAC細胞系相關產品:U-373 MG細胞、Acanthosis Nigricans 3rd attempt-CArcinoma細胞、Swiss-3T3細胞 U-118-MG細胞系相關產品:KP4細胞、Hs611T細胞、NB-9細胞 MDA-MB-361細胞系相關產品:LICR-LON-HN6細胞、FU-MMT-1細胞、Walker256-TC細胞 WM451細胞系相關產品:KMB 17細胞、EFM19細胞、OCI/AML3細胞 LAN1細胞系相關產品:HCE細胞、SKG-IIIa細胞、Mac-1細胞 CHO-ori細胞系相關產品:FL 62891細胞、X63-Ag 8.6.5.3細胞、HCASMC細胞 H-69細胞系相關產品:VK2 (E6/E7)細胞、E304細胞、NCI-H1048細胞 MKN 7細胞系相關產品:MCAEC細胞、COR-L279細胞、JEG-3細胞 HCC2935細胞系相關產品:GLC82細胞、L5178Y TK+/-3.7.2c細胞、OC-3-VGH細胞 WM-266-4細胞系相關產品:CCD-966SK細胞、T-HSC細胞、MCF-7/ADR-RES細胞 MF2059細胞系相關產品:WM266mel細胞、HBL 100細胞、SU.86細胞 293EBNA細胞系相關產品:GM-3573細胞、A375-MEL細胞、Hs-281-T細胞 Merwin Plasma Cell tumor-11細胞系相關產品:PAI細胞、SUM 190細胞、MCF12A細胞 GM04154B細胞系相關產品:CG-4細胞、HCV-29細胞、SNU-354細胞 IAR20細胞系相關產品:SW 1222細胞、WIL2-S細胞、NCIH1573細胞 HOP62細胞系相關產品:UM-RC-2細胞、SK-OV-3細胞、Ku812F細胞 GM00637F細胞系相關產品:TMD-8細胞、H766T細胞、X63-Ag8細胞 PANC3.27細胞系相關產品:BT-B細胞、AU 565細胞、SNGM細胞 OVCA433_Bast細胞系相關產品:AE 1201細胞、Bat lung細胞、T1-73細胞 Hs888Lu細胞系相關產品:COLO 829細胞、Y79細胞、SUM52PE細胞 BV173細胞系相關產品:RGC-5細胞、RBL.2H3細胞、HS-445細胞 OCI AML2細胞系相關產品:MKN-45細胞、SUNE1細胞、GM00346B細胞 Melan-a細胞系相關產品:HCC15細胞、HNE1細胞、HPAF-2細胞 OCI/AML-3細胞系相關產品:MDST8細胞、293FT細胞、He La細胞 GM03569細胞系相關產品:UCLA NPA-87-1細胞、NCIH3255細胞、BV2細胞 MCF7ADR細胞系相關產品:SNU-5細胞、A549ATCC細胞、BrCL12細胞 RPMI1846細胞系相關產品:KYSE50細胞、RSC-96細胞、HASMC細胞 LWnt3A細胞系相關產品:NCI-H2195細胞、NCI-H2330細胞、SGC-7901細胞 MCF-10A epithelioid cells人正常乳腺上皮細胞系 GM17219細胞系相關產品:SUM159細胞、BT483細胞、Hs-852-T細胞 NCI-H165細胞系相關產品:H69C細胞、CL 1-5細胞、TE 32細胞 MGC803細胞系相關產品:A2780-CP細胞、HD-LM-2細胞、H-1666細胞 U14細胞系相關產品:IFRS1細胞、HuH7細胞、Lieming Xu-2細胞 "
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