"NRK epithelioid cells大鼠腎細胞系 細胞背景資料:腎;自發(fā)永生;Osborne-Mendel 細胞形態(tài):上皮細胞樣 正確的細胞復蘇需知事項:細胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復蘇。那么,細胞復蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞:補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至70%單層時收獲細胞,計數(shù)活細胞數(shù),用凍存液調(diào)整細胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復蘇。在凍存管上標記好細胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細胞正確的復蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當從液氮罐內(nèi)取出細胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護面罩和防護服十分必要;其實,細胞復蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。 MKN-74細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RMS 1598細胞、IHHA-1細胞、alpha-TC1-6細胞 J 774A.1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc4.03細胞、SKCol1細胞、KBM-5細胞 639 V細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CD18細胞、V-79-4細胞、FCCH1024細胞 細胞生長:貼壁 NRK epithelioid cells大鼠腎細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗分享:支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養(yǎng)中生長,營養(yǎng)要求比細菌高。細胞培養(yǎng)(特別是傳代細胞)被支原體污染是個世界性問題。在細胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細胞的DNA,RNA及蛋白表達,又不能通過可視法對其進行檢測,而且它對細胞的生長率影響較小,不易引起注意。國內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見的污染細胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細胞的支原體種類是很多的,國外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細胞,有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。組織細胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個方面來預防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴格實驗操作;細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細胞后,特別是重要的細胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細胞壁,一般來講,對作用于細胞壁生物合成的抗生素,如萬古霉素等完全不敏感;對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對支原體有較小抑制作用,所以常不用來作為支原體感染的化學治療劑。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 MZ-CRC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2030細胞、KM933細胞、SUM 102細胞 HCT-8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H-295細胞、CNE1細胞、SK.MEL.28細胞 MC 3T3-E1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUNE1細胞、WBF344細胞、OE19細胞 ROS17/2.8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WERI細胞、HOS TE 85細胞、SKNAS細胞 L615細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM02132C細胞、KOSC-2細胞、Earles's cells細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 NRK epithelioid cells大鼠腎細胞系 細胞生長特性:貼壁 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 常見細胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導致細胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換;3)購買的復蘇細胞,為何會有脫落?因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應立刻將冷凍管再一次扭緊。 A204細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuT 102細胞、KY-270細胞、TK10細胞 MT-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-16細胞、SKNO-1細胞、RPTEC TERT1細胞 J82 COT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-1細胞、Namalva細胞、NCIH196細胞 SW.620細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM-215細胞、MCCAR細胞、SK-NMC細胞 H748細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MJ細胞、H-2009細胞、CAL 27細胞 MHCCLM3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC0095細胞、H2110細胞、SNU-719細胞 LS513細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI Ly1細胞、A-10細胞、NCI-H102細胞 NSC-34細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CMK細胞、FRhK-4細胞、SKRC 39細胞 GM06141B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MGH-U1 (EJ)細胞、SN12-PM6細胞、H-719細胞 Huh-7.5.1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-cells細胞、NPA87細胞、SMA-560細胞 NRK epithelioid cells大鼠腎細胞系 SKLMS-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTERA2D1細胞、ASPC1細胞、16-HBE14o細胞 G-292, clone A141B1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 766.T細胞、SCC-1395細胞、MT4細胞 P3-X63-Ag8-6-5-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JJN-3細胞、CT26細胞、HEK293-EBNA1細胞 MDA435細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NUGC-3細胞、MFE280細胞、JEG3細胞 Sp2/0-Ag14細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUDHL5細胞、OCI-Ly 8細胞、CEMO-1細胞 SGC-996細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 604.T細胞、HCET細胞、LAN1細胞 SGC-996細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 604.T細胞、HCET細胞、LAN1細胞 Leukemia 1210細胞系相關(guān)產(chǎn)品:293T細胞、CL 1-0細胞、U-2OS細胞 NS-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MADB 106細胞、MLOY4細胞、KYSE-140細胞 SNU119細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA1386細胞、MUTZ-3細胞、CL1-0細胞 NCI-H2029細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ku812細胞、P30 OHK細胞、SK-NEP-1細胞 OCI-AML-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-N-DZ細胞、MC9細胞、SW 837細胞 H2108細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MES-13細胞、H-2405細胞、NCIH69細胞 ME-180細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16BL-6細胞、B16 F1細胞、SJ-Rh 30細胞 SUNE1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM06141B細胞、NCIH1930細胞、NCIH446細胞 UMUC3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JJN3細胞、hTERT-RPE1細胞、Rat Lung-65細胞 MPC-11細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U2OS細胞、SJSA細胞、HIT.T15細胞 H1944細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Giant Cell Tumor細胞、HFF1細胞、8505C細胞 HEK293T/17細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNSH細胞、University of Arizona Cell Culture-893細胞、SUM149PT細胞 MV4II細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Asian Medical Center-Head and Neck cancer-8細胞、KYSE520細胞、HFLS-RA細胞 P30/0HK細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UMUC3細胞、H2107細胞、293 Ad5細胞 TW 01細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A20細胞、ECC-1細胞、SC細胞 C 643細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW 01細胞、HTh74細胞、MDA-453細胞 ME 180細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCM-1 [Human rectum adenocarcinoma]細胞、RD 2細胞、IR 983F細胞 SW 1573細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Sp 2817細胞、CBRH7919細胞、MDA231細胞 NCI-H1650細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P30/0HK細胞、Normal fibroblast-10細胞、SKRC-42細胞 SK-N-DZ細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-1847細胞、EC109細胞、BEL 7405細胞 SK-MES1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:G519細胞、MCF7-CTRL細胞、MB468細胞 LL/2 (LLC1)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HeLa229細胞、ROS 17/2.8細胞、LAN6細胞 Blotchy fibroblast-11細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mevo細胞、OCI-AML-3細胞、UMC11細胞 VM-CUB-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BT-483細胞、SF-126細胞、AU565細胞 BHP-10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-Mel 2細胞、FCCH1018細胞、OE33細胞 SKG-3a細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TALL1細胞、NIT-1細胞、Hs 604.T細胞 SUM159細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DH-82細胞、GM02132C細胞、SK-RC 42細胞 HEK293-EBNA細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc 2.03細胞、Hs746T細胞、U-937細胞 KYSE-50細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs604T細胞、Calu 3細胞、SW 620細胞 C81-61細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JB 6細胞、Hs 445細胞、Panc8.13細胞 SkChA1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:REC1細胞、H-146細胞、LU165細胞 38C-13細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MAVER細胞、HT-3細胞、U343細胞 brain-derived Endothelial cells.3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NH-6細胞、RPMI 7951細胞、OCI-Ly 3細胞 HEp-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Jurkat-E6細胞、HCC38細胞、beta TC6細胞 K1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:McCoy B細胞、PLA-802細胞、PNEC30細胞 RSC 96細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ej138細胞、SKMEL-31細胞、IEC 18細胞 HSC-I細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H69細胞、Co 205細胞、HKC細胞 COR-L 105細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHP212細胞、MDCKII細胞、HCCLM3細胞 Mel-MeWo細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UK Pan-1細胞、K562細胞、P3HR1-BL細胞 DHL-6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MLMA細胞、H719細胞、A549/DDP細胞 NRK 52E細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR8細胞、Human Fetal Thymocyte-8810細胞、GC-1細胞 C2-C12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AQ-Mel細胞、WEHI3細胞、KYSE-450細胞 HuT 78細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS 174T細胞、SKMEL3細胞、ST細胞 Human Hepatocyte Line 5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO206F細胞、NB.4細胞、Huh7.5細胞 NRK epithelioid cells大鼠腎細胞系 DITNC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GES-1細胞、LU165細胞、HEK-AD293細胞 HPB-ALL細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Eca 109細胞、VB細胞、LS 1034細胞 ATN-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kit 225細胞、MHH-CALL-2細胞、CAL12T細胞 J774細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LuCL4細胞、OCIAML2細胞、CL 1-5細胞 "
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