茜素紅S染色試劑盒

中文名稱：茜素紅S染色試劑盒

英文名稱：Alizarin Red S Staining Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100mL

茜素紅S染色試劑中的茜素紅S可通過與鈣離子和其他金屬離子發(fā)生鰲和反應(yīng)而形成可以在顯微鏡下直接觀察的帶顏色的復(fù)合物。本產(chǎn)品就是基于此原理而開發(fā)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1．即開即用，用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備各種溶液。
2．操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。
3．可用于組織切片中的鈣沉積，尤其適用于骨細(xì)胞或組織的病理和生理研究。
4．可用于檢測(cè)動(dòng)物原生代或培養(yǎng)細(xì)胞的鈣沉積。
5．本產(chǎn)品為通用型，不但用于鈣離子的檢測(cè)，還可用于FeCl2和CdCl2的檢測(cè)。

試劑盒組成：

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

使用方法：
注意：試劑具有腐蝕性，操作時(shí)須帶手套。實(shí)驗(yàn)時(shí)可以用含金屬離子的切片或培養(yǎng)細(xì)胞作為陽性對(duì)照。可溶性蛋白會(huì)干擾茜素紅S與鈣的相互作用，所以樣品必須經(jīng)過固定處理(以去除細(xì)胞中的可溶性蛋白)。對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞，還必須洗滌去掉培養(yǎng)基(含血清等蛋白成分)。茜素紅S與鈣的螯合反應(yīng)需要在水相發(fā)生，因此加入茜素紅S 前用水溶液洗滌掉前面操作所殘留的有機(jī)溶劑。

一、茜素紅S染色液的準(zhǔn)備
1、根據(jù)所需檢查的金屬離子按下表選擇茜素紅S染色液的pH。

2．用茜素紅S pH調(diào)節(jié)液將茜素紅S染色液調(diào)到所需的pH值。

二、染色載片上細(xì)胞
3．用緩沖中性福爾馬林、福爾馬林-乙醇混合液或乙醇作為固定劑固定鋪在載玻片上的細(xì)胞(本試劑盒不提供上述固定劑)。
4．將細(xì)胞放入95%乙醇中處理。
5．將載玻片在空氣中干燥。
6．將載玻片放在裝有茜素紅S染色液的染色缸中染色1-5分鐘。注意：此步需要密切控制，每隔一分鐘放在顯微鏡下檢測(cè)，時(shí)間隨樣品中鹽離子的多少不同而不同。
7．用蒸餾水洗滌載片一次。
8．用丙酮浸泡載波片30秒。
9．用丙酮-二甲苯混合液(50：50)浸泡浸泡載波片15秒。
10．肉眼可見紅色或紫色(取決于所檢查的離子)即可終止染色，放光學(xué)顯微鏡觀察。鈣沉積陽性細(xì)胞將呈現(xiàn)桔紅色。

三、染色石蠟包埋切片
11．按常規(guī)方法進(jìn)行固定、包埋、切片、脫蠟和水化等操作，直到70%乙醇處理這步。注意：固定劑使用4%的副甲醛或10%福爾馬林，切片厚度在0.4μm。
12．將切片浸入蒸餾水中。
13．將切片浸泡在茜素紅S染色液中30秒-5分鐘，具體時(shí)間以肉眼或顯微鏡下可見桔紅色斑點(diǎn)為準(zhǔn)。
14．用濾紙吸盡染色液后浸入丙酮20次。
15．再進(jìn)入丙酮-二甲苯混合液(50：50)20次。
16．最后用二甲苯處理并用封固劑封片。

四：染色細(xì)胞培養(yǎng)(是26或6孔培養(yǎng)板培養(yǎng)的細(xì)胞，便于在顯微鏡下觀察)
17．小心抽去培養(yǎng)液，注意不要吸走細(xì)胞。
18．沿壁上緩慢加入1-2mL自備的1×PBS或HBSS緩沖液，然后再小心將加入的液體吸出。
19．每孔中加入自備的無水乙醇直到全部覆蓋細(xì)胞，室溫放置30分鐘后小心移棄無水乙醇，室溫晾干。此步用于固定細(xì)胞。也可用10%甲醛代替無水乙醇，但固定時(shí)間只需要15分鐘，同時(shí)還需要用蒸餾水洗滌3次才能進(jìn)入下一步。每次洗滌時(shí)，先加入蒸餾水，再浸泡5-10分鐘，然后小心吸走蒸餾水。注意：操作時(shí)不要破壞細(xì)胞單層。
20．每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)孔中加入1mL 茜素紅S染色液，在室溫下孵育至少20分鐘，最后小心吸走茜素紅S染色液。
21．加入1mL蒸餾水，然后小心吸走蒸餾水。此為洗滌步驟。注意：洗滌一定不要震蕩以避免形成的鈣沉積物脫落。
22．重復(fù)上步操作3次(共洗滌4次)。
23.樣品可立即用于顯微鏡檢測(cè)。有鈣沉積的細(xì)胞將呈現(xiàn)桔紅色。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！