"TK-10 epithelioid cells人腎癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細(xì)胞沒問題??偨Y(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細(xì)胞復(fù)蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細(xì)胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細(xì)胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細(xì)胞都污染一個細(xì)菌的話,這個細(xì)菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細(xì)菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細(xì)胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當(dāng)會事。 RMS 13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1793細(xì)胞、EBC1細(xì)胞、LC-1Sq細(xì)胞 ARO 81-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FHCRC-11細(xì)胞、MV-3細(xì)胞、CNE-2Z細(xì)胞 Caco-2 BBe細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI 6666細(xì)胞、Human Lung Microvascular Endothelial Cell line-5a細(xì)胞、Colo-678細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 TK-10 epithelioid cells人腎癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細(xì)胞時,發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長,用胰酶消化的時候也是一團(tuán)一團(tuán)地被消化下來,很難把它們吹散成一個一個細(xì)胞。而且長得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細(xì)胞和你一樣,消化下來也是一團(tuán)的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕,避免晃動。細(xì)胞生長挺快,那么細(xì)胞的增殖能力應(yīng)該較強(qiáng)。胰酶消化成團(tuán)的問題我覺得有以下幾種可能:一、細(xì)胞消化后吹打不均勻,造成細(xì)胞成團(tuán)生長:二、細(xì)胞細(xì)化太過,細(xì)胞成片脫落,吹打時沒有受力點,細(xì)胞聚團(tuán)生長。解決辦法:根據(jù)細(xì)胞生長的情況進(jìn)行多次消化,將同次消化下來的細(xì)胞放在一個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時間,若胰酶處理太久,容易造成細(xì)胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng),嚴(yán)重的時候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。我談?wù)剛€人經(jīng)驗:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時間可適當(dāng)放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細(xì)胞傳代方法:1:3-1:6傳代;2-3天換液1次。 Karpas-299細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCM細(xì)胞、SHIN-3細(xì)胞、Rat Lung Epithelial-6-T-antigen Negative細(xì)胞 GM346細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LN 229細(xì)胞、HS-766-T細(xì)胞、NCI-H2286細(xì)胞 NCI-SNU-520細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM-159細(xì)胞、H-2029細(xì)胞、NCIH1770細(xì)胞 NK-92細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WPMY1細(xì)胞、CAL-62細(xì)胞、MDA-MB-361細(xì)胞 XWLC-05細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1770細(xì)胞、V79-1細(xì)胞、Hela-mock細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 TK-10 epithelioid cells人腎癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮樣 細(xì)胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細(xì)胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費發(fā)送一株細(xì)胞。收到細(xì)胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。細(xì)胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細(xì)胞多久能到,是寄凍存的細(xì)胞還是復(fù)蘇好的細(xì)胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細(xì)胞前請確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟龋绻麣鉁氐陀冢炊鹊?,則采用郵寄凍存細(xì)胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細(xì)胞無法存活。 AsPC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCF12A細(xì)胞、HCT-8/V細(xì)胞、LSECs細(xì)胞 Cor L51細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NU-GC-3細(xì)胞、8305C細(xì)胞、MeSoTheliOma-211H細(xì)胞 MDST8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2286細(xì)胞、A-704細(xì)胞、MBdSMC細(xì)胞 NCIH1623細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MRC5細(xì)胞、PLA801-95D細(xì)胞、HRA19細(xì)胞 Michigan Cancer Foundation-12F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBL 100細(xì)胞、HRCEC細(xì)胞、WM-2664細(xì)胞 SCC VII細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AN3-CA細(xì)胞、Lilly Laboratories Cell-Monkey Kidney 2細(xì)胞、MFE296細(xì)胞 SUM-149細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RAMOS2G64C10細(xì)胞、HMEC-1細(xì)胞、KYSE-150細(xì)胞 XuanWei Lung Cancer-05細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM 2132細(xì)胞、MFE 280細(xì)胞、R D細(xì)胞 IMR-32細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BpRcl細(xì)胞、SKNF1細(xì)胞、Hs729T細(xì)胞 CT26-clone 25細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MRCV細(xì)胞、Hce8693細(xì)胞、SF 539細(xì)胞 TK-10 epithelioid cells人腎癌細(xì)胞系 SKMEL2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tca-83細(xì)胞、SW1353細(xì)胞、GM04679細(xì)胞 TGW-nu-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hep2細(xì)胞、SW 626細(xì)胞、SF-539 BT細(xì)胞 H2291細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RGC-6細(xì)胞、H841細(xì)胞、HCV-29細(xì)胞 Japanese Tissue Culture-39細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT-8細(xì)胞、Human Embryo Lung-1細(xì)胞、LLC-PK(1)細(xì)胞 NTera 2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:N1E115細(xì)胞、NK62a細(xì)胞、NCI-H295細(xì)胞 MUVEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC-25細(xì)胞、MOLT-3細(xì)胞、SNB19細(xì)胞 MUVEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC-25細(xì)胞、MOLT-3細(xì)胞、SNB19細(xì)胞 SMMC 7721細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EBNA293細(xì)胞、NCIH1792細(xì)胞、H2347細(xì)胞 BE(2)M17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mhh-Call 2細(xì)胞、MPP-89細(xì)胞、Normal Rat, August 3, 1983細(xì)胞 MLMA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H727細(xì)胞、COLO-16細(xì)胞、SW1417細(xì)胞 COLO320DM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GC-1spg細(xì)胞、HFF細(xì)胞、HEL 92.1.7細(xì)胞 R-1059-D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DanG細(xì)胞、C41細(xì)胞、RBL-1細(xì)胞 Gerner 7666細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 821.T細(xì)胞、RT 112細(xì)胞、HEK 293A細(xì)胞 DSL6A/C1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC-4細(xì)胞、SW 900細(xì)胞、LK-2細(xì)胞 GOS3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH660細(xì)胞、H-28細(xì)胞、LAN-1細(xì)胞 Tn 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Lacassagne-85-1細(xì)胞、GBC-SD細(xì)胞、BHP 10-3細(xì)胞 HUT 125細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTEP a2細(xì)胞、TPC1細(xì)胞、SW260細(xì)胞 3T3-L1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NS1-Ag 4/1細(xì)胞、LTEP-a2細(xì)胞、CCD1112Sk細(xì)胞 CEM-T4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB 468細(xì)胞、OCI-AML-2細(xì)胞、MDCK (NBL-2)細(xì)胞 HUVEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:QG-56細(xì)胞、HCC0078細(xì)胞、CL1-5細(xì)胞 SW-1271細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HeLa/S3細(xì)胞、HEK293T/17細(xì)胞、DLD 1細(xì)胞 TFK-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PNT1A細(xì)胞、MES-SA-Dx5細(xì)胞、MDA PCa 2b細(xì)胞 MILE SVEN1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T3-A31細(xì)胞、HuH7細(xì)胞、IFRS1細(xì)胞 HBSMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 832(C).T細(xì)胞、SW1222細(xì)胞、CWR22R細(xì)胞 Cor L88細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1573細(xì)胞、SW-900細(xì)胞、CV1細(xì)胞 WM-239A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE 410細(xì)胞、BRL-3A細(xì)胞、Mel-624細(xì)胞 WM-239A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE 410細(xì)胞、BRL-3A細(xì)胞、Mel-624細(xì)胞 OVCA 432細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:YES2細(xì)胞、NT-2細(xì)胞、HOC細(xì)胞 NCIH1915細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW260細(xì)胞、293細(xì)胞、MDA 435細(xì)胞 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