"MPP 89 epithelioid cells間皮瘤細胞系 細胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復(fù)蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題??偨Y(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復(fù)蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當(dāng)會事。 HPAF-II/CD18細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MSC細胞、GM-346細胞、SUP-B15細胞 SHEP1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKRC-39細胞、Panc-08.13細胞、Hs940T細胞 MDA-MB 453細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LoVo細胞、NCI-H727細胞、2780CP細胞 細胞生長:貼壁 MPP 89 epithelioid cells間皮瘤細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細胞時,發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長,用胰酶消化的時候也是一團一團地被消化下來,很難把它們吹散成一個一個細胞。而且長得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細胞和你一樣,消化下來也是一團的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕,避免晃動。細胞生長挺快,那么細胞的增殖能力應(yīng)該較強。胰酶消化成團的問題我覺得有以下幾種可能:一、細胞消化后吹打不均勻,造成細胞成團生長:二、細胞細化太過,細胞成片脫落,吹打時沒有受力點,細胞聚團生長。解決辦法:根據(jù)細胞生長的情況進行多次消化,將同次消化下來的細胞放在一個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細胞團塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細胞的傳代最重要的是胰酶處理時間,若胰酶處理太久,容易造成細胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強,嚴(yán)重的時候甚至?xí)斐杉毎劳?。我談?wù)剛€人經(jīng)驗:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細胞處理時間可適當(dāng)放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 MTEC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-1833細胞、Vero 76 clone E6細胞、HS-294細胞 MCF-12F細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-741細胞、FHL 124細胞、GRSL細胞 TGBC11TKB細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2085細胞、NCTC-3960細胞、OVCAR-433細胞 AG 9細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos-RA1細胞、IAR20細胞、NCIH345細胞 SKMEL-31細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NOMO1細胞、EST81細胞、b.End3細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 MPP 89 epithelioid cells間皮瘤細胞系 細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復(fù)蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認當(dāng)?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應(yīng),造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 TSCC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-756細胞、M4e細胞、HuP-T4細胞 190PT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 888.T細胞、OCM1A細胞、Calu 3細胞 CF PAC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WSU-DLCL(2)細胞、NCI-H841細胞、TE12細胞 H2444細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1437細胞、NCI-H1568細胞、SW 48細胞 NCI522細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-kb2細胞、Epithelioma Papulosum Cyprini細胞、OCI-LY-19細胞 C-8161細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PLB-985細胞、BS-C-1細胞、SNU-423細胞 TE-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GOS-3細胞、Hs 675.T細胞、SNT-8細胞 H2342細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HGE細胞、3AA細胞、MC 3T3-E1細胞 Balb/3T3-4-Cl31細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PL-5細胞、Tb1.Lu細胞、CHG5細胞 Colon-26細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LN 382細胞、PM6細胞、COLO 357細胞 MPP 89 epithelioid cells間皮瘤細胞系 NG10815細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P30-OHK細胞、B78細胞、IOSE-80細胞 HeLa S 3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:YD-38細胞、C2BBe 1細胞、L-363細胞 MDA.MB.435細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B-cell with DC Morphology細胞、PCI-4.2細胞、Liver-02細胞 HGF-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PAN 02細胞、SNU-869細胞、JIMT-1細胞 SCL-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BNCL-2細胞、LNCaP subline C4-2細胞、PIG3細胞 SKOV-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOLT 3細胞、MADB-106細胞、G-292細胞 SKOV-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOLT 3細胞、MADB-106細胞、G-292細胞 HN4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LA4細胞、MDA361細胞、H-1618細胞 YT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LLC細胞、HCEpiC細胞、SKNMC細胞 WM266細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KE-39細胞、NTERA2-cloneD1細胞、293EBNA細胞 NCI-H2085細胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-6細胞、H-7721細胞、HT55細胞 SK-ES-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CD18/HPAF細胞、GCT細胞、N87細胞 A7r5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKCol1細胞、HuH6細胞、NCI-H64細胞 H1693細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC-14細胞、QGY7703細胞、NE1-E6E7細胞 130T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:L 132細胞、HuPT4細胞、F81細胞 RetroPack PT67細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MAD109細胞、CAL78細胞、T84細胞 HcerEpic細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-596細胞、Hepa1-6細胞、hUC-MSC細胞 Rat Lung-65細胞系相關(guān)產(chǎn)品:M-07e細胞、OCI Ly3細胞、Mv.1.Lu細胞 MESSA Dx5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PASMCS細胞、CCD19-Lu細胞、U251細胞 TNC-1B12B4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Pa18C細胞、G-402細胞、U373MG細胞 MIA PaCa-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H82細胞、SP2細胞、DoTc2-4510細胞 SKN-SH細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs606細胞、GOS-3細胞、B16-F0細胞 1E8-H細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI 7666細胞、RBSMC細胞、LNCaP細胞 H9c2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DU_145細胞、HOS(TE85)細胞、FOX-NY細胞 CEM/C1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2106細胞、DH-82細胞、NK-92.05細胞 TSCC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-756細胞、M4e細胞、HuP-T4細胞 NCI-ADR-RES細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Wayne State University-Head and Neck 13細胞、RPMI1846細胞、WEHI164細胞 293c18細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH23細胞、UO31細胞、BC-023細胞 Gerner 7666細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 821.T細胞、RT 112細胞、HEK 293A細胞 P30/OHK細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WSU-HN13細胞、LCD細胞、PAEC細胞 AN3-CA細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UCLA-SO-M20細胞、GM16136細胞、SNK-1細胞 TE85細胞系相關(guān)產(chǎn)品:tdott細胞、NCIH208細胞、Hs 840.T細胞 NCIH2106細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM03190細胞、RCF細胞、MN 60細胞 LS411N細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-510細胞、GM2219C細胞、MC-CAR細胞 WB-F344細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H211細胞、Kit225/K6細胞、WM239A細胞 OKAC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3JHR1細胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-10細胞、MC57細胞 MIN-6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC090細胞、DCS細胞、Caov-4細胞 HT 29細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TM4細胞、G361-mel細胞、SRA01/04 (HLE)細胞 OCUM-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB-157細胞、NCI-H1666細胞、HEK (AD293)細胞 SK-ChA-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHL細胞、PC-3細胞、TOV-112D細胞 OCIAML5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Leukemia 1210細胞、HS-294細胞、HEL-92-1-7細胞 Hs 274.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KU.812細胞、HECV細胞、NCIH23細胞 OKT 3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-638細胞、ROS17/2.8細胞、SK-N-BE(2)-M17細胞 S37細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBE135-E6E7細胞、Jurkat, Clone E6-1細胞、NCIH716細胞 LAPC4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EVSAT細胞、SNU886細胞、Bovine ENDometrial cells細胞 WM35細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-172細胞、293F細胞、H-2286細胞 MDCKII-WT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MMAc-SF細胞、HRGEC細胞、JVM2細胞 BC-025細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos G6.C10細胞、Human Microglia Clone 3細胞、NCI-H748細胞 SW-1573細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDBK (NBL-1)細胞、IM 9細胞、NR 8383細胞 SW 1353細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 729.T細胞、WM266-4細胞、alphaTC clone 6細胞 CD 18細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KU1919細胞、Earle's L cells細胞、HR-8348細胞 MPP 89 epithelioid cells間皮瘤細胞系 WPMY1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TJ905細胞、SNU-C1細胞、KYSE 140細胞 H-2110細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC 786-O細胞、FT-293細胞、HCC-202細胞 MUG-Chor1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mv1.Lu細胞、OCI Ly3細胞、EBC1細胞 CF PAC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WSU-DLCL(2)細胞、SK Hep1細胞、NCI-H295細胞 "
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