"HT-1080 epithelioid cells人纖維肉瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:該細(xì)胞源自一名35歲患有纖維肉瘤的白人男性的結(jié)締組織;ras+。 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項(xiàng):細(xì)胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯(cuò),就是記得到時(shí)間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個(gè)最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個(gè)液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點(diǎn):當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時(shí),有可能會(huì)出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實(shí),細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡單的實(shí)驗(yàn),不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會(huì)盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對(duì)細(xì)胞的損傷等等。 CCLP-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW-039細(xì)胞、CORL51細(xì)胞、A20細(xì)胞 rHSC-99細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:624細(xì)胞、Onda 11細(xì)胞、Panc327細(xì)胞 HK-2 [Human kidney]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:University of Arizona Cell Culture-812細(xì)胞、KBM-7/Hap8細(xì)胞、H-522細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 HT-1080 epithelioid cells人纖維肉瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長,用胰酶消化的時(shí)候也是一團(tuán)一團(tuán)地被消化下來,很難把它們吹散成一個(gè)一個(gè)細(xì)胞。而且長得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長得滿滿的了。想請(qǐng)教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細(xì)胞和你一樣,消化下來也是一團(tuán)的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動(dòng)培養(yǎng)皿的時(shí)候盡量動(dòng)作輕,避免晃動(dòng)。細(xì)胞生長挺快,那么細(xì)胞的增殖能力應(yīng)該較強(qiáng)。胰酶消化成團(tuán)的問題我覺得有以下幾種可能:一、細(xì)胞消化后吹打不均勻,造成細(xì)胞成團(tuán)生長:二、細(xì)胞細(xì)化太過,細(xì)胞成片脫落,吹打時(shí)沒有受力點(diǎn),細(xì)胞聚團(tuán)生長。解決辦法:根據(jù)細(xì)胞生長的情況進(jìn)行多次消化,將同次消化下來的細(xì)胞放在一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時(shí)間,若胰酶處理太久,容易造成細(xì)胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng),嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。我談?wù)剛€(gè)人經(jīng)驗(yàn):HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時(shí)間可適當(dāng)放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細(xì)胞傳代方法:1:4-1:8?jìng)鞔唬?3天換液1次。 NCIH82細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT55細(xì)胞、NTera 2細(xì)胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-1細(xì)胞 BaF3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ECV304細(xì)胞、NCIH526細(xì)胞、H-1437細(xì)胞 RC92A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1648細(xì)胞、CCC-HEH-2細(xì)胞、HUT 125細(xì)胞 SKMEL5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C57 Mouse Tumor 93細(xì)胞、PC-3M-1E8細(xì)胞、293-EBNA1細(xì)胞 HOS(TE85)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HAVSMC細(xì)胞、NCI-841細(xì)胞、NCIH2347細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 HT-1080 epithelioid cells人纖維肉瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮樣 常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長會(huì)產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因?yàn)楹窟^低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞營養(yǎng)不足,過高則會(huì)破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會(huì)有脫落?因?yàn)檫\(yùn)輸?shù)倪^程中不可避免的會(huì)有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 H-1373細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCO細(xì)胞、CHP 212細(xì)胞、MCFs細(xì)胞 LAD-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293FT細(xì)胞、PLC-PRF-5細(xì)胞、TB1 Lu細(xì)胞 HuT 102細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAKI 1細(xì)胞、GM15452細(xì)胞、SW954細(xì)胞 C17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-453細(xì)胞、SK-MEL-31細(xì)胞、Tn5B1-4細(xì)胞 H-520細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:QGP-1細(xì)胞、UPCI-SCC090細(xì)胞、CPAE細(xì)胞 B16 melanoma細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:As-PC1細(xì)胞、End1/E6E7細(xì)胞、H889細(xì)胞 OV1-P細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H740細(xì)胞、SK-ChA-1細(xì)胞、UPCI:SCC154細(xì)胞 OSC-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BE2_C細(xì)胞、MDA 1386細(xì)胞、CL 1-0細(xì)胞 LS 180細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT-1080細(xì)胞、MODE-K細(xì)胞、H-661細(xì)胞 EJ細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hepa-RG細(xì)胞、SNT8細(xì)胞、CORL105細(xì)胞 HT-1080 epithelioid cells人纖維肉瘤細(xì)胞系 Hs445細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-RC-39細(xì)胞、CAL85-1細(xì)胞、CEM-C1細(xì)胞 BC3H1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:T9細(xì)胞、OC 316細(xì)胞、NS-20Y細(xì)胞 NCI-SNU-119細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NRK clone 49F細(xì)胞、MDAMB134細(xì)胞、H-2172細(xì)胞 RWPE2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-8細(xì)胞、DMS 153細(xì)胞、SCLC21H細(xì)胞 CG4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PaTu 8988s細(xì)胞、PLC/PRF/5細(xì)胞、HCC1954-BL細(xì)胞 H920細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HG2855細(xì)胞、SPCA-1細(xì)胞、MA-c細(xì)胞 H920細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HG2855細(xì)胞、SPCA-1細(xì)胞、MA-c細(xì)胞 H22細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE 70細(xì)胞、Y3Ag1.2.3細(xì)胞、Glioma 261細(xì)胞 Hs 766T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HRVEC細(xì)胞、MDA MB 436細(xì)胞、WM-266-4細(xì)胞 H22-H8D8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHL1細(xì)胞、NCI-H69C細(xì)胞、HS-294-T細(xì)胞 SCC-1395細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:mREC細(xì)胞、HCC-1500細(xì)胞、Buffalo Rat Liver-3A細(xì)胞 RBL-2H3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EFM192B細(xì)胞、KB細(xì)胞、C4-2 Bone metastatic細(xì)胞 NCI-H740細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LA-N-6細(xì)胞、AM細(xì)胞、Panc_08_13細(xì)胞 Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A375SM細(xì)胞、RL-95-2細(xì)胞、IB-RS-2細(xì)胞 Ramos 2G6.4C10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NSI/1-Ag4-1細(xì)胞、Hx147細(xì)胞、no.11細(xì)胞 WERIRb1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Clone 15 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