細(xì)胞膜紅色熒光探針

中文名稱：細(xì)胞膜紅色熒光探針

英文名稱：DiI

產(chǎn)品規(guī)格：10mg

DiI是一種親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)，進入細(xì)胞膜后，DiI在整個細(xì)胞膜上擴散，濃度時可以使整個細(xì)胞膜染色。DiI在進入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強度大大增強，DiI被激發(fā)后可以發(fā)出橙紅色的熒光，具有很高的淬滅常數(shù)，中等強度的光量子和很短的激發(fā)態(tài)壽命?？梢杂脴?biāo)準(zhǔn)的TRITC濾光片檢測。

DiI通常不會明顯影響細(xì)胞的生存力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑（long-term tracer）。除了最簡單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外，還可以用于檢測細(xì)胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細(xì)胞遷移，通過FRAP（Fluorescence Recovery After Photobleaching）檢測脂在細(xì)胞膜上的擴散，檢測細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。

CAS：41085-99-8
分子式：C59H97ClN2O4
分子量：933.87
外觀：紅色至暗紅色，紫色至深紫色粉末
Ex/Em：550/567 nm
推薦濾光器：XF32-Omega, 31002-Chroma
純度：≥98%（TLC）
溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇
儲存條件：4℃避光,有效期一年
結(jié)構(gòu)式：


使用方法

1. 染色液制備
（1）配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。
【注】未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復(fù)凍融。
（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。
【注】工作液最終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實驗體系來優(yōu)化。

2. 懸浮細(xì)胞染色
（1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×106/mL。
（2）37 ℃孵育細(xì)胞 2～20min，不同的細(xì)胞培養(yǎng)時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。
（3）孵育結(jié)束，按1000～1500 rpm離心5min。
（4）傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。
（5）重復(fù)（3），（4）步驟兩次以上。

3. 貼壁細(xì)胞的染色
（1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。
（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。
（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。
（4）37 ℃孵育細(xì)胞 2～20min，不同的細(xì)胞培養(yǎng)時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。
（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5～10min，然后吸干培養(yǎng)基。

4. 顯微鏡檢測
（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。
（2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設(shè)定：
a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

5. 流式細(xì)胞儀檢測
經(jīng)DiO，DiI，DiD和DiR染色的細(xì)胞可分別用流式細(xì)胞儀的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3或FL4通道檢測。
 

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！