AnnexinV-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

中文名稱：AnnexinV-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

英文名稱：Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：20T

Annexin V-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒是用熒光素APC標(biāo)記的Annexin V作為探針，來檢測細(xì)胞早期凋亡的發(fā)生，可用流式細(xì)胞儀或其他熒光檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。

其檢測原理為：在正常的活細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine，PS）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在早期凋亡的細(xì)胞中，PS從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-V（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力結(jié)合?？赏ㄟ^細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。

另外，本試劑盒中提供的7-AAD可用來區(qū)分存活的早期細(xì)胞和壞死或晚期凋亡細(xì)胞。7-AAD是一種核酸染料，同PI有著相似的熒光特性，但其發(fā)射光譜較PI窄，對其他檢測通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI的替代品，可與Annexin V聯(lián)合使用。該染料不能透過正常細(xì)胞或早期凋亡細(xì)胞的完整的細(xì)胞膜，但可穿透晚期凋亡細(xì)胞或者壞死細(xì)胞并與其內(nèi)的DNA結(jié)合。因此將Annexin V-APC與7-AAD聯(lián)合使用時，7-AAD則被排除在活細(xì)胞（Annexin V-/7-AAD-）和早期凋亡細(xì)胞（Annexin V+/7-AAD-）之外，而晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞同時被Annexin V-APC和7-AAD結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性（Annexin V+/7-AAD+）。

試劑盒組份：
重組人Annexin V/APC*（rh Annexin V/APC）———100µl
7-AAD Viability Staining Solution——————100µl
1×Binding buffer——————————————10ml

注意事項
1） 試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
2） 7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護(hù)措施，穿防護(hù)服、戴手套等；
3） 推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。若是貼壁細(xì)胞，建議使用不含EDTA的胰酶消化，如果消化不當(dāng)，可能引起假陽性；若用細(xì)胞刮子則會造成細(xì)胞黏連成團(tuán)而影響檢測?？蓪⒁让赶蟮募?xì)胞保存于含2% BSA的PBS中，防止進(jìn)一步的損傷。
4） 本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測時，細(xì)胞數(shù)量不應(yīng)低于1×105，不推薦用于組織樣本檢測。
5） 請勿固定樣品，細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的猝滅；
6） 因檢測細(xì)胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測儀器不同，因而流式檢測的熒光補償也不同，因此建議每次檢測均需使用未經(jīng)凋亡細(xì)胞處理的細(xì)胞作為陰性對照，并進(jìn)行熒光補償?shù)恼{(diào)節(jié)。
7） 如果樣品來源于血液，請務(wù)必除去血液中的血小板。因為血小板含有PS，能與Annexin V結(jié)合，從而干擾實驗結(jié)果?？梢允褂煤蠩DTA的緩沖劑并低速離心（200×g）洗去血小板，然后用Annexin V結(jié)合緩沖液清洗細(xì)胞，以避免殘留的EDTA會螯合Ca2+。
8） Annexin V-APC和7-AAD是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光。
9） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

儲存條件：4℃，有效期一年。
 

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！