TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(顯色法)

中文名稱：TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(顯色法)

英文名稱：Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：20次|50次

本試劑盒提供了一種高靈敏度又快速簡(jiǎn)便的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法。對(duì)于待檢測(cè)的細(xì)胞或組織樣品，經(jīng)過生物素標(biāo)記和后續(xù)的DAB顯色等步驟，即可在普通光學(xué)顯微鏡下觀察到凋亡細(xì)胞。本試劑盒足夠檢測(cè)20個(gè)樣品。

試劑盒組分：
TdT酶———————————40μl
Biotin-dUTP————————960μl
TdT酶稀釋液(選用)—————500μl
Streptavidin-HRP——————22μl
Streptavidin-HRP稀釋液———1ml
DAB顯色液A————————6ml
DAB顯色液B————————6ml
標(biāo)記反應(yīng)終止液——————6ml

細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時(shí)，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)的催化下加上生物素(Biotin)標(biāo)記的dUTP(Biotin-dUTP)，隨后和辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的Streptavidin(Streptavidin-HRP)結(jié)合，最后在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細(xì)胞，從而可以通過普通光學(xué)顯微鏡檢測(cè)到凋亡的細(xì)胞，這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理。

本試劑盒有如下優(yōu)點(diǎn)：
(1)高靈敏度：背景染色極低，陽性染色強(qiáng)，可以在單細(xì)胞水平檢測(cè)到細(xì)胞凋亡，同時(shí)由于凋亡早期就有DNA斷裂，可以檢測(cè)到早期的細(xì)胞凋亡。
(2)特異性好：TUNEL檢測(cè)時(shí)通常更容易標(biāo)記凋亡細(xì)胞，而不容易標(biāo)記壞死細(xì)胞。
(3)快速：僅需約2-3個(gè)小時(shí)即可完成。
(4)應(yīng)用范圍廣：可以用于檢測(cè)冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況，也可以檢測(cè)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。

TUNEL法特異性檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)產(chǎn)生的DNA斷裂，但不會(huì)檢測(cè)出射線等誘導(dǎo)的DNA斷裂(和細(xì)胞凋亡時(shí)的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開，另一方面也不會(huì)把射線等誘導(dǎo)發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細(xì)胞判斷為凋亡細(xì)胞。

極少數(shù)細(xì)胞凋亡時(shí)沒有DNA斷裂，此時(shí)不適用TUNEL法檢測(cè)。在個(gè)別類型的壞死細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測(cè)呈陽性。在需要嚴(yán)格判斷細(xì)胞凋亡的情況下，同時(shí)檢測(cè)多個(gè)凋亡指標(biāo)。

注意事項(xiàng)：

1.需自備用于洗滌細(xì)胞的PBS或HBSS，用于封片的抗熒光淬滅封片液(YT097)等適當(dāng)?shù)姆馄?，用于固定?%多聚甲醛或向訂購(gòu)免疫染色固定液(YT086)，同時(shí)需自備含0.1%Triton X-100的PBS或向訂購(gòu)免疫染色洗滌液(YT089)。需自備過氧化氫，除石蠟切片外需自備甲醇。
2.如果用于石蠟切片的檢測(cè)，需自備蛋白酶K，二甲苯。

儲(chǔ)存條件：-20℃。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！