Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

中文名稱：Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

英文名稱：Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：20次|50次

本試劑盒是用FITC標(biāo)記的重組人Annexin V來檢測細(xì)胞凋亡時出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面的磷脂酰絲氨酸的一種細(xì)胞凋亡檢測試劑盒?？梢允褂昧魇郊?xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設(shè)備進行檢測。一個包裝的本試劑盒共可以檢測20個細(xì)胞樣品。

試劑盒組份：
Annexin V-FITC——————100µl
Annexin V-FITC結(jié)合液———12ml
碘化丙啶染色液——————220µl

Annexin是一類廣泛分布于真核細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷脂結(jié)合蛋白，參與細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。但僅Annexin V被報道可以調(diào)控一些PKC的活性。

Annexin V選擇性結(jié)合磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱PS)。磷脂酰絲氨酸主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，即與細(xì)胞漿相鄰的一側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細(xì)胞都會把磷脂酰絲氨酸外翻到細(xì)胞表面，即細(xì)胞膜外側(cè)。磷脂酰絲氨酸暴露到細(xì)胞表面后會促進凝血和炎癥反應(yīng)。而Annexin V和外翻到細(xì)胞表面的磷脂酰絲氨酸結(jié)合后可以阻斷磷脂酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應(yīng)活性。

用帶有綠色熒光的熒光探針FITC標(biāo)記的Annexin V，即Annexin V-FITC，就可以用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷脂酰絲氨酸的外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。

本試劑盒還提供了碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液，碘化丙啶可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，呈現(xiàn)紅色熒光。對于壞死細(xì)胞，由于細(xì)胞膜的完整性已經(jīng)喪失，Annexin V-FITC可以進入到細(xì)胞漿內(nèi)，與位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸結(jié)合，從而也使壞死細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光。

本試劑盒的流式檢測效果參考圖1和圖2，熒光顯微鏡檢測效果參考圖3。


圖1.細(xì)胞用本試劑盒染色后流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡的效果圖。Jurkat細(xì)胞未經(jīng)處理(A)或用10μM喜樹堿(Camptothecin)作用4小時(B)后，用本試劑盒染色，然后用流式細(xì)胞儀進行細(xì)胞的散射和熒光檢測。從圖中可以看出，經(jīng)過凋亡誘導(dǎo)劑喜樹堿處理后的細(xì)胞，其Annexin V-FITC染色陽性并且PI染色陰性的細(xì)胞，即凋亡細(xì)胞，明顯增加(B圖的右下象限)，Annexin V-FITC和PI染色雙陽性的細(xì)胞，即壞死細(xì)胞，也有所增加(B圖的右上象限)。圖中Annexin V-FITC染色陰性PI染色陽性(Annexin V-/PI+)所在象限(A和B圖的左上象限)出現(xiàn)的細(xì)胞點是許可范圍內(nèi)的檢測誤差。實測數(shù)據(jù)可能會因細(xì)胞類型、細(xì)胞凋亡情況、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。


圖2.細(xì)胞用本試劑盒染色后流式細(xì)胞儀檢測效果驗證圖。Jurkat細(xì)胞用10μM喜樹堿(Camptothecin)作用4小時后，未經(jīng)染色(A)、僅用本試劑盒中的PI進行染色(B)、僅用本試劑盒中的Annexin V-FITC進行染色(C)、用本試劑盒中的Annexin V-FITC和PI進行雙染(D)。從圖中可以看出，未經(jīng)染色的是雙陰性細(xì)胞(A)，僅PI染色后出現(xiàn)了預(yù)期的PI染色陽性的細(xì)胞，僅Annexin V-FITC染色出現(xiàn)了預(yù)期的Annexin V-FITC染色陽性的細(xì)胞，Annexin V-FITC和PI雙染出現(xiàn)了預(yù)期的僅Annexin V-FITC染色陽性的凋亡細(xì)胞和雙陽性的壞死細(xì)胞。出現(xiàn)的非預(yù)期的細(xì)胞點完全在許可的誤差范圍內(nèi)。實測數(shù)據(jù)可能會因細(xì)胞類型、細(xì)胞凋亡情況、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。

注意事項：
1. 如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
2. 染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
3. 如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
4. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
5. 用于流式細(xì)胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。

儲存條件：4℃避光，有效期6個月。

特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！