"NCI-H748 epithelioid cells人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的問(wèn)題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過(guò)程沒(méi)有問(wèn)題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問(wèn)題,還有確信拿來(lái)的細(xì)胞沒(méi)問(wèn)題。總結(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實(shí)際上復(fù)蘇出問(wèn)題的可能非常小,因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單,而且死板。1、你凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過(guò)長(zhǎng),這是一般人所注意不到的,即使書(shū)上也不講這個(gè)問(wèn)題,太長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會(huì)死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過(guò)7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻,這個(gè)有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個(gè)事情,因?yàn)檫@個(gè)東西流程長(zhǎng)。6、如果你細(xì)胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個(gè)角度講建議去除離心這步。7、你的細(xì)胞在凍存前是否過(guò)密。還有,不贊成孵箱污染這個(gè)概念的,所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話,這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因?yàn)榉跸錈o(wú)論你如何處理都有大量的細(xì)菌,問(wèn)題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問(wèn)題,這個(gè)很重要,不能靠猜,否則你就有可能細(xì)胞養(yǎng)絕最后換課題,這個(gè)見(jiàn)得太多了,別不當(dāng)會(huì)事。 SU.86.86細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:D6P2T細(xì)胞、U031細(xì)胞、IMR90細(xì)胞 MGHU3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOLT.4細(xì)胞、WM-115細(xì)胞、NCIH1963細(xì)胞 HR-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK293F細(xì)胞、Walker-256-TC細(xì)胞、SNU638細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 NCI-H748 epithelioid cells人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 冷凍細(xì)胞解凍程序:依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單指定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它指定之成份和比例,制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無(wú)法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類,若因?qū)嶒?yàn)需要,必須有所不同時(shí),務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成,確定細(xì)胞適應(yīng)后,方進(jìn)行所需之實(shí)驗(yàn)。FBS(fetal bovine serum,胚牛血清), CS(calf serum,小牛血清)和HS(horse serum,馬血清),對(duì)細(xì)胞而言差異極大,請(qǐng)務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單指定之血清種類培養(yǎng)之。將培養(yǎng)基置于37°C水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之,移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。取出冷凍管,立即放入37°C水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過(guò)冷凍管之蓋沿,否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化后,以70%ethanol擦拭冷凍管外部,移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。依據(jù)細(xì)胞種類和濃度,于無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)?。保癿l培養(yǎng)基加至T25或T75flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液,緩緩加入T25或T75flask內(nèi)之培養(yǎng)基,混合均勻,放入37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。對(duì)絕大多數(shù)細(xì)胞而言,1%以下之冷凍保護(hù)劑DMSO,不會(huì)對(duì)細(xì)胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍細(xì)胞中去除,待第二天確定細(xì)胞生長(zhǎng)或貼附良好后再去除即可。惟對(duì)極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會(huì)造成細(xì)胞分化之細(xì)胞,需立即去除DMSO者,則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5-10ml培養(yǎng)基中,離心300xg(約1000rpm),5分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養(yǎng)基,將細(xì)胞均勻混合后,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,再放入37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 細(xì)胞傳代方法:3-4天換液1次。 Laboratory of Allergic Diseases 2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU-DHL-1細(xì)胞、Hep 3B2_1-7細(xì)胞、GM-215細(xì)胞 U266 B1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH727細(xì)胞、NHA細(xì)胞、H920細(xì)胞 BTT739細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-937細(xì)胞、H1869細(xì)胞、My-La 2059細(xì)胞 NHEK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA 435細(xì)胞、526 mel細(xì)胞、OCI-Ly 18細(xì)胞 SW1417細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B-16細(xì)胞、Kuramochi細(xì)胞、L細(xì)胞 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 NCI-H748 epithelioid cells人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:懸浮生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū) 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)問(wèn)題總結(jié):1)一般客戶拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細(xì)胞后先不開(kāi)蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開(kāi)封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過(guò)80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過(guò)80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。細(xì)胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細(xì)胞多久能到,是寄凍存的細(xì)胞還是復(fù)蘇好的細(xì)胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細(xì)胞前請(qǐng)確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細(xì)胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無(wú)法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。 AMJ2C8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Capan 2細(xì)胞、BE2C細(xì)胞、X63-Ag 8.6.5.3細(xì)胞 SupT1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HB611細(xì)胞、HCC1171細(xì)胞、H4-IIE-C3細(xì)胞 HKF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-157細(xì)胞、OV1063細(xì)胞、NCIH520細(xì)胞 BEP2D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuT102細(xì)胞、HFL-I細(xì)胞、LS-1034細(xì)胞 6-T CEM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:1.1B4細(xì)胞、TR146細(xì)胞、Walker256細(xì)胞 H-1770細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RSC 96細(xì)胞、Fetal Human Lens-124細(xì)胞、PLC/PRF/5細(xì)胞 OVCAR3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BLO-11細(xì)胞、SNB.19細(xì)胞、NCI-H711細(xì)胞 Hs852T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UCLA NPA871細(xì)胞、NCI-H1573細(xì)胞、KTA-7細(xì)胞 RGM1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C1R細(xì)胞、HT-29細(xì)胞、SKMel-28細(xì)胞 ZYM-DIEC02細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPaSteC(HPSC)細(xì)胞、RPPVEC細(xì)胞、NL20SV細(xì)胞 NCI-H748 epithelioid cells人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系 NEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U14細(xì)胞、H1355細(xì)胞、Clone M-3細(xì)胞 RCC 7860細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-205細(xì)胞、WEHI231細(xì)胞、CAKI 2細(xì)胞 NT2D1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GAK細(xì)胞、NL20SV細(xì)胞、D10細(xì)胞 SK_HEP1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WIL2 S細(xì)胞、Panc 03.27細(xì)胞、Hk-2細(xì)胞 MES-SA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCF-12A細(xì)胞、SUNE 1細(xì)胞、6-10B細(xì)胞 Panc327細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KPL-1細(xì)胞、BEL-7402細(xì)胞、COLO-320HSR細(xì)胞 OV2008細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NS1-Ag4/1細(xì)胞、HRC-99細(xì)胞、NCI-H727細(xì)胞 Panc 10.05細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U373-MG細(xì)胞、CMT-93細(xì)胞、SNUC2A細(xì)胞 UCLA-SO-M20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-2935細(xì)胞、Henrietta Lacks cells細(xì)胞、BC-3H-1細(xì)胞 High5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C2BBe 1細(xì)胞、Kit225 K6細(xì)胞、BrCL15細(xì)胞 C6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1975細(xì)胞、GNM細(xì)胞、MUTZ-3細(xì)胞 SKLMS-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTERA2D1細(xì)胞、ASPC1細(xì)胞、16-HBE14o細(xì)胞 As-PC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB-435-S細(xì)胞、U373細(xì)胞、L5178Y TK+/- (clone 3.7.2C)細(xì)胞 MDA-436細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RKOAS451細(xì)胞、BNL-CL.2細(xì)胞、HUT28細(xì)胞 LAD 2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GC-1細(xì)胞、SN4741細(xì)胞、Hs 746T細(xì)胞 CACO2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PCI:SG231細(xì)胞、HFB細(xì)胞、GBCSD細(xì)胞 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