"ANA-1 Cell:小鼠巨噬細(xì)胞系
細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣
細(xì)胞生長:懸浮
細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹
MDCK supertube細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MF2059細(xì)胞、NCIH1693細(xì)胞、NBL-4細(xì)胞
Y-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-2細(xì)胞、Panc4.03細(xì)胞、HEC251細(xì)胞
GA10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-322細(xì)胞、HCT116/L細(xì)胞、TK+/- (clone 3.7.2C)細(xì)胞
AR4-2J細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Epithelioma Papulosum Cyprini細(xì)胞、HNEpC細(xì)胞、HS0578T細(xì)胞
細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
ANA-1 Cell:小鼠巨噬細(xì)胞系
細(xì)胞傳代時(shí)消化的問題:可以這樣說,對(duì)于需要消化傳代的細(xì)胞,每一次的消化都是對(duì)這個(gè)細(xì)胞存活與否,狀態(tài)好與不好最至關(guān)重要的考驗(yàn)。很多同學(xué)都遇到過這個(gè)問題,自己養(yǎng)的細(xì)胞開始的幾代長的還挺好的,可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞,狀態(tài)越來越差勁了。對(duì)于這個(gè)問題,可以非常肯定地說,你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細(xì)胞受到較大損傷了。所以,越長越差。在消化的過程中,你加入胰酶后,所有細(xì)胞都在被胰酶消化著,但是我們忽視了一個(gè)問題就是,細(xì)胞的生長狀態(tài)是不一樣的,每一個(gè)細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的,有的貼壁牢固,有的貼壁沒有那么牢固的,所以,讓所有的細(xì)胞消化同樣的時(shí)間對(duì)細(xì)胞是不公平的,他們受到了差別待遇當(dāng)然會(huì)有脾氣啊。我后來對(duì)消化的方法進(jìn)行了改良。爭取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。(以難消化細(xì)胞為例);具體操作:1)首先不加胰酶,倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍,(這是前奏,即為步,目的是將漂浮著的死細(xì)胞之類盡量洗掉。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍,這一遍是把貼壁不牢固的細(xì)胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍,兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步(你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng),以與后面胰酶消化過的細(xì)胞對(duì)比觀察看誰長的更好一點(diǎn)就知道該細(xì)胞對(duì)胰酶的敏感度了。)3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體,加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍,吸掉棄之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時(shí)置于顯微鏡下觀察,待細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯的時(shí)候立即吸掉胰酶與干凈子彈頭里備用,加入新培養(yǎng)基開始吹打,吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(你也可以傳入新瓶培養(yǎng),以與后面及前面的做對(duì)比。)這是第三步。4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進(jìn)去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細(xì)胞。當(dāng)然你也可以用新的胰酶,如果你們那比較富裕的話,呵呵。繼續(xù)鏡下觀察,待剩余細(xì)胞間隙明顯,細(xì)胞獨(dú)立開來的時(shí)候,吸掉胰酶,加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)(根據(jù)實(shí)際情況你自己把握)。這是第四步。其實(shí)還可以有第五步,對(duì)于特別難消化的細(xì)胞和對(duì)胰酶特別敏感的細(xì)胞的話,你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細(xì)胞更好的狀態(tài),更漂亮的樣子,沒辦法,你必須分多批多次消化,這樣才能限度地將胰酶對(duì)細(xì)胞的損傷降到最低,保證細(xì)胞的狀態(tài)能夠。當(dāng)然了,如果細(xì)胞是屬于那種很容易消化的細(xì)胞,像RAW264.7,僅僅第二步就搞定了。就沒必要第三步第四步了。這個(gè)是需要你在實(shí)驗(yàn)中能夠自己用心去體會(huì)的。建議你接受一個(gè)新細(xì)胞時(shí)把各步消化的細(xì)胞分別培養(yǎng)起來做比較,去摸索好細(xì)胞對(duì)胰酶的要求。便于你后續(xù)實(shí)驗(yàn)的開展。將細(xì)胞消化分成這幾步,除了是為了避免胰酶對(duì)細(xì)胞的損傷之外,還有一個(gè)更重要的作用就是,可以程度地把細(xì)胞吹打成單個(gè)單個(gè)的狀態(tài),不成片不連體。
細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支)
細(xì)胞傳代方法:1:2傳代
造成實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞污染常見情況總結(jié):細(xì)胞培養(yǎng)中最常見污染的是細(xì)菌、真菌和支原體污染。細(xì)胞一旦污染,大多數(shù)較難處理。那么,哪些情況我們不注意的話就會(huì)造成細(xì)胞污染呢?我們根據(jù)常見細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)分析總結(jié)下?!具`規(guī)操作】1)為節(jié)省時(shí)間,有人已經(jīng)用超凈臺(tái)四個(gè)多小時(shí),不開紫外滅菌30min,酒精擦拭后直接開始試驗(yàn);2)器材或者溶液很久沒用,未檢測是否污染而直接使用;離心管多次使用,槍頭為了方便交叉使用;3)超凈臺(tái)不點(diǎn)酒精燈;點(diǎn)了酒精燈放在右上角,而你在左下角做試驗(yàn);4)不帶手套,徒手操作;5)細(xì)胞培養(yǎng)間配備槍式移液器、手術(shù)器械、離心機(jī)、冰箱等專用儀器設(shè)備以及專用的實(shí)驗(yàn)服和拖鞋,未定期消毒。專用物品被帶出傳代細(xì)胞使用。培養(yǎng)細(xì)胞過程中使用的所有實(shí)驗(yàn)用具,如移液管、一次性槍頭、一次性塑料離心管、凍存管等未按要求滅菌使用(通常需121°C高壓滅菌20分鐘后37%烤干備用)。超凈臺(tái)和桌面,東西太多太亂:超凈臺(tái)不是儲(chǔ)物箱,什么培養(yǎng)皿、各種規(guī)格的板子、槍頭就不要堆在超凈臺(tái)!這樣就會(huì)有許多紫外線顧不到的衛(wèi)生死角。傳代細(xì)胞其他的桌面,切忌東西堆積如山,不要將酒精棉球、標(biāo)簽紙、牛皮紙買來后全部堆在傳代細(xì)胞!一不小心“飄”進(jìn)你的細(xì)胞培養(yǎng)板里,細(xì)胞就會(huì)養(yǎng)的不好,啥時(shí)候死了都不知道!【培養(yǎng)箱太久沒清潔】細(xì)胞污染了,并非直接扔了培養(yǎng)皿就不管了,首先你還得看看這個(gè)恒溫培養(yǎng)箱里其他培養(yǎng)皿或孔板里的細(xì)胞是否污染,如果有而且好幾個(gè)板子都有類似的污染塊,那很可能是培養(yǎng)箱中的水或者空氣污染了,得給培養(yǎng)箱做個(gè)大掃除,重新酒精消毒,照紫外;孵箱里的水,水沒了要記得加,還得記得十天半個(gè)月的就用酒精擦擦托盤?!緜鞔?xì)胞人多口雜,難管理】在傳代細(xì)胞這種衛(wèi)生要求高,人多了,不確定因素多了,難以保證試驗(yàn)在無菌條件下操作。出入試驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)服當(dāng)風(fēng)衣穿,不扣紐扣,不戴,就容易造成細(xì)胞污染;超凈臺(tái)做實(shí)驗(yàn)時(shí),喜歡說話聊著做試驗(yàn),要是還不帶口罩,里面就有很多細(xì)菌等著去攻擊你的細(xì)胞呢!
細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系
Hs68細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS 114細(xì)胞、OCI-LY-1細(xì)胞、M21細(xì)胞
MRAEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LNCaP C4-2B細(xì)胞、LS-123細(xì)胞、RAMSCs細(xì)胞
P 3 HR 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-MEL-31細(xì)胞、Monomac-1細(xì)胞、NCI-HUT-460細(xì)胞
MPP 89細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KY180細(xì)胞、Sp 2/0-Ag 14細(xì)胞、INS1細(xì)胞
SNUC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC3細(xì)胞、PY8119細(xì)胞、AML-EOL-1細(xì)胞
細(xì)胞生長特性:懸浮生長
ANA-1 Cell:小鼠巨噬細(xì)胞系
貼壁細(xì)胞的消化方法介紹:1、胰酶。這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類、作用溫度等因素而變化很大,從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細(xì)胞,在37度條件下,一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細(xì)胞間。配制時(shí)不能用含、鎂的平衡液,否則影響活性。保存于-20度。2、膠原酶。這種方法比較少,一般是用原代培養(yǎng)時(shí),從組織消化下細(xì)胞。這種方法作用溫和,對(duì)細(xì)胞損傷較小,但是,價(jià)格也較貴。中止同樣是用血清。3、EDTA。用得也是非常多。一般濃度在0.02%左右。作用于細(xì)胞與間質(zhì),對(duì)細(xì)胞間也有一定作用。注意,它能顯著影響pH值,而且在弱堿性條件下才易溶。因此,配制時(shí)應(yīng)調(diào)節(jié)好酸堿度。它不能被終和。因此,消化下來的細(xì)胞要洗一遍。4、商品化的無酶消化液。個(gè)人的使用經(jīng)常覺得對(duì)細(xì)胞的損傷比較大,但是分離成單細(xì)胞懸液的能力確實(shí)比較強(qiáng)。5、物理法。直接吹打或用細(xì)胞刮子將細(xì)胞刮下來。6、冷凍法。此方法僅能用于細(xì)胞傳代時(shí)。無法使組織上的細(xì)胞脫落下來。本方法的原理,我想是因細(xì)胞冷凍后收縮,從而從培養(yǎng)瓶上脫落下來。優(yōu)點(diǎn)是:對(duì)細(xì)胞損傷小,不需要中止或洗細(xì)胞,方便,不需要另外配制消化液。特別適用那些貼壁不是特別緊,又特別嬌氣的細(xì)胞。不足是細(xì)胞常成小片脫落。此種方法曾用于因用其它方法傳代導(dǎo)致大量細(xì)胞死亡操作的間充質(zhì)干細(xì)胞、DC細(xì)胞的培養(yǎng),效果非常滿意。具體過程是:1、用較多的4度的PBS 洗滌一遍細(xì)胞(以6孔板為例,加1.5ml/孔),2、再加0.5毫升4度的PBS,靜置操作臺(tái)上,很快細(xì)胞就小片脫落,3、輕輕吹打,細(xì)胞即完全脫落,4、按一定比例傳代。
細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書
ECGI10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CG4細(xì)胞、BDCM細(xì)胞、C3H/10T1/2 clone 8細(xì)胞
TE3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT 1376細(xì)胞、NCI-H1650細(xì)胞、GL-261細(xì)胞
Pt K1 (NBL-3)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Jurkat 77細(xì)胞、Hs-281-T細(xì)胞、Huh-7.5.1細(xì)胞
NTERA-2 clone D1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H226細(xì)胞、H-226細(xì)胞、C81-61細(xì)胞
Walker256細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1993細(xì)胞、kms 11細(xì)胞、624mel細(xì)胞
Pro-5 Lec1.3c細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuH28細(xì)胞、VM Cub 1細(xì)胞、HS-294T細(xì)胞
MX-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFE-145細(xì)胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-8細(xì)胞、N-2a細(xì)胞
ANA-1 Cell:小鼠巨噬細(xì)胞系
RBE4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B95-8細(xì)胞、MCF-12F細(xì)胞、NCIH522細(xì)胞
GES1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK293FT細(xì)胞、Hs832.Tc細(xì)胞、MG-HU-3細(xì)胞
NCIH647細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kit 225-K6細(xì)胞、Tca-83細(xì)胞、CX1細(xì)胞
COR-L 105細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHP212細(xì)胞、MDCKII細(xì)胞、HCCLM3細(xì)胞
CCD 966SK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MS 751細(xì)胞、DHL8細(xì)胞、TGBC11TKB細(xì)胞
MC-116細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SBC3細(xì)胞、NPA87-1細(xì)胞、H-510細(xì)胞
Los Angeles Prostate Cancer-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF295細(xì)胞、HKBML細(xì)胞、HRVEC細(xì)胞
NCC-IT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2198細(xì)胞、MGHU1細(xì)胞、SUP-T1細(xì)胞
JM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H929細(xì)胞、Pro-5WgaRI3C細(xì)胞、GM03190A細(xì)胞
JM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H929細(xì)胞、Pro-5WgaRI3C細(xì)胞、GM03190A細(xì)胞
CTSC-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFF細(xì)胞、Nb2-11細(xì)胞、SU-DHL-5細(xì)胞
SKNBE-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKOV-433細(xì)胞、BC3H-1細(xì)胞、JS1細(xì)胞
FTC133細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC1395細(xì)胞、HSAS1細(xì)胞、HCA 7細(xì)胞
NHA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MPP-89細(xì)胞、CNE細(xì)胞、NIE 115細(xì)胞
WM2664細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-172 MG細(xì)胞、P3J HR1-K細(xì)胞、KYSE 50細(xì)胞
VMRCRCZ細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BE(2)-C細(xì)胞、SL1細(xì)胞、NU-GC-3細(xì)胞
SUIT-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:K1735細(xì)胞、GalK 1細(xì)胞、HLCL9B10細(xì)胞
PC-3M 2B4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE510細(xì)胞、Reuber-H-35 hepatoma細(xì)胞、Transformed Human Liver Epithelial-2細(xì)胞
NCI-441細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SGC-996細(xì)胞、HCC-1569細(xì)胞、A 253細(xì)胞
NS-I/1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T3J2細(xì)胞、WRL-68細(xì)胞、SNUC2B細(xì)胞
COR-L23細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CF Pac1細(xì)胞、J774A1細(xì)胞、NFS 60細(xì)胞
SPCA1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hep-G2細(xì)胞、DHL-5細(xì)胞、CCD 966 SK細(xì)胞
HeLa/S3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Lilly Laboratories Cell-Porcine Kidney 1細(xì)胞、NCTC1469細(xì)胞、GP-293細(xì)胞
Normal Rat Kidney細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:526 mel細(xì)胞、HVSMC細(xì)胞、Hepa-RG細(xì)胞
CT26細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-EMC-SS細(xì)胞、GM03569B細(xì)胞、H-526細(xì)胞
MDAMB453細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB-436細(xì)胞、H-1651細(xì)胞、SK-ML2細(xì)胞
CAL 33細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HO1-N1細(xì)胞、HOP 92細(xì)胞、KM932細(xì)胞
HSC2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HUT125細(xì)胞、HEC251細(xì)胞、NKM-1細(xì)胞
MDAMB175細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FCCH1018細(xì)胞、Reuber H-35細(xì)胞、H292細(xì)胞
3T3F442A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Microbiological Associates-104細(xì)胞、JB-6 Cl 30細(xì)胞、NWA細(xì)胞
H3396細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1693細(xì)胞、KYSE 410細(xì)胞、WSU-DLCL(2)細(xì)胞
NE1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS 180細(xì)胞、OV-2008細(xì)胞、MEC-1細(xì)胞
L929細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1792細(xì)胞、HuCC-T1細(xì)胞、293 EBNA細(xì)胞
IMCD3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P560細(xì)胞、MKN-1細(xì)胞、NCI-H2052細(xì)胞
MLOY4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC615.3細(xì)胞、GM346細(xì)胞、GM00346細(xì)胞
RPE-hTERT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:alpha TC1.6細(xì)胞、NTERA2細(xì)胞、D-283MED細(xì)胞
NCI-H322細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEM-T4細(xì)胞、MCA205細(xì)胞、BT 20細(xì)胞
IEC-18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:McA-RH7777細(xì)胞、CTV1細(xì)胞、Kit 225細(xì)胞
HANK-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPAF-II/CD18細(xì)胞、Hs274T細(xì)胞、NCI-H1618細(xì)胞
OCI-AML4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-94細(xì)胞、F36P細(xì)胞、Colo320細(xì)胞
MEG01細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR4細(xì)胞、Hs706T細(xì)胞、Murine Long bone Osteocyte-Y4細(xì)胞
BT-549細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H719細(xì)胞、Karpas-422細(xì)胞、Dami細(xì)胞
EVSA/T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI/AML-5細(xì)胞、NCI-H196細(xì)胞、A9細(xì)胞
ANA-1 Cell:小鼠巨噬細(xì)胞系
HLE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PLC細(xì)胞、D10G41細(xì)胞、NB4細(xì)胞
MUM2B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EL4細(xì)胞、H-187細(xì)胞、KP-N-RT-BM-1細(xì)胞
WEHI-164細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC 3細(xì)胞、3T3(A31)細(xì)胞、PC-3M-1E8細(xì)胞
NCIH847細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUPM2細(xì)胞、Pa16C細(xì)胞、H23細(xì)胞
Virginia Mason Research Center-Lung Cancer D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H211細(xì)胞、CLL-CII細(xì)胞、bEnd.3[BEND3]細(xì)胞
GM04154B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CG-4細(xì)胞、HCV-29細(xì)胞、SNU-354細(xì)胞
L 132細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Roswell Park Memorial Institute 8226細(xì)胞、MES-13細(xì)胞、H1694細(xì)胞
UT-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCCC-9810細(xì)胞、Panc_04_03細(xì)胞、FL62891細(xì)胞
SL1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Cates-1B細(xì)胞、NCI-H2347細(xì)胞、TFK1細(xì)胞
SK-MEL-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H28細(xì)胞、Mel624細(xì)胞、NCI-SNU-C1細(xì)胞
HUC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FK81細(xì)胞、HuT78細(xì)胞、OSK-1細(xì)胞
LLC-WRC 256細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuNS1細(xì)胞、T98G細(xì)胞、Hs578Bst細(xì)胞
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關(guān)鍵字: ANA-1 Cell:小鼠巨噬細(xì)胞系
上海賓穗生物科技有限公司 是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售與服務(wù)于一體的專業(yè)生物制品和化學(xué)品供應(yīng)商。公司總部位于上海市莘莊工業(yè)區(qū),擁有現(xiàn)代化辦公大樓、標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室與生產(chǎn)廠房。上海賓穗生物科技有限公司擁有一支由教授和博士為核心的技術(shù)團(tuán)隊(duì),提供超過100000的生物、化學(xué)產(chǎn)品,產(chǎn)品涵蓋化學(xué)、醫(yī)藥、材料、能源、生物等科研領(lǐng)域。公司秉承“客戶至上、服務(wù)一流”的發(fā)展理念,致力于將優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù)提供給客戶。上海賓穗生物科技有限公司整合眾多的優(yōu)勢市場資源,以匠心服務(wù)廣大客戶,我們可以為客戶提供Binsui、TCI等國內(nèi)外各種品牌的高品質(zhì)試劑產(chǎn)品,充分滿足客戶的試劑需求。