"RA-FLSs Cell:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞系
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
細(xì)胞生長(zhǎng)：貼壁
細(xì)胞背景資料：關(guān)節(jié)；成纖維細(xì)胞
C3H/10T1/2 CL8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MT4細(xì)胞、NUGC3細(xì)胞、MCF.10A細(xì)胞
MDA-MB 231細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCT 116細(xì)胞、UM-UC-1細(xì)胞、HCC1806細(xì)胞
NT-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CATH.a細(xì)胞、CT 26細(xì)胞、3T3-L1細(xì)胞
Mono-Mac-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ssMCF7細(xì)胞、ATC241細(xì)胞、Normal Rat Kidney細(xì)胞
細(xì)胞物種來(lái)源：人源或鼠源等其它物種來(lái)源
RA-FLSs Cell:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞系
細(xì)胞傳代時(shí)消化的問(wèn)題：可以這樣說(shuō)，對(duì)于需要消化傳代的細(xì)胞，每一次的消化都是對(duì)這個(gè)細(xì)胞存活與否，狀態(tài)好與不好最至關(guān)重要的考驗(yàn)。很多同學(xué)都遇到過(guò)這個(gè)問(wèn)題，自己養(yǎng)的細(xì)胞開始的幾代長(zhǎng)的還挺好的，可是穿過(guò)幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞，狀態(tài)越來(lái)越差勁了。對(duì)于這個(gè)問(wèn)題，可以非常肯定地說(shuō)，你的消化環(huán)節(jié)出問(wèn)題了。你每一次的消化都讓細(xì)胞受到較大損傷了。所以，越長(zhǎng)越差。在消化的過(guò)程中，你加入胰酶后，所有細(xì)胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個(gè)問(wèn)題就是，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)是不一樣的，每一個(gè)細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒(méi)有那么牢固的，所以，讓所有的細(xì)胞消化同樣的時(shí)間對(duì)細(xì)胞是不公平的，他們受到了差別待遇當(dāng)然會(huì)有脾氣啊。我后來(lái)對(duì)消化的方法進(jìn)行了改良。爭(zhēng)取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。（以難消化細(xì)胞為例）；具體操作：１)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗１-２遍，（這是前奏，即為步，目的是將漂浮著的死細(xì)胞之類盡量洗掉。２)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細(xì)胞吹打下來(lái)。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過(guò)的細(xì)胞對(duì)比觀察看誰(shuí)長(zhǎng)的更好一點(diǎn)就知道該細(xì)胞對(duì)胰酶的敏感度了。）３)吸干凈瓶?jī)?nèi)剩余液體，加入０.３ml左右的胰酶潤(rùn)洗一遍，吸掉棄之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同時(shí)置于顯微鏡下觀察，待細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯的時(shí)候立即吸掉胰酶與干凈子彈頭里備用，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打２-３遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用２ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。（你也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對(duì)比。）這是第三步。４)然后把前面剛吸出來(lái)的胰酶重新加進(jìn)去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細(xì)胞。當(dāng)然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，呵呵。繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細(xì)胞間隙明顯，細(xì)胞獨(dú)立開來(lái)的時(shí)候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實(shí)際情況你自己把握）。這是第四步。其實(shí)還可以有第五步，對(duì)于特別難消化的細(xì)胞和對(duì)胰酶特別敏感的細(xì)胞的話，你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細(xì)胞更好的狀態(tài)，更漂亮的樣子，沒(méi)辦法，你必須分多批多次消化，這樣才能限度地將胰酶對(duì)細(xì)胞的損傷降到最低，保證細(xì)胞的狀態(tài)能夠。當(dāng)然了，如果細(xì)胞是屬于那種很容易消化的細(xì)胞，像RAW２６４.７，僅僅第二步就搞定了。就沒(méi)必要第三步第四步了。這個(gè)是需要你在實(shí)驗(yàn)中能夠自己用心去體會(huì)的。建議你接受一個(gè)新細(xì)胞時(shí)把各步消化的細(xì)胞分別培養(yǎng)起來(lái)做比較，去摸索好細(xì)胞對(duì)胰酶的要求。便于你后續(xù)實(shí)驗(yàn)的開展。將細(xì)胞消化分成這幾步，除了是為了避免胰酶對(duì)細(xì)胞的損傷之外，還有一個(gè)更重要的作用就是，可以程度地把細(xì)胞吹打成單個(gè)單個(gè)的狀態(tài)，不成片不連體。
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細(xì)胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)：１)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加２-３ml ０.２５%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃冢?２min)；２)鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰酶，加６-８ml完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散；３)取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；４)注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液(每周２-３次)，待細(xì)胞密度達(dá)到８０%以后重復(fù)１項(xiàng)操作或者凍存；特別注意：(如使用公共實(shí)驗(yàn)室或者初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng))１)收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含１５%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加１０%的血清，(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長(zhǎng)不宜超過(guò)７２小時(shí))；２)貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化，請(qǐng)將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請(qǐng)優(yōu)先選擇直徑６cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng)；３)如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室。
細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明：細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系
H4-II-E細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hmy.2 CIR細(xì)胞、PANC 203細(xì)胞、624細(xì)胞
H2052_MM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU-368細(xì)胞、GBCSD細(xì)胞、WM 451-Lu細(xì)胞
NCI-H1668細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NPA細(xì)胞、Michigan Cancer Foundation-7細(xì)胞、HOS TE85細(xì)胞
COV 434細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEK/EBNA細(xì)胞、SKNBE2C細(xì)胞、HT1197細(xì)胞
HSF2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ssMCF-7細(xì)胞、Homo sapiens No. 578, breast cells細(xì)胞、NCI-H2196細(xì)胞
細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁
RA-FLSs Cell:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞系
貼壁細(xì)胞消化傳代時(shí)通常采用兩種方法：一、加入胰酶等細(xì)胞脫落后，再加培養(yǎng)基中止胰酶作用，離心傳代；二、加入胰酶后，鏡下觀察待細(xì)胞始脫落時(shí)，棄胰酶，加培養(yǎng)液分瓶。但前者太麻煩，而后者有可能對(duì)細(xì)胞施加胰酶選擇，因?yàn)榭偸琴N壁不牢的細(xì)胞先脫落，對(duì)腫瘤細(xì)胞來(lái)說(shuō)，這部分細(xì)胞有可能是惡性程度較高的細(xì)胞亞群。一種簡(jiǎn)單的消化傳代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(３０s)，棄之，再加入適量胰酶作用１０s-４０s(根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度)，棄之，這樣依賴殘余的胰酶就可將細(xì)胞消化單細(xì)胞。對(duì)于較難消化的細(xì)胞，可以用２%利多卡因消化５-８分鐘，然后再棄去，加培養(yǎng)基吹打也可以，對(duì)細(xì)胞的影響不大。不用PBS也不用Hanks洗，只要把舊培養(yǎng)液吸的干凈一點(diǎn)，直接加酶消化應(yīng)該不會(huì)有什么問(wèn)題。棄培養(yǎng)液后，用０.０４%的EDTA沖洗一次，再用１/４v的０.０４%的EDTA室溫孵育５min，棄取大部分EDTA，加入與剩余EDTA等量的胰酶(預(yù)熱)總體積１/１０v。消化到有細(xì)胞脫落。不過(guò)有人說(shuō)EDTA對(duì)細(xì)胞不好，有證據(jù)嗎？培養(yǎng)的BASMC：倒掉舊培養(yǎng)液加入少量胰酶沖一下，倒掉再加入０.１２５-０.２５%胰酶約６-１０滴或１ml(２５ml bottle)消化再加入適量新培養(yǎng)基中和，并分瓶這種方法簡(jiǎn)單、省事；效果很好并且不損失細(xì)胞！
細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書
HCC2157細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：IMR-32細(xì)胞、Panc10.05細(xì)胞、OV433細(xì)胞
NUGC4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCEpiC細(xì)胞、IGROV-1細(xì)胞、TGW-nu-1細(xì)胞
ROS 17/28細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：A-427細(xì)胞、BpRcl細(xì)胞、Ly19細(xì)胞
CPA 47細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC1954-BL細(xì)胞、CEM T4細(xì)胞、FHL-124細(xì)胞
SUM 149細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Detroit-562細(xì)胞、CHL1細(xì)胞、HT(H9)細(xì)胞
NCI-H1876細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-647細(xì)胞、RBL細(xì)胞、RKO細(xì)胞
HCC1599細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ARO 81-1細(xì)胞、ChaGo-K-1細(xì)胞、HCC95細(xì)胞
RA-FLSs Cell:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞系
NCIH345細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COLO 738細(xì)胞、MT4細(xì)胞、Jurkat clone A3細(xì)胞
A.704細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEK293-EBNA細(xì)胞、16HBE140細(xì)胞、HSC-2細(xì)胞
KOSC-2 cl3-43細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Calu6細(xì)胞、MDCC-MSB1細(xì)胞、MD Anderson-Metastatic Breast-175-VIII細(xì)胞
NTERA2-D1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TGBC11TKB細(xì)胞、H378細(xì)胞、BT-549細(xì)胞
Rat Glomerular Endothelial細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH747細(xì)胞、JeKo-1細(xì)胞、NCI747細(xì)胞
HME-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ACT-1細(xì)胞、GM02219C細(xì)胞、MIHA細(xì)胞
Detroit562細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NALM-6細(xì)胞、OE-33細(xì)胞、UCD-MLA-144細(xì)胞
95-D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Line 870 Emory University-4細(xì)胞、SHP77細(xì)胞、SCI1細(xì)胞
Hs-343-T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：FL83B細(xì)胞、RCK-8細(xì)胞、HCT FET細(xì)胞
Hs-343-T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：FL83B細(xì)胞、RCK-8細(xì)胞、HCT FET細(xì)胞
VMM5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NuTu 19細(xì)胞、HCC9724細(xì)胞、EM3細(xì)胞
HCe-8693細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MOLM-16細(xì)胞、UACC893細(xì)胞、OCIAML5細(xì)胞
HCC-1500細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKMES1細(xì)胞、Nb-2細(xì)胞、SW-1783細(xì)胞
NCIH295R細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TI-73細(xì)胞、NCIH1755細(xì)胞、NCI-H2591細(xì)胞
H-157細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：U266 B1細(xì)胞、NCI-H1876細(xì)胞、Panc10.05細(xì)胞
HeLa.S3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ND7/23細(xì)胞、Ocular Choroidal Melanoma-1細(xì)胞、BT474細(xì)胞
LAN6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TE-8細(xì)胞、AD-293細(xì)胞、U373細(xì)胞
WERI細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：OV3121細(xì)胞、AHH1細(xì)胞、HAC-84細(xì)胞
HES [Human embryonic skin fibroblast]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：QSG7701細(xì)胞、HOP62細(xì)胞、THPI細(xì)胞
H-1184細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MES23.5細(xì)胞、Hamster Islet Transformed-Tioguanine resistant clone 15細(xì)胞、MH-22a細(xì)胞
SNU-407細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC-44細(xì)胞、SK UT 1細(xì)胞、TE-1細(xì)胞
6-10B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-ChA-1細(xì)胞、OVCA8細(xì)胞、SU-86-86細(xì)胞
EOL1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-2126細(xì)胞、NCI-SNU-475細(xì)胞、CMT.64細(xì)胞
MJ細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RN細(xì)胞、NCI-SNU-119細(xì)胞、Jurkat-FHCRC細(xì)胞
Human Epithelioma-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC-1171細(xì)胞、SNK6細(xì)胞、TEV-1細(xì)胞
MHCC97H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Melanoma 14細(xì)胞、M-O7e細(xì)胞、H2030細(xì)胞
IAR20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SW 1222細(xì)胞、WIL2-S細(xì)胞、NCIH1573細(xì)胞
SMA560細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Kit 225 K6細(xì)胞、CEM/0細(xì)胞、PECAPJ34細(xì)胞
hEEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Pa017C細(xì)胞、A-2780細(xì)胞、MM.1S細(xì)胞
NHLF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：149PT細(xì)胞、A-1847細(xì)胞、Anglne細(xì)胞
HEK293-EBNA1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：16HBE細(xì)胞、M21細(xì)胞、IPECJ2細(xì)胞
HCT 15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：COV 434細(xì)胞、NCIH2170細(xì)胞、MSTO211H細(xì)胞
PL-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CCRF-CEM細(xì)胞、UACC-893細(xì)胞、NTera2 cl.D1細(xì)胞
SW1088細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3X63NS1細(xì)胞、SUDHL-2細(xì)胞、SW-1573細(xì)胞
H378細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：McA-RH 8994細(xì)胞、H-929細(xì)胞、293H細(xì)胞
Baby Hamster Kidney-21細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：UMC-11細(xì)胞、SW527細(xì)胞、HCC4006細(xì)胞
AtT 20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HN13細(xì)胞、A549/ATCC細(xì)胞、MCF7/WT細(xì)胞
H295R細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Mia PACA 2細(xì)胞、MM134細(xì)胞、H660細(xì)胞
Alpha Mouse Liver 12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KTC-1細(xì)胞、COV-362細(xì)胞、EAhy 926細(xì)胞
FTC-133細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU-C1細(xì)胞、SNU-251細(xì)胞、NSC34細(xì)胞
FTC-133細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU-C1細(xì)胞、SNU-251細(xì)胞、NSC34細(xì)胞
MC3T3E1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Panc10.05細(xì)胞、RH7777細(xì)胞、UT7細(xì)胞
MUVEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SCC-25細(xì)胞、MOLT-3細(xì)胞、SNB19細(xì)胞
RA-FLSs Cell:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞系
CORL88細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-1819細(xì)胞、Vx2細(xì)胞、MESSA/Dx5細(xì)胞
CCF-STTG1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MT-2J細(xì)胞、ME 180細(xì)胞、NCI-H1184細(xì)胞
T-98細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKml2細(xì)胞、MKN-28細(xì)胞、MDCK Type II細(xì)胞
HSAS1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：hEM15A細(xì)胞、NSH細(xì)胞、rHSC-99細(xì)胞
H-2135細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ROS17/28細(xì)胞、SKRC20細(xì)胞、Epstein-Barr-1細(xì)胞
NCIH2106細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM03190細(xì)胞、RCF細(xì)胞、MN 60細(xì)胞
Tu 177細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KP-4細(xì)胞、NCI-SNU-1細(xì)胞、H-82細(xì)胞
NCI-H-128細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RPMI 8226/S細(xì)胞、NRK-49F細(xì)胞、C-127細(xì)胞
Roswell Park Memorial Institute 1788細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EM3細(xì)胞、SGC7901/DDP細(xì)胞、C3H10T1/2細(xì)胞
BHK-21細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：QGP 1細(xì)胞、U266-B1細(xì)胞、SUM-190細(xì)胞
HCV-29細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：E.L.4細(xì)胞、NCI-H-295細(xì)胞、Hmy.2 CIR細(xì)胞
H1915細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MNNG/HOS細(xì)胞、H748細(xì)胞、T_T_細(xì)胞
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