"H4 epithelioid cells人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:H4細(xì)胞系建系于1973年。它衍生于一個(gè)患神經(jīng)膠質(zhì)瘤的37歲病人的腦組織。該細(xì)胞的致瘤特性己經(jīng)被屏蔽,細(xì)胞接種動(dòng)物一般不產(chǎn)生腫瘤結(jié)節(jié)。該細(xì)胞具有修復(fù)MNNG損傷5型腺病毒的能力。 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 貼壁消化難題:1,先用PBS 把細(xì)胞洗兩遍,使瓶?jī)?nèi)沒有血清了,減少對(duì)胰酶的中和,然后用新配的0.25%的胰酶加入3ml左右,放在37度,然后可以在細(xì)胞有些消化下來時(shí),拿著瓶口,運(yùn)用手腕的力量輕輕震蕩瓶?jī)?nèi)液體,這樣細(xì)胞很快就下來了,還不需要吹打,分散也均勻;2,成團(tuán)、絮狀:消化液里加入edta可以減少細(xì)胞成團(tuán)的現(xiàn)象,血清可以終止胰酶的作用,如果是進(jìn)口血清的話也能終止edta的作用。用胰酶消化后胰酶可以倒掉,也可以不倒,直接加血清終止,如果消化液中加入了edta的話,就要將消化液倒干凈,如果細(xì)胞貼壁要求不是很嚴(yán)格的話,一般不需要進(jìn)行離心。鼻咽癌細(xì)胞的貼壁能力很強(qiáng),用0.5%胰酶(含0.1%EDTA)一般要消化12~15min。用PBS洗滌時(shí)要洗凈殘余的培養(yǎng)基,加入胰酶后在培養(yǎng)箱中消化(避免細(xì)胞室溫下受損以及在此溫度時(shí)胰酶活性最強(qiáng))至細(xì)胞收縮變圓(可顯微鏡下觀察)且有少許細(xì)胞脫落(有流下來的趨勢(shì)),隨后立即棄去胰酶(如果脫落的細(xì)胞很多且需要大量細(xì)胞實(shí)驗(yàn),則不能棄去胰酶),加入培養(yǎng)基仔細(xì)吹打(不能用無血清培養(yǎng)基或者PBS替代,否則細(xì)胞聚集成團(tuán)塊或絮狀)。一般我都離心一次棄去上清(去除殘留的胰酶及漂浮的死細(xì)胞或細(xì)胞碎片);消化過度:馬上用培養(yǎng)基中和,用吸管吹打細(xì)胞,收集全部的細(xì)胞到以無菌的離心管中800RPM 3分鐘。棄上清,用全培重懸,換新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng),狀態(tài)不好的細(xì)胞在培養(yǎng)的過程中會(huì)死亡脫落,在換液的時(shí)候可以清除掉! MD Anderson-Metastatic Breast-436細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GLRK 13細(xì)胞、EJ1細(xì)胞、HTR-8/SVneo細(xì)胞 NCIH1666細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDCK (NBL-2)細(xì)胞、SUDHL10細(xì)胞、Murine Lung Epithelial-12細(xì)胞 201T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Fetal Bovine Heart Endothelial細(xì)胞、KALS-1細(xì)胞、MDBK (NBL-1)細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 H4 epithelioid cells人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗(yàn)分享:支原體是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細(xì)胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細(xì)胞培養(yǎng)中生長(zhǎng),營(yíng)養(yǎng)要求比細(xì)菌高。細(xì)胞培養(yǎng)(特別是傳代細(xì)胞)被支原體污染是個(gè)世界性問題。在細(xì)胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細(xì)胞的DNA,RNA及蛋白表達(dá),又不能通過可視法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè),而且它對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)率影響較小,不易引起注意。國(guó)內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見的污染細(xì)胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細(xì)胞的支原體種類是很多的,國(guó)外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細(xì)胞,有的細(xì)胞株可以同時(shí)污染兩種以上的支原體。支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來的污染和用來制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。組織細(xì)胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個(gè)方面來預(yù)防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作;細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細(xì)胞后,特別是重要的細(xì)胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補(bǔ)體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細(xì)胞壁,一般來講,對(duì)作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素,如萬古霉素等完全不敏感;對(duì)多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對(duì)支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對(duì)支原體有較小抑制作用,所以常不用來作為支原體感染的化學(xué)治療劑。 細(xì)胞傳代方法:1:3傳代,每周換液2-3次。 HEK (AD293)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WI 38細(xì)胞、HT 1197細(xì)胞、BAEC細(xì)胞 NCI-H1944細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RBL2H3細(xì)胞、RA細(xì)胞、NCI-H596細(xì)胞 NPA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Rabbit Kidney 13細(xì)胞、JB-6細(xì)胞、GM16136細(xì)胞 YES-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H889細(xì)胞、OCI-LY-18細(xì)胞、BNL 1MEA.7R.1細(xì)胞 P3J HR1-K細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-101D細(xì)胞、HCC1008細(xì)胞、NCIH1563細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 H4 epithelioid cells人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮樣 細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng):1)如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞,而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心,加15%血清的完全培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡,請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決;2)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢;適當(dāng)提高血清濃度(最高不能超過20%),或可根據(jù)該細(xì)胞生長(zhǎng)密度,考慮胰酶消化后,轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng);3)生長(zhǎng)不均:貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長(zhǎng),可將細(xì)胞進(jìn)行消化,重懸打散細(xì)胞,加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 NCIH2141細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Large Cell Lung Cancer-103H細(xì)胞、BJAB-1細(xì)胞、MESSA-DX5細(xì)胞 HcerEpic細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-596細(xì)胞、Hepa1-6細(xì)胞、hUC-MSC細(xì)胞 JB6 clone 30, subclone 7b細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JB6 Cl 30細(xì)胞、RS4;11細(xì)胞、RC92A細(xì)胞 RWPE-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C 643細(xì)胞、SF-539細(xì)胞、NT2D1細(xì)胞 KMS11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B 95-8細(xì)胞、HCA-7細(xì)胞、RBMEC細(xì)胞 IHH細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS5細(xì)胞、Jurkat-E6細(xì)胞、LPC-H12細(xì)胞 NCI-H2196細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MA-104細(xì)胞、6-10B細(xì)胞、H-1915細(xì)胞 Hca-F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ARO81細(xì)胞、RASMCs細(xì)胞、SK Mel 2細(xì)胞 624細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCMEC細(xì)胞、D10.G4.1細(xì)胞、CMT 64細(xì)胞 MX-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFE-145細(xì)胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-8細(xì)胞、N-2a細(xì)胞 H4 epithelioid cells人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 HRCEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Calu3細(xì)胞、McArdle RH-7777細(xì)胞、OCI-Ly 10細(xì)胞 OVCAR-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:R 1610細(xì)胞、Lieming Xu-2細(xì)胞、VSC4.1細(xì)胞 HBMEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LNCaP clone FGC細(xì)胞、U-266 AR1細(xì)胞、LS-174T細(xì)胞 H1184細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OV-CA 432細(xì)胞、KCL22S細(xì)胞、YAC細(xì)胞 Hut292細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H650細(xì)胞、GM3569細(xì)胞、H-841細(xì)胞 HT-115細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:32D.3細(xì)胞、HSMC細(xì)胞、A-172 MG細(xì)胞 HT-115細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:32D.3細(xì)胞、HSMC細(xì)胞、A-172 MG細(xì)胞 HB 611細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI #1846細(xì)胞、CAL12T細(xì)胞、H2405細(xì)胞 OVCAR-432細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-N-BE細(xì)胞、SKMEL24細(xì)胞、Human Embryonic Kidney 293細(xì)胞 GM00637細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE0410細(xì)胞、H847細(xì)胞、CTSC-3細(xì)胞 NCIH64細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Colo-201細(xì)胞、HL-1細(xì)胞、HOP62細(xì)胞 TR 146細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW1222細(xì)胞、SNB19細(xì)胞、KM H-2細(xì)胞 COLO206細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NALM-6-M1細(xì)胞、H-II-E-C3細(xì)胞、SU-DHL-16細(xì)胞 CAL 12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PTK2細(xì)胞、HO8910/PM細(xì)胞、IPLB-SF 21細(xì)胞 JROECL19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LC1/Sq細(xì)胞、U118細(xì)胞、BT483細(xì)胞 GM02219細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KMY1022細(xì)胞、KP-2細(xì)胞、MDA 231-LM2-4175細(xì)胞 HEK 293T/17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKML-28細(xì)胞、FHs 74 Int細(xì)胞、BHT-101細(xì)胞 H-1963細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CTX TNA2細(xì)胞、OCI-AML-4細(xì)胞、SK-MEL24細(xì)胞 HS-294細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KPL-4細(xì)胞、RIN-m5F細(xì)胞、Huh 7.5細(xì)胞 NCIH1623細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MRC5細(xì)胞、PLA801-95D細(xì)胞、HRA19細(xì)胞 COLO206F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TC7細(xì)胞、INS1細(xì)胞、MonoMac6細(xì)胞 COLO829細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS-695T細(xì)胞、L-02細(xì)胞、H341細(xì)胞 NCI-H2452細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKMEL28細(xì)胞、L1210細(xì)胞、SCC-4細(xì)胞 Jiyoye細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ABC-1細(xì)胞、LNCaP C4-2細(xì)胞、3AO細(xì)胞 FL-83B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW954細(xì)胞、Hi-5細(xì)胞、MDA175細(xì)胞 NMC-G1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MB157細(xì)胞、HLCL9B10細(xì)胞、PanC1細(xì)胞 Panc 02.03細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HES [Human embryonic skin fibroblast]細(xì)胞、VK2/E6E7細(xì)胞、CCD-841CoN細(xì)胞 Hs 688(A).T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC25細(xì)胞、E.G7-OVA細(xì)胞、SK LU 1細(xì)胞 SPDC-CCL141細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCC-HEH-2細(xì)胞、CHP-126細(xì)胞、LTEP a2細(xì)胞 CoC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:D324細(xì)胞、L540細(xì)胞、74Int細(xì)胞 RH7777細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KALS-1細(xì)胞、HCC-827細(xì)胞、NCI-128細(xì)胞 Hs940.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:293 HEK細(xì)胞、UMNSAH-DF 1細(xì)胞、IGROV細(xì)胞 SW 1088細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTera2/D1細(xì)胞、Hs888T細(xì)胞、ECV 304細(xì)胞 NK 10a細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1734細(xì)胞、alpha TC1.6細(xì)胞、MPP-89細(xì)胞 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