"Sp2/0-Ag14 epithelioid cells小鼠骨髓瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:該細(xì)胞是由綿羊紅細(xì)胞免疫的BALB/c小鼠脾細(xì)胞和P3X63Ag8骨髓瘤細(xì)胞融合得到的。該細(xì)胞不分泌免疫球蛋白,對(duì)20μg/ml的8-氮鳥(niǎo)嘌呤有抗性,對(duì)HAT比較敏感;該細(xì)胞可以作為細(xì)胞融合時(shí)的B細(xì)胞組分用于制備雜交瘤;鼠痘病毒陰性。 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞株(系)的使用,為醫(yī)學(xué)研究和測(cè)試工作帶來(lái)了極大的方便。但細(xì)胞的傳代是有限制的,長(zhǎng)期連續(xù)傳代的細(xì)胞,不僅消耗大量的人力和物力,而且細(xì)胞的生長(zhǎng)與形態(tài)等會(huì)有一定退變或轉(zhuǎn)化,因而細(xì)胞失去原有的遺傳特性,有時(shí)還會(huì)由于細(xì)胞污染而造成傳代中斷,種子丟失。因此,在實(shí)際工作中常需凍存一定數(shù)量的細(xì)胞,以備替換使用。細(xì)胞冷凍與復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng) 室的常規(guī)工作和通用技術(shù)。目前,細(xì)胞凍存最常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,主要采用加適量保護(hù)劑的緩慢冷凍法凍存細(xì)胞。細(xì)胞在不加任何保護(hù)劑的情況下直接冷凍,細(xì)胞內(nèi)外的水分會(huì)很快形成冰晶,從而引起一系列不良反應(yīng)。如細(xì)胞脫水使局部電解質(zhì)濃度增高,pH值改變,部分蛋白質(zhì)由于上述原因而變性,引起細(xì)胞內(nèi)部空間結(jié)構(gòu)紊亂,溶酶體膜由此遭到損傷而釋放出溶酶體酶,使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)成分造成破壞,線(xiàn)粒體腫脹,功能丟失,并造成能量代謝障礙。胞膜上的類(lèi)脂蛋白復(fù)合體也易破壞引起細(xì)胞膜通透性的改變,使細(xì)胞內(nèi)容物丟失。如果細(xì)胞內(nèi)冰晶形成較多,隨冷凍溫度的降低,冰晶體積膨脹造成細(xì)胞核DNA空間構(gòu)型發(fā)生不可逆的損傷,而致細(xì)胞死亡。因此,細(xì)胞冷凍技術(shù)的關(guān)鍵是盡可能地減少細(xì)胞內(nèi)水分,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成。采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)分子量小,溶解度大,易穿透細(xì)胞,可以使冰點(diǎn)下降,提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,且對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性。慢速冷凍方法又可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少胞內(nèi)形成冰結(jié)晶的機(jī)會(huì),從而減少冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷。 SK BR 03細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T3NIH細(xì)胞、KTC1細(xì)胞、Hs 739.T細(xì)胞 MS751細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:INS1細(xì)胞、EJ 138細(xì)胞、HEK-293 c18細(xì)胞 MD Anderson-Metastatic Breast-361細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCILY10細(xì)胞、RCC23細(xì)胞、CRFK細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 Sp2/0-Ag14 epithelioid cells小鼠骨髓瘤細(xì)胞系 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代的一般方法:開(kāi)始細(xì)胞傳代前,仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全:一般主要有:細(xì)胞(單層細(xì)胞,鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或199等適合細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1萬(wàn)單位)、7.5%NaHC03溶液、0.25%胰蛋白酶、PBS洗液。用具:小方瓶(100m1)、克氏瓶、膠塞、吸管(10ml、1m1)、細(xì)胞吹打管(20ml)(以上用具需經(jīng)121℃至少15分鐘高壓滅菌)、C02 孵箱、超凈臺(tái)、倒置顯微鏡、4℃、-20℃冰箱;操作步驟:鏡檢細(xì)胞,挑選生長(zhǎng)狀態(tài)良好,細(xì)胞界限清晰,具有立體感,形態(tài)好無(wú)污染、無(wú)異常及可疑病變細(xì)胞。配制細(xì)胞培養(yǎng)液:按以下配比配制MEM-0.2%LH培養(yǎng)液100ml內(nèi),加入滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。消化細(xì)胞;先用PBS洗液沖洗細(xì)胞表面1-2次,每次10m1,棄去洗液,向細(xì)胞瓶?jī)?nèi)加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細(xì)胞瓶平放,使消化液完全覆蓋細(xì)胞表面。至細(xì)胞完全脫落到胰酶中。每瓶加入10m1細(xì)胞培養(yǎng)液吹打分散細(xì)胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再加入10m1細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝,然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量。加塞,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4天成片。(由細(xì)胞接種濃度決定);填寫(xiě)傳代記錄。 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代 EJ 138細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IEC18細(xì)胞、MV(4;11)細(xì)胞、MSCs(mUCMSCs)細(xì)胞 HT29細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 962細(xì)胞、OVCA-432細(xì)胞、HCT_116細(xì)胞 LTEP-a-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BOWES細(xì)胞、SKNBE(2c)細(xì)胞、A498細(xì)胞 NE1-E6E7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU668細(xì)胞、H-1105細(xì)胞、MOLT 4細(xì)胞 NCI-HUT-520細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3J HR-1細(xì)胞、RS(4;11)細(xì)胞、MF2059細(xì)胞 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 Sp2/0-Ag14 epithelioid cells小鼠骨髓瘤細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:懸浮生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:淋巴母細(xì)胞樣;圓形 購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,原因比較復(fù)雜,常見(jiàn)原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳;血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳;解凍過(guò)程錯(cuò)誤;冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心;懸渾細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞;培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤;細(xì)胞置于-80℃太久等。建議嚴(yán)格參照ATCC的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇、凍存等工作。欲將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來(lái),其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速?欲回收動(dòng)物細(xì)胞,其離心速率一般為300×g(約1O(jiān)OOrpm),5-10分鐘,轉(zhuǎn)速過(guò)高或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)都將造成細(xì)胞死亡。合適的離心轉(zhuǎn)速是根據(jù)相對(duì)離心力決定。RCF=1.119×105×r×(rpm)2,其中r為離心機(jī)轉(zhuǎn)軸中心與離心套管底部?jī)?nèi)壁的距離;rpm為離心機(jī)每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù);RCF(relative centrifugal force)為相對(duì)離心力,以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍數(shù)來(lái)表示單位。 3T3-F442A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:rRTEC細(xì)胞、SK-LU-1細(xì)胞、Panc 05.04細(xì)胞 Panc 02.03細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HES [Human embryonic skin fibroblast]細(xì)胞、VK2/E6E7細(xì)胞、CCD-841CoN細(xì)胞 T-47-D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BTI-TN5B1-4細(xì)胞、Panc_08_13細(xì)胞、KMST6細(xì)胞 SCC-1395細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:mREC細(xì)胞、HCC-1500細(xì)胞、Buffalo Rat Liver-3A細(xì)胞 H322T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H676B細(xì)胞、MV-522細(xì)胞、U138MG細(xì)胞 SKGT4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BEND細(xì)胞、HCC15細(xì)胞、CCRF SB細(xì)胞 OCILY10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HLF-a細(xì)胞、RSMC細(xì)胞、C3H10T1/2 clone8細(xì)胞 MBT2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC-9/GR細(xì)胞、M-14細(xì)胞、MHCC97H細(xì)胞 Hs832.Tc細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero 76細(xì)胞、MDAMB231細(xì)胞、NCI-A549細(xì)胞 Jeko1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mel-RM細(xì)胞、MMVECs細(xì)胞、ChaGo-K1細(xì)胞 Sp2/0-Ag14 epithelioid cells小鼠骨髓瘤細(xì)胞系 NCIH1703細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NK-10A細(xì)胞、Hs 683細(xì)胞、A-172MG細(xì)胞 WERI-Rb-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HDLM-2細(xì)胞、RT112細(xì)胞、UM-UC-1細(xì)胞 U-2 OS細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CL 1-0細(xì)胞、HSAS3細(xì)胞、MMQ細(xì)胞 H510A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DHL-5細(xì)胞、PLB 985細(xì)胞、COLO-741細(xì)胞 UCD-MLA-144細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-900細(xì)胞、L132細(xì)胞、SK MEL 5細(xì)胞 HLEpiC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tca8113細(xì)胞、AAV293細(xì)胞、DHL5細(xì)胞 FRO細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H441-4細(xì)胞、hUC-MSC細(xì)胞、H716細(xì)胞 H-1770細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RSC 96細(xì)胞、Fetal Human Lens-124細(xì)胞、PLC/PRF/5細(xì)胞 PG-4 (S+L-)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SB細(xì)胞、MCF7細(xì)胞、COC1/CDDP細(xì)胞 VP229細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-1222細(xì)胞、HUT 226細(xì)胞、OCM-1A細(xì)胞 102PT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KMH2細(xì)胞、COLO 16細(xì)胞、C2C12細(xì)胞 Th17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MIN-6細(xì)胞、SHIN3細(xì)胞、Eph4 1424細(xì)胞 HT 115細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SBC5細(xì)胞、H2171細(xì)胞、KYSE520細(xì)胞 NCIH1755細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FET細(xì)胞、RGM-1細(xì)胞、MILE SVEN1細(xì)胞 293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPA87細(xì)胞、HT-144細(xì)胞、A875細(xì)胞 PANC0504細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ATN1細(xì)胞、HIT細(xì)胞、SK-MEL-24細(xì)胞 ECV細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:S91細(xì)胞、NCIH522細(xì)胞、H1954細(xì)胞 MDA-MB361細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS-53細(xì)胞、LA4細(xì)胞、Mouse Podocyte Clone-5細(xì)胞 mIMCD-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NIH:OVCAR4細(xì)胞、BJA-B細(xì)胞、H1882細(xì)胞 MES-SA/Dx5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Glioma-261細(xì)胞、B16-F1細(xì)胞、HANK1細(xì)胞 CCRF SB細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1355細(xì)胞、KTCTL-140細(xì)胞、A101D細(xì)胞 E0771細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Corneal Epithelial cells-Transformed細(xì)胞、BC-3-H-I細(xì)胞、kms 11細(xì)胞 A498細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-196細(xì)胞、C2-C12細(xì)胞、OSC19細(xì)胞 SU-DHL-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-522細(xì)胞、SW 579細(xì)胞、NIHOVCAR3細(xì)胞 MeWo細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-Ly3細(xì)胞、HBVSMC細(xì)胞、OPM-2細(xì)胞 MOLM16細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:16-HBE14o細(xì)胞、CEM-CCRF細(xì)胞、HSF細(xì)胞 SuDHL 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSKMC細(xì)胞、BE2M17細(xì)胞、NCIH3255細(xì)胞 M14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK MEL-28細(xì)胞、T1-73細(xì)胞、Douglas Foster-1細(xì)胞 H-1755細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2342細(xì)胞、COLO-680N細(xì)胞、OCI-AML-3細(xì)胞 LN-229細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RGCs細(xì)胞、786-0細(xì)胞、hSCC-25細(xì)胞 CMEC/D3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DB細(xì)胞、GM00215A細(xì)胞、FBHE細(xì)胞 J 111細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2030細(xì)胞、MRMT-1細(xì)胞、L929細(xì)胞 CRFK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TCC-PAN2細(xì)胞、JVM3細(xì)胞、NCI.H522細(xì)胞 NPA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Rabbit Kidney 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