"NCI-N87 epithelioid cells人胃癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:NCI-N87細(xì)胞表達(dá)表面糖蛋白癌胚抗原(CEA)和TAG72,并且沒有左旋多巴胺脫羧酶(DDC)活性。它們的血管活性的腸肽(VIP)受體活性極低并缺乏胃泌激素受體。它們表達(dá)蕈毒堿膽堿受體。沒有證據(jù)表明存在N-myc,L-myc,myb和EGF受體基因的重組。這個(gè)細(xì)胞株表達(dá)的c-myc和c-erb-B2RNA水平與其它細(xì)胞株相當(dāng)。以下基因不表達(dá):N-myc,L-myc,c-cis,IGF-2,或胃泌激素釋放肽。報(bào)道NCI-N87細(xì)胞的植板率為4.3%。 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項(xiàng):1.取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識(shí),在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對(duì)細(xì)胞不是完全無(wú)毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對(duì)細(xì)胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會(huì)造成細(xì)胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對(duì)細(xì)胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個(gè),去除DMSO,去除死細(xì)胞,這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對(duì)一般人來(lái)說(shuō),把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會(huì)受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說(shuō)法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,結(jié)果無(wú)異常。5.細(xì)胞貼壁少的問題:教科書中說(shuō)明凍存細(xì)胞解凍時(shí)1ml細(xì)胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題:試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細(xì)胞濃度過低,不利于細(xì)胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個(gè)量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會(huì)比較大,就會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),從以前的資料來(lái)看,DMSO的濃度在小于0.5%的時(shí)候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響,還有一個(gè)說(shuō)法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無(wú)害濃度。 HCV-29細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:E.L.4細(xì)胞、NCI-H-295細(xì)胞、Hmy.2 CIR細(xì)胞 HCC-2108細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Embryonic Skin細(xì)胞、N-9細(xì)胞、KYSE-520細(xì)胞 MCMEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IB-RS2細(xì)胞、HUT28細(xì)胞、PC-3/M細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 NCI-N87 epithelioid cells人胃癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代的一般方法:開始細(xì)胞傳代前,仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全:一般主要有:細(xì)胞(單層細(xì)胞,鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或199等適合細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1萬(wàn)單位)、7.5%NaHC03溶液、0.25%胰蛋白酶、PBS洗液。用具:小方瓶(100m1)、克氏瓶、膠塞、吸管(10ml、1m1)、細(xì)胞吹打管(20ml)(以上用具需經(jīng)121℃至少15分鐘高壓滅菌)、C02 孵箱、超凈臺(tái)、倒置顯微鏡、4℃、-20℃冰箱;操作步驟:鏡檢細(xì)胞,挑選生長(zhǎng)狀態(tài)良好,細(xì)胞界限清晰,具有立體感,形態(tài)好無(wú)污染、無(wú)異常及可疑病變細(xì)胞。配制細(xì)胞培養(yǎng)液:按以下配比配制MEM-0.2%LH培養(yǎng)液100ml內(nèi),加入滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。消化細(xì)胞;先用PBS洗液沖洗細(xì)胞表面1-2次,每次10m1,棄去洗液,向細(xì)胞瓶?jī)?nèi)加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細(xì)胞瓶平放,使消化液完全覆蓋細(xì)胞表面。至細(xì)胞完全脫落到胰酶中。每瓶加入10m1細(xì)胞培養(yǎng)液吹打分散細(xì)胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再加入10m1細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝,然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量。加塞,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4天成片。(由細(xì)胞接種濃度決定);填寫傳代記錄。 細(xì)胞傳代方法:消化15-20分鐘。1:2。4-5天長(zhǎng)滿。 HEK293-H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNMC細(xì)胞、OCI AML4細(xì)胞、U87MG細(xì)胞 16HBE140細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-475細(xì)胞、LCLC-103H細(xì)胞、BTI-TN5B1-4細(xì)胞 H69細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE-50細(xì)胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-4細(xì)胞、PG [Human lung carcinoma]細(xì)胞 N-9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PK15細(xì)胞、MSF細(xì)胞、CG4細(xì)胞 S37細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBE135-E6E7細(xì)胞、Jurkat, Clone E6-1細(xì)胞、NCIH716細(xì)胞 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 NCI-N87 epithelioid cells人胃癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮細(xì)胞樣 培養(yǎng)細(xì)胞真的不難,最關(guān)鍵幾點(diǎn):1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的,真的很難相信你會(huì)把細(xì)胞養(yǎng)壞;2)動(dòng)作要快,胰酶消化,換液什么,細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時(shí)間,所謂的細(xì)胞狀態(tài)差,很多時(shí)候是傳代的原因;3)有時(shí)間的話,需要細(xì)胞計(jì)數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線,不會(huì)臨時(shí)要處理,手足無(wú)措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時(shí)間,傳代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行,可以節(jié)省很多時(shí)間,也不會(huì)耽誤別人的實(shí)驗(yàn);5)個(gè)人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人,避免相互干擾。每天對(duì)待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)有哪些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)可以分享呢?1)嚴(yán)格無(wú)菌操作,多噴噴酒精,要是對(duì)滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準(zhǔn)備一套;3)有可能的話在拿到新細(xì)胞的時(shí)候做好支原體衣原體檢測(cè);4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動(dòng)加濕的話盤里的水也會(huì)很臟,勤換(滅菌水加進(jìn)去);5)晚上離開的時(shí)候給傳代細(xì)胞照紫外,超凈臺(tái)是用完就開;6)是同一時(shí)間就你一個(gè)人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。 Michigan Cancer Foundation-12A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NBL-12細(xì)胞、HSC/mHSC細(xì)胞、CAL27細(xì)胞 MM.1S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-1419細(xì)胞、C-4I細(xì)胞、F36P細(xì)胞 PANC 813細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT GEO細(xì)胞、MESSADX5細(xì)胞、PM6細(xì)胞 MV4-11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EBTr (NBL-4)細(xì)胞、AC16 [Human hybrid]細(xì)胞、SKLU01細(xì)胞 NCI-H1238細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1668細(xì)胞、BAC1.2F5細(xì)胞、SKMEL-31細(xì)胞 NK92-MI細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MPP 89細(xì)胞、CHP 126細(xì)胞、BRL3A細(xì)胞 HuCCT-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:T-98細(xì)胞、AR-42J細(xì)胞、RPMI1788細(xì)胞 Swiss3T3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T6-Swiss albino細(xì)胞、NCI-BL6細(xì)胞、NCIH661細(xì)胞 H-211細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM 190細(xì)胞、HT1197細(xì)胞、CEM C7細(xì)胞 Mel526細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LC-MS細(xì)胞、KCL-22細(xì)胞、KRC/Y細(xì)胞 NCI-N87 epithelioid cells人胃癌細(xì)胞系 L1210細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCA-7細(xì)胞、SVG p12細(xì)胞、TE9細(xì)胞 CEMC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DK-MG細(xì)胞、H9c2 (2-1)細(xì)胞、MDCK.2細(xì)胞 GM0637細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM149細(xì)胞、TOV112D細(xì)胞、Leukemic 1210細(xì)胞 DH82細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IM-95細(xì)胞、J774 A1細(xì)胞、NCIH1793細(xì)胞 HCV 29細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ly19細(xì)胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5細(xì)胞、OSRC2細(xì)胞 RPE1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM 266-4細(xì)胞、H-2195細(xì)胞、CCD-112 CoN細(xì)胞 RPE1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM 266-4細(xì)胞、H-2195細(xì)胞、CCD-112 CoN細(xì)胞 MC 116細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM06141細(xì)胞、KFB細(xì)胞、MH-S細(xì)胞 NCI-H87細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:7404細(xì)胞、RH-35細(xì)胞、COLO824細(xì)胞 NCIH1437細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1385細(xì)胞、Madison lung細(xì)胞、PL11細(xì)胞 NuTu 19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RGE細(xì)胞、PT-K75細(xì)胞、HB611細(xì)胞 NCI-H841細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BNL.1ME A.7R.1細(xì)胞、NOZAWA細(xì)胞、Colo16細(xì)胞 MDA175細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-MEL28細(xì)胞、HN6細(xì)胞、MDA-MB-435細(xì)胞 MIA PaCa-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H82細(xì)胞、SP2細(xì)胞、DoTc2-4510細(xì)胞 Panc2.03細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AMJ2-C8細(xì)胞、U266BL細(xì)胞、C 6細(xì)胞 Emory University-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ME 180細(xì)胞、MDA-MB-157細(xì)胞、HIT clone T15細(xì)胞 MNNG/HOS Clone F-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SJSA1細(xì)胞、DHL-16細(xì)胞、GM02131A細(xì)胞 NCI-H774細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UMUC14細(xì)胞、BE2_C細(xì)胞、CCC-HEL-1細(xì)胞 SW626細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:XWLC-05細(xì)胞、VMRC-LCD細(xì)胞、HCV29細(xì)胞 RSC 96細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ej138細(xì)胞、SKMEL-31細(xì)胞、IEC 18細(xì)胞 COLO 206F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PLA 802細(xì)胞、CCD 966 SK細(xì)胞、Hi-five細(xì)胞 P30/OHK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WSU-HN13細(xì)胞、LCD細(xì)胞、PAEC細(xì)胞 H358細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3/NS1/1-Ag4.1細(xì)胞、NK-92 transfected with MFG-hIL2細(xì)胞、ACC-2細(xì)胞 H-810細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKRC-42細(xì)胞、COLO-320DM細(xì)胞、H 9細(xì)胞 SNU878細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L cell細(xì)胞、CMECs細(xì)胞、A-875細(xì)胞 H-2195細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-226細(xì)胞、Hs683細(xì)胞、D324 Med細(xì)胞 SW 13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD18Co細(xì)胞、UMUC-14細(xì)胞、CAOV4細(xì)胞 KG-1a細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HVSMC細(xì)胞、ROS17/28細(xì)胞、QG-56細(xì)胞 SK-MES-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NEC細(xì)胞、SU-86-86細(xì)胞、Simpson細(xì)胞 Ramos (RA)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BALB/3T3 clone 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