"HK-2 [Human kidney] epithelioid cells人腎小管上皮細胞系 細胞背景資料:該細胞屬源于正常腎的近曲小管細胞,通過導入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉染外生包裝細胞Psi-2,Psi-2細胞產(chǎn)生的病毒再去感染兼嗜性包裝細胞系PA317,最后將PA317產(chǎn)生的病毒顆粒導入正常的腎皮質(zhì)近曲小管細胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性,但未用G418篩選轉導克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2細胞來源于單克隆。PCR檢測證實HK-2細胞基因組中含有E6/E7基因。 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞傳代培養(yǎng)實驗:體外培養(yǎng)的原代細胞或細胞株要在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代,以便獲得穩(wěn)定的細胞株或得到大量的同種細胞,并維持細胞種的延續(xù)。培養(yǎng)的細胞形成單層匯合以后,由于密度過大生存空間不足而引起營養(yǎng)枯竭,將培養(yǎng)的細胞分散,從容器中取出,以1:2或1:3以上的比率轉移到另外的容器中進行培養(yǎng),即為傳代培養(yǎng);細胞“一代”指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間,與細胞世代或倍增不同。在一代中,細胞培增3~6次。細胞傳代后,一般經(jīng)過三個階段:游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細胞分裂指數(shù)表示細胞增殖的旺盛程度,即細胞群的分裂相數(shù)/100個細胞。一般細胞分裂指數(shù)介于0.2%~0.5%,腫瘤細胞可達3~5%;細胞接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力時期,稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期),適宜進行各種試驗。實驗步驟:1.將長成的培養(yǎng)細胞從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出,在超凈工作臺中倒掉瓶內(nèi)的培養(yǎng)液,加入少許消化液。(以液面蓋住細胞為宜),靜置5~10分鐘。2.在倒置鏡下觀察被消化的細胞,如果細胞變圓,相互之間不再連接成片,這時應立即在超凈臺中將消化液倒掉,加入3~5ml新鮮培養(yǎng)液,吹打,制成細胞懸液。3.將細胞懸液吸出2ml左右,加到另一個培養(yǎng)瓶中并向每個瓶中分別加3ml左右培養(yǎng)液,蓋好瓶塞,送回二氧化碳培養(yǎng)箱中,繼續(xù)進行培養(yǎng)。一般情況,傳代后的細胞在2小時左右就能附著在培養(yǎng)瓶壁上,2~4天就可在瓶內(nèi)形成單層,需要再次進行傳代。 SP2細胞系相關產(chǎn)品:CCD1095Sk細胞、SW 13細胞、HPB-ALL細胞 MS-751細胞系相關產(chǎn)品:H-1184細胞、COLO.205細胞、H847細胞 SCaBER細胞系相關產(chǎn)品:QGY7703細胞、RGC6細胞、L 428細胞 細胞生長:貼壁 HK-2 [Human kidney] epithelioid cells人腎小管上皮細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗分享:支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養(yǎng)中生長,營養(yǎng)要求比細菌高。細胞培養(yǎng)(特別是傳代細胞)被支原體污染是個世界性問題。在細胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細胞的DNA,RNA及蛋白表達,又不能通過可視法對其進行檢測,而且它對細胞的生長率影響較小,不易引起注意。國內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見的污染細胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細胞的支原體種類是很多的,國外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細胞,有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。組織細胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個方面來預防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴格實驗操作;細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細胞后,特別是重要的細胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理。支原體最突出的結構特征是沒有細胞壁,一般來講,對作用于細胞壁生物合成的抗生素,如萬古霉素等完全不敏感;對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對支原體有較小抑制作用,所以常不用來作為支原體感染的化學治療劑。 細胞傳代方法:1:4傳代;2-3天換液1次 SW1116細胞系相關產(chǎn)品:KYSE0520細胞、HT-1197細胞、NCI-H719細胞 NCI-H920細胞系相關產(chǎn)品:HLEC-B3細胞、Gingival carcinoma Neck Metastasis細胞、CORL279細胞 Anglne細胞系相關產(chǎn)品:COC1/CDDP細胞、HO-8910 PM細胞、GM03573細胞 SUM 149細胞系相關產(chǎn)品:Detroit-562細胞、CHL1細胞、HT(H9)細胞 PC 61細胞系相關產(chǎn)品:CCF-STTG1細胞、Huh-7細胞、H-524細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 HK-2 [Human kidney] epithelioid cells人腎小管上皮細胞系 細胞生長特性:貼壁生長 細胞形態(tài)特性:上皮樣 細胞凍存的步驟:1)選擇處于對數(shù)生長期的細胞,在凍存前一天換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)液去掉,用0.25% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶,加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞,使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產(chǎn)細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘);2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基,于4℃預冷15分鐘后,逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,細胞濃度為5×106~1×107/mL之間。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢?答案是不一定的,具體要看培養(yǎng)的細胞類型來選擇;3)將分裝上述細胞懸液于2ml凍存管中,每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊,并標記好細胞名稱和凍存日期,同時作好登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù));4)將裝好細胞的凍存管放到凍存盒中,-80℃冰箱過夜。;如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜,放入液氮罐);或者可以在4℃,2h;然后轉到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐;5)細胞凍存在液氮中可以長期保存,但為妥善起見,凍存半年后,取出一只凍存管細胞復蘇培養(yǎng),觀察生長情況,然后再繼續(xù)凍存。 FL62891細胞系相關產(chǎn)品:PCI-SG231細胞、SNU-601細胞、SNU-668細胞 Colo-678細胞系相關產(chǎn)品:SupB15WT細胞、Hela-mock細胞、Biopsy xenograft of Pancreatic Carcinoma line-3細胞 LNCaP-ATCC細胞系相關產(chǎn)品:MLA 144細胞、Japanese Tissue Culture-28細胞、P3HRI細胞 K7M2細胞系相關產(chǎn)品:GM03569D細胞、Pro-Lec1.3C細胞、NCI-H1092細胞 He La細胞系相關產(chǎn)品:C81-61細胞、EST50細胞、M210B4細胞 EJ1細胞系相關產(chǎn)品:SUDHL2細胞、OVCA 433細胞、SW-1463細胞 CT 26細胞系相關產(chǎn)品:NCI/ADR-RES細胞、CMT 64細胞、GM-346細胞 PANC-1細胞系相關產(chǎn)品:HIEC-6細胞、HIT T15細胞、Leghorn Male Hepatoma cell line細胞 H2066細胞系相關產(chǎn)品:H889細胞、T-84細胞、PLA802細胞 NCI-H3255細胞系相關產(chǎn)品:CATH-a細胞、C8166-CD4細胞、H-196細胞 HK-2 [Human kidney] epithelioid cells人腎小管上皮細胞系 LNCaP C4-2細胞系相關產(chǎn)品:SW480E細胞、DI TNC-1細胞、NK92細胞 H-2106細胞系相關產(chǎn)品:Japanese Tissue Culture-39細胞、SBC-5細胞、C4 I細胞 EA.Hy926細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H1770細胞、SCCVII細胞、P36細胞 PL-12細胞系相關產(chǎn)品:MOLT-3細胞、NCIH747細胞、NIE-115細胞 Panc02-H0細胞系相關產(chǎn)品:PANC-08-13細胞、Y-1細胞、VA-ES-BJ細胞 SK-MES-1細胞系相關產(chǎn)品:NEC細胞、SU-86-86細胞、Simpson細胞 SK-MES-1細胞系相關產(chǎn)品:NEC細胞、SU-86-86細胞、Simpson細胞 SuDHL 1細胞系相關產(chǎn)品:HSKMC細胞、BE2M17細胞、NCIH3255細胞 HCC95細胞系相關產(chǎn)品:RN-c細胞、Neuro-2a細胞、SV-HUC細胞 MDBK細胞系相關產(chǎn)品:ECC10細胞、U-hth74細胞、HBZY1細胞 MFM-223細胞系相關產(chǎn)品:SKLU-1細胞、KM12-SM細胞、P3X63Ag8-6-5-3細胞 PAN 02細胞系相關產(chǎn)品:MFM-223細胞、MTEC1細胞、RAW-264.7細胞 Pan02細胞系相關產(chǎn)品:OVCAR.5細胞、JTC-28細胞、EHEB細胞 AN-3細胞系相關產(chǎn)品:U373MG細胞、COLO 320細胞、HCM細胞 Line 207細胞系相關產(chǎn)品:HCC1806細胞、BC-022細胞、U251-MG細胞 231-luc細胞系相關產(chǎn)品:BTT739細胞、HCC-2185細胞、RPE1-hTERT細胞 CAKI1細胞系相關產(chǎn)品:Anip 973細胞、159 PT細胞、HTR8svn細胞 REC1細胞系相關產(chǎn)品:MKN-7細胞、HEMCSS細胞、CEM clone 7細胞 TCC-PAN2細胞系相關產(chǎn)品:Suzhou Human Glioma-44細胞、LMH細胞、IOSE-Van細胞 P3.NS-1/1.Ag4.1細胞系相關產(chǎn)品:BJAB細胞、SKUT1細胞、B16F1細胞 COR-L51細胞系相關產(chǎn)品:C26細胞、MC/9細胞、LM8細胞 NE-1細胞系相關產(chǎn)品:159 PT細胞、MGC803細胞、HSC-6細胞 Panc-1-P細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H460細胞、GM03570E細胞、PLA801-95D細胞 MOVAS-1細胞系相關產(chǎn)品:Human Liver-7702細胞、NCI-H460細胞、WM266細胞 Shadyside Hospital Pittsburgh-77細胞系相關產(chǎn)品:H9c2 (2-1)細胞、R1800[RA]細胞、M059K細胞 NCIH1184細胞系相關產(chǎn)品:AU-565細胞、H498細胞、H-847細胞 LICR-LON-HN6細胞系相關產(chǎn)品:NW-38細胞、HOP-62細胞、H2023細胞 FRO細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H441-4細胞、hUC-MSC細胞、H716細胞 SW 527細胞系相關產(chǎn)品:UMUC-3細胞、H1435細胞、A375-S2細胞 Hx-147細胞系相關產(chǎn)品:PLB 985細胞、MES-23.5細胞、PG-4細胞 P3-Jiyoye細胞系相關產(chǎn)品:M-NFS-60細胞、SHZ-88細胞、SK-RC-39細胞 alphaTC1 Clone 6細胞系相關產(chǎn)品:CCRF.CEM細胞、HBE135-E6E7細胞、ZR-75-1細胞 MB49細胞系相關產(chǎn)品:HOC細胞、SF-763細胞、Mhh-Call 2細胞 BA/F3細胞系相關產(chǎn)品:DSL-6A-C1細胞、HEP-3B2細胞、MDA-MB468細胞 MUG-Chor1細胞系相關產(chǎn)品:Mv1.Lu細胞、L細胞、SW 1783細胞 Colon-38細胞系相關產(chǎn)品:CEM/0細胞、786-0WT細胞、LTEP-s細胞 YTMLC-90細胞系相關產(chǎn)品:ONS76細胞、CEM.C1細胞、Transformed C3H Mouse Kidney-1細胞 JB-6細胞系相關產(chǎn)品:H322細胞、NCIH740細胞、COLO 824細胞 OPM-2細胞系相關產(chǎn)品:NK-92MI細胞、OVCAR-420細胞、MSC細胞 V79細胞系相關產(chǎn)品:MDCKII-WT細胞、SW-948細胞、Tokyo Medical and Dental university 8細胞 H-378細胞系相關產(chǎn)品:SW839細胞、NCI-H87細胞、Alpha Mouse Liver 12細胞 H-2135細胞系相關產(chǎn)品:ROS17/28細胞、SKRC20細胞、Epstein-Barr-1細胞 UCLA-RO 81細胞系相關產(chǎn)品:M-14細胞、HTori:3細胞、MDA.MB.231細胞 Hs 445細胞系相關產(chǎn)品:OP9細胞、TK.10細胞、H-1963細胞 GH3細胞系相關產(chǎn)品:UPCI-SCC090細胞、HCT15細胞、293T細胞 3T3 Swiss Albino細胞系相關產(chǎn)品:OVTOKO細胞、BNL CL2細胞、CCK81細胞 SCC 15細胞系相關產(chǎn)品:VeroC1008細胞、NCI-H522細胞、MV4-11細胞 MM6細胞系相關產(chǎn)品:Kit225細胞、Rabbit Kidney 13細胞、C3A細胞 C-643細胞系相關產(chǎn)品:AD293細胞、RA.1細胞、Granta519細胞 Kit225細胞系相關產(chǎn)品:SK-N-BE(2)-M17細胞、CAL-27細胞、NCIH2107細胞 SHEP1細胞系相關產(chǎn)品:SKRC-39細胞、Panc-08.13細胞、Hs940T細胞 HK-2 [Human kidney] epithelioid cells人腎小管上皮細胞系 Cattle chondrocytes細胞系相關產(chǎn)品:L5178YR細胞、S37細胞、P3JHR1細胞 L cells細胞系相關產(chǎn)品:HMC3細胞、NCI-H2107細胞、GP-293細胞 GM03573A細胞系相關產(chǎn)品:Panc 5.04細胞、H1650細胞、HCC0070細胞 LNCaP-ATCC細胞系相關產(chǎn)品:MLA 144細胞、UM-UC-14細胞、EBTr (NBL-4)細胞 "
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