"EFM-19 Cell:人乳腺管癌細胞系
細胞形態(tài):上皮細胞樣
細胞生長:貼壁
細胞背景資料:乳腺管癌;胸腔積液轉(zhuǎn)移;女性
PANC-04-03細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MPC-83細胞、ADR-RES細胞、H-II-E-C3細胞
SNU-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKLU01細胞、HCT_116細胞、KYSE-50細胞
Hs 839.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H661細胞、HEK 293細胞、HEK293-A細胞
DMS-114細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDAMB-231細胞、253J細胞、293AD細胞
細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
EFM-19 Cell:人乳腺管癌細胞系
細胞傳代時消化的問題:可以這樣說,對于需要消化傳代的細胞,每一次的消化都是對這個細胞存活與否,狀態(tài)好與不好最至關(guān)重要的考驗。很多同學(xué)都遇到過這個問題,自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺好的,可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞,狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題,可以非??隙ǖ卣f,你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以,越長越差。在消化的過程中,你加入胰酶后,所有細胞都在被胰酶消化著,但是我們忽視了一個問題就是,細胞的生長狀態(tài)是不一樣的,每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的,有的貼壁牢固,有的貼壁沒有那么牢固的,所以,讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的,他們受到了差別待遇當然會有脾氣啊。我后來對消化的方法進行了改良。爭取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。(以難消化細胞為例);具體操作:1)首先不加胰酶,倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍,(這是前奏,即為步,目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍,這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍,兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步(你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng),以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更好一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了。)3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體,加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍,吸掉棄之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察,待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶與干凈子彈頭里備用,加入新培養(yǎng)基開始吹打,吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(你也可以傳入新瓶培養(yǎng),以與后面及前面的做對比。)這是第三步。4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶,如果你們那比較富裕的話,呵呵。繼續(xù)鏡下觀察,待剩余細胞間隙明顯,細胞獨立開來的時候,吸掉胰酶,加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)(根據(jù)實際情況你自己把握)。這是第四步。其實還可以有第五步,對于特別難消化的細胞和對胰酶特別敏感的細胞的話,你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細胞更好的狀態(tài),更漂亮的樣子,沒辦法,你必須分多批多次消化,這樣才能限度地將胰酶對細胞的損傷降到最低,保證細胞的狀態(tài)能夠。當然了,如果細胞是屬于那種很容易消化的細胞,像RAW264.7,僅僅第二步就搞定了。就沒必要第三步第四步了。這個是需要你在實驗中能夠自己用心去體會的。建議你接受一個新細胞時把各步消化的細胞分別培養(yǎng)起來做比較,去摸索好細胞對胰酶的要求。便于你后續(xù)實驗的開展。將細胞消化分成這幾步,除了是為了避免胰酶對細胞的損傷之外,還有一個更重要的作用就是,可以程度地把細胞吹打成單個單個的狀態(tài),不成片不連體。
細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。
細胞接收后的操作流程與注意事項:1)如果細胞為貼壁細胞,而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請將懸浮的細胞即時離心,加15%血清的完全培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡,請及時聯(lián)系實驗室技術(shù)人員會跟進解決;2)貼壁細胞生長緩慢;適當提高血清濃度(最高不能超過20%),或可根據(jù)該細胞生長密度,考慮胰酶消化后,轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng);3)生長不均:貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長,可將細胞進行消化,重懸打散細胞,加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系
C42細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LUDLU-1細胞、1E8-H細胞、PLA 802細胞
Hs 675.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PanC1細胞、KYSE-270細胞、NHEK細胞
Walker-Ca.256細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tu 177細胞、WSU-DLCL(2)細胞、KNS42細胞
HSAEC1-KT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-403細胞、Duke University 4475細胞、H-1623細胞
X63-AG 8.653細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LAN-5細胞、OVCAR433細胞、H-157細胞
細胞生長特性:貼壁
EFM-19 Cell:人乳腺管癌細胞系
貼壁消化難題:1,先用PBS 把細胞洗兩遍,使瓶內(nèi)沒有血清了,減少對胰酶的中和,然后用新配的0.25%的胰酶加入3ml左右,放在37度,然后可以在細胞有些消化下來時,拿著瓶口,運用手腕的力量輕輕震蕩瓶內(nèi)液體,這樣細胞很快就下來了,還不需要吹打,分散也均勻;2,成團、絮狀:消化液里加入edta可以減少細胞成團的現(xiàn)象,血清可以終止胰酶的作用,如果是進口血清的話也能終止edta的作用。用胰酶消化后胰酶可以倒掉,也可以不倒,直接加血清終止,如果消化液中加入了edta的話,就要將消化液倒干凈,如果細胞貼壁要求不是很嚴格的話,一般不需要進行離心。鼻咽癌細胞的貼壁能力很強,用0.5%胰酶(含0.1%EDTA)一般要消化12~15min。用PBS洗滌時要洗凈殘余的培養(yǎng)基,加入胰酶后在培養(yǎng)箱中消化(避免細胞室溫下受損以及在此溫度時胰酶活性最強)至細胞收縮變圓(可顯微鏡下觀察)且有少許細胞脫落(有流下來的趨勢),隨后立即棄去胰酶(如果脫落的細胞很多且需要大量細胞實驗,則不能棄去胰酶),加入培養(yǎng)基仔細吹打(不能用無血清培養(yǎng)基或者PBS替代,否則細胞聚集成團塊或絮狀)。一般我都離心一次棄去上清(去除殘留的胰酶及漂浮的死細胞或細胞碎片);消化過度:馬上用培養(yǎng)基中和,用吸管吹打細胞,收集全部的細胞到以無菌的離心管中800RPM 3分鐘。棄上清,用全培重懸,換新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng),狀態(tài)不好的細胞在培養(yǎng)的過程中會死亡脫落,在換液的時候可以清除掉!
細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書
SK-N-FI細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tb 1 Lu細胞、P3/X63/Ag8細胞、MCF 10A細胞
526細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-RC-52細胞、LUDLU-1細胞、H548細胞
H-2291細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SuDHL 4細胞、BCaP-37細胞、HeLa/DDP細胞
QG-56細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SY5Y細胞、Tu-686細胞、SB細胞
BT.549細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1755細胞、KU19-19細胞、DV90細胞
HCC-1954BL細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Walker256-TC細胞、WSUDLCL2細胞、MEF細胞
LLC-PK-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KHYG細胞、INS-1細胞、HEK293EBNA細胞
EFM-19 Cell:人乳腺管癌細胞系
CESS細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EFM-19細胞、B16 melanoma細胞、CaSki細胞
Swiss 3T6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM02219D細胞、C3H/10T1/2-clone8細胞、KM-12細胞
GM03190細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1092細胞、H69細胞、WiDr/S細胞
IHH-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PE CA PJ34細胞、CEM-C1細胞、L 132細胞
VSMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hce8693細胞、Calu3細胞、IGROV 1細胞
NRK clone 52E細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PBL細胞、ARO81細胞、NIH:OVCAR-5細胞
BT 325細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BCaP-37細胞、KNS-62細胞、DU-4475細胞
NCI.H23細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE450細胞、751細胞、AG06814-J細胞
LNCaP C4-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW480E細胞、DI TNC-1細胞、NK92細胞
LNCaP C4-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW480E細胞、DI TNC-1細胞、NK92細胞
NSH細胞系相關(guān)產(chǎn)品:THC-8307細胞、LA-N-6細胞、HEK 293 EBNA細胞
NTera2/D1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PK13細胞、LOUNH91細胞、HEK293A細胞
A549/DDP細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2029細胞、SW 948細胞、COLO320 DM細胞
YAC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:THLE-3細胞、Hu-P-T3細胞、THP 1細胞
H1436細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hep 2細胞、NRK clone 49F細胞、D6P2T細胞
8402細胞系相關(guān)產(chǎn)品:VMCUB1細胞、BMDC細胞、WM 2664細胞
CCRF-CEM細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-601細胞、ZR-75-1細胞、OCLY8細胞
Hep-G2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Emory University-2細胞、FK81細胞、CCC-HSF-1細胞
Mv 1 Lu (NBL-7)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BCaP 37細胞、H-1944細胞、NCI-UMC-11細胞
H2591細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hep G2-Luc細胞、SKOV-3細胞、CEMC7細胞
NCIH295R細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TI-73細胞、NCIH1755細胞、NCI-H2591細胞
CAL120細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IMR90細胞、OCILY-19細胞、RK-13細胞
U-2932細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 839.T細胞、P3HR1細胞、NRK52E細胞
JurkatE6-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Walker-256-TC細胞、NR8383.1細胞、28SC細胞
SK-MEL-31細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHO cell clone K1細胞、Centre Antoine Lacassagne-39細胞、PC 61.5.3細胞
C 6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T3-L1細胞、NT2D1細胞、Factor Dependent Continuous-Paterson 1細胞
JURKAT E-61細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MT-4細胞、WM-2664細胞、HNEpC細胞
SKLMS1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCLC-21H細胞、PLA 802細胞、L5178Y TK+/-3.7.2c細胞
NALM6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ramos (RA)細胞、IPEC-J2細胞、CTV1細胞
VM Cub 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:INS1E細胞、HLEpiC細胞、22Rv1細胞
MD Anderson-Metastatic Breast-330細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RINm-5F細胞、3T3-Swiss albino細胞、EBC1細胞
L-cell細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC116細胞、TW-039細胞、NCI-H1755細胞
Vertebral Cancer of the Prostate細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CT26.WT細胞、JTC-39細胞、MMVECs細胞
Hep-G2/C3A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:alpha TC1-6細胞、BJA-B-1細胞、aTC1-6細胞
AtT 20細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HN13細胞、A549/ATCC細胞、MCF7/WT細胞
L6565細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM00637F細胞、MB157細胞、DU145細胞
U266細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MV-4-11細胞、H1993細胞、AZ-521細胞
L-Wnt-3A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC3T3-E細胞、A-172細胞、RPMI-1788細胞
V 79-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FHs 74 Int細胞、K 562細胞、AU-565細胞
Keio University-19-19細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF539細胞、RPMI no 8226細胞、IHH-4細胞
BHK 21細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NBL-1細胞、LLC細胞、HUVEC細胞
DMS 273細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AN-3細胞、OCI-Ly7細胞、Hs940-T細胞
MNNG-HOS (TE 85, clone F-5)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SHP-77細胞、JF305細胞、SKMEL28細胞
EFM-19 Cell:人乳腺管癌細胞系
NU-GC-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TK-1細胞、Ramos G6.C10細胞、BERH-2細胞
NCI-SNU-216細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KPL4細胞、ANA-1細胞、H4-II-EC3細胞
KG-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SPC-A1細胞、Hs 895.T細胞、AMJ2-C8細胞
MHCC 97-L細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CT-26 WT細胞、U-2OS細胞、Colon38細胞
HL1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EM-3細胞、KU-812F細胞、Human Foreskin Fibroblast細胞
Douglas Foster-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2227細胞、APRE-19細胞、NIH:OVCAR-3細胞
AN3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kasumi 1細胞、alpha TC1 clone 6細胞、MNNG/HOS Cl #5細胞
NPA87細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DU 145細胞、Sc-1細胞、SHEP1細胞
NL-20細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RERF-LC-MS細胞、9L細胞、Hs832.Tc細胞
COC1/CDDP細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UCLA RO-81A-1細胞、IFRS1細胞、DHL-6細胞
R D細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL 120細胞、MDA-MB-175VII細胞、SUM 149細胞
Astrocyte type I clone細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-1細胞、Mo 59J細胞、OCM1A細胞
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