"B6Tert-1 Cell:人滋養(yǎng)層細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 細(xì)胞背景資料:滋養(yǎng)層;HGNC-TRET永生;女性 FHL124細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GCT0404細(xì)胞、MADISON LUNG TA-109細(xì)胞、HeLa-229細(xì)胞 Reuber H-35細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:STO細(xì)胞、Hs940-T細(xì)胞、PL 5細(xì)胞 CNE-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPBALL細(xì)胞、SUSM1細(xì)胞、IA-LM細(xì)胞 NCIH1651細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KG-1細(xì)胞、HuT 78細(xì)胞、NCIH1792細(xì)胞 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 B6Tert-1 Cell:人滋養(yǎng)層細(xì)胞系 細(xì)胞凍存基本方法:1.細(xì)胞:選對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,收集細(xì)胞24小時(shí)前換液一次。2.計(jì)數(shù):按常規(guī)方法把細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù),令細(xì)胞密度達(dá)5×10(6)/ml,離心去上清,吸入離心管中。3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。4.分裝:分裝入無(wú)菌安剖中,每安剖加1.5毫升細(xì)胞懸液。5.封口:用塑料安剖時(shí)擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細(xì)檢查,定要封嚴(yán),必要時(shí)可浸入藍(lán)色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時(shí)因受熱發(fā)生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細(xì)胞名稱,凍存日期,以便日后查找。細(xì)胞株(系)的使用,為醫(yī)學(xué)研究和測(cè)試工作帶來(lái)了極大的方便。但細(xì)胞的傳代是有限制的,長(zhǎng)期連續(xù)傳代的細(xì)胞,不僅消耗大量的人力和物力,而且細(xì)胞的生長(zhǎng)與形態(tài)等會(huì)有一定退變或轉(zhuǎn)化,因而細(xì)胞失去原有的遺傳特性,有時(shí)還會(huì)由于細(xì)胞污染而造成傳代中斷,種子丟失。因此,在實(shí)際工作中常需凍存一定數(shù)量的細(xì)胞,以備替換使用。細(xì)胞冷凍與復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng) 室的常規(guī)工作和通用技術(shù)。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見問(wèn)題總結(jié):1)一般客戶拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細(xì)胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過(guò)80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過(guò)80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。細(xì)胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細(xì)胞多久能到,是寄凍存的細(xì)胞還是復(fù)蘇好的細(xì)胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細(xì)胞前請(qǐng)確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細(xì)胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無(wú)法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 SW-1463細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HO1-N-1細(xì)胞、MCF.7細(xì)胞、BEAS2B細(xì)胞 COLO-394細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H810細(xì)胞、T2 (174 x CEM.T2)細(xì)胞、NBL-12細(xì)胞 NCIH520細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUDHL-16細(xì)胞、A 172細(xì)胞、DC2.4細(xì)胞 MDA-MB-468-RED細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM346細(xì)胞、Medical Research Council cell strain-5細(xì)胞、Me Wo細(xì)胞 OCI-AML4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-94細(xì)胞、F36P細(xì)胞、Colo320細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁 B6Tert-1 Cell:人滋養(yǎng)層細(xì)胞系 細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的問(wèn)題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過(guò)程沒(méi)有問(wèn)題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問(wèn)題,還有確信拿來(lái)的細(xì)胞沒(méi)問(wèn)題。總結(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實(shí)際上復(fù)蘇出問(wèn)題的可能非常小,因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單,而且死板。1、你凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過(guò)長(zhǎng),這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個(gè)問(wèn)題,太長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會(huì)死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過(guò)7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻,這個(gè)有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個(gè)事情,因?yàn)檫@個(gè)東西流程長(zhǎng)。6、如果你細(xì)胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個(gè)角度講建議去除離心這步。7、你的細(xì)胞在凍存前是否過(guò)密。還有,不贊成孵箱污染這個(gè)概念的,所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話,這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因?yàn)榉跸錈o(wú)論你如何處理都有大量的細(xì)菌,問(wèn)題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問(wèn)題,這個(gè)很重要,不能靠猜,否則你就有可能細(xì)胞養(yǎng)絕最后換課題,這個(gè)見得太多了,別不當(dāng)會(huì)事。 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說(shuō)明書 H2052細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:K-562細(xì)胞、P560細(xì)胞、L cells (TK-)細(xì)胞 CAL27細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA MB 231細(xì)胞、R.K.13細(xì)胞、TO175T細(xì)胞 P3.NS-1/1.Ag4.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BJAB細(xì)胞、SKUT1細(xì)胞、B16F1細(xì)胞 EoL-1-cell細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BRL細(xì)胞、H-1048細(xì)胞、SPCA-1細(xì)胞 U87細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PANC1005細(xì)胞、ECC10細(xì)胞、RCM1細(xì)胞 MDA-MB-415細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI.H23細(xì)胞、QSG7701細(xì)胞、H-1930細(xì)胞 PK 15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDCC-MSB1細(xì)胞、HCC95細(xì)胞、Panc 3.27細(xì)胞 B6Tert-1 Cell:人滋養(yǎng)層細(xì)胞系 ARO 81-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FHCRC-11細(xì)胞、MV-3細(xì)胞、CNE-2Z細(xì)胞 TE8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RASMC細(xì)胞、NKM-1細(xì)胞、PLA-801D細(xì)胞 Lu-99A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3X63 Ag8細(xì)胞、HPAF II細(xì)胞、CHO K1細(xì)胞 NCIADR.RES細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUNE 1細(xì)胞、SU-DHL-5細(xì)胞、3LL細(xì)胞 3T3-Swiss細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK Mel 24細(xì)胞、LIPF155C細(xì)胞、DMS-79細(xì)胞 HNE2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKN-AS細(xì)胞、Panc-05.04細(xì)胞、HPAEC細(xì)胞 HRIF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CV-1細(xì)胞、Madin-Darby Bovine Kidney細(xì)胞、MCF-10A細(xì)胞 RKN細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tu177細(xì)胞、OE33細(xì)胞、ECV304細(xì)胞 NBL-S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CZ-1細(xì)胞、H-1395細(xì)胞、U-373MG ATCC細(xì)胞 NBL-S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CZ-1細(xì)胞、H-1395細(xì)胞、U-373MG ATCC細(xì)胞 OCI/AML-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC94細(xì)胞、SKNFI細(xì)胞、HC11細(xì)胞 CNE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JB6Cl30細(xì)胞、SP-2細(xì)胞、MC26細(xì)胞 HMC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ML-2細(xì)胞、NCI-H711細(xì)胞、H35 Reuber細(xì)胞 SkMel31細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CWR22R-V1細(xì)胞、LS-174細(xì)胞、32D:cl3細(xì)胞 293-EBNA1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NS-1-Ag4-1細(xì)胞、RAW264.7細(xì)胞、Blotchy fibroblast-11細(xì)胞 Porcine Kidney-15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PLA801C細(xì)胞、LS-1034細(xì)胞、8305C_1細(xì)胞 H748細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MJ細(xì)胞、H-2009細(xì)胞、CAL 27細(xì)胞 NCIH1666細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDCK (NBL-2)細(xì)胞、SUDHL10細(xì)胞、Murine Lung Epithelial-12細(xì)胞 HEL92.1.7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MLMEC細(xì)胞、MDA157細(xì)胞、GM05372細(xì)胞 Panc 4.03細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WEHI-3細(xì)胞、RTE細(xì)胞、NCI-H2452細(xì)胞 SR-786細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI/AML-4細(xì)胞、EFM-192B細(xì)胞、SK-RC-52細(xì)胞 Case 3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2106細(xì)胞、BGC823細(xì)胞、H1666細(xì)胞 H-1355細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCC-HIE-2細(xì)胞、BERH-2細(xì)胞、UCLA NPA871細(xì)胞 OVCAR 4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TSCC1細(xì)胞、HIEC細(xì)胞、NPA-87細(xì)胞 Hs445細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-RC-39細(xì)胞、CAL85-1細(xì)胞、CEM-C1細(xì)胞 NCI-H165細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H69C細(xì)胞、MC-4細(xì)胞、HPF細(xì)胞 H-23細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L 363細(xì)胞、SK-N-BE(2C)細(xì)胞、NCI-H187細(xì)胞 AtT20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U138MG細(xì)胞、HS-766T細(xì)胞、PA12細(xì)胞 OCI/AML-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IGR.OV1細(xì)胞、PTK 2細(xì)胞、COLO 16細(xì)胞 PT67細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CWR22Rv1細(xì)胞、OCILY3細(xì)胞、CCD841CoN細(xì)胞 SNU-251細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NSC-34細(xì)胞、751-NA-15細(xì)胞、CPA 47細(xì)胞 YD-38細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H64細(xì)胞、293-FT細(xì)胞、MS 751細(xì)胞 UPCI-SCC-090細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U20-S細(xì)胞、R3/1細(xì)胞、OVMANA細(xì)胞 COV-362細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BAEC細(xì)胞、MKN45細(xì)胞、PLB 985細(xì)胞 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