"PZ-HPV-7 Cell:人前列腺上皮細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長:貼壁 細(xì)胞背景資料:前列腺上皮細(xì)胞;HPV18轉(zhuǎn)化;男性 H-2030細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCIAML4細(xì)胞、HCC827細(xì)胞、H-128細(xì)胞 SKNBE(1)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WERI-Rb 1細(xì)胞、HCC-1588細(xì)胞、NBL_S細(xì)胞 OCI-AML-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS-294T細(xì)胞、MHCC-97細(xì)胞、UMUC3細(xì)胞 JHH2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS 153細(xì)胞、KCL22細(xì)胞、675T細(xì)胞 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 PZ-HPV-7 Cell:人前列腺上皮細(xì)胞系 如何把細(xì)胞養(yǎng)的形態(tài)更好更漂亮。1.不同的細(xì)胞,喜歡的環(huán)境是不一樣的。這個(gè)不僅僅是說培養(yǎng)基的不同,還有就是細(xì)胞生長的空間密度問題。有一些細(xì)胞是數(shù)量多一點(diǎn)比較好生長,生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細(xì)胞。譬如內(nèi)皮細(xì)胞。而有一些是細(xì)胞是數(shù)量少一點(diǎn)細(xì)胞狀態(tài)會(huì)生長的比較好,譬如巨噬細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞。尤其是巨噬細(xì)胞,生長速度非常得快,貼壁速度很快,所以傳代時(shí)就應(yīng)該留很少量的細(xì)胞,這樣細(xì)胞狀態(tài)會(huì)比較好。并且巨噬細(xì)胞比較喜歡扎堆生長,而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時(shí)候,細(xì)胞形態(tài)基本上就會(huì)差了,老化的會(huì)比較多,對(duì)后期實(shí)驗(yàn)結(jié)果是不好的。所以在養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候應(yīng)該摸索該細(xì)胞喜歡的生長空間密度問題。2.對(duì)于有些人總是會(huì)遇到養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)怎么都不好的問題。這個(gè)其實(shí)是有一個(gè)方法可以改善的。對(duì)于貼壁細(xì)胞,如果細(xì)胞形態(tài)不好,(或者細(xì)胞形態(tài)不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時(shí)候進(jìn)行如下操作:首先,倒掉舊的培養(yǎng)基,加入3ml新的培養(yǎng)基(有無血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養(yǎng)基,進(jìn)行預(yù)吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過一遍,然后吸走。這時(shí)侯再開始正式的消化、吹打。(巨噬細(xì)胞我們只吹打,不消化的);其次,把吹打下來的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),按時(shí)間點(diǎn)觀察細(xì)胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個(gè)時(shí)間點(diǎn),已經(jīng)有部分細(xì)胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺(tái),底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基,加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細(xì)胞生長情況以及形態(tài)。我稱之為“二傳”。呵呵。如果一次效果還不理想,可重復(fù)多次。直到找到細(xì)胞完美形態(tài)。其中要注意,結(jié)合細(xì)胞喜歡的生長情況。喜歡多一點(diǎn)數(shù)量長得好的細(xì)胞你就等貼壁細(xì)胞比較多點(diǎn)的時(shí)候再傳。反之亦然。3.關(guān)于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入培養(yǎng)基的量的問題。這個(gè)是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細(xì)胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml,大方瓶14ml的。有些細(xì)胞反而是培養(yǎng)基少一點(diǎn)相反細(xì)胞形態(tài)會(huì)長得比較好。(可能也是競(jìng)爭(zhēng)很大,有優(yōu)勝劣汰吧。呵呵。)對(duì)于生長速度快的細(xì)胞,易生長的細(xì)胞加少一點(diǎn)培養(yǎng)基細(xì)胞形態(tài)會(huì)更好。但是要注意換液掌握。4.關(guān)于選擇培養(yǎng)瓶的問題。個(gè)人發(fā)現(xiàn)生長速度快的細(xì)胞在玻璃瓶?jī)?nèi)生長的狀態(tài)會(huì)比一次性相對(duì)好一些。而對(duì)于同一種細(xì)胞,在其生長旺盛快速的時(shí)期在玻璃瓶?jī)?nèi)的生長狀態(tài)也比內(nèi)好。這可能是因?yàn)楸炔A扛菀踪N壁。生長速度快的細(xì)胞在這種相對(duì)“更安逸”的環(huán)境里反而長得狀態(tài)不如玻璃瓶好。所以對(duì)于生長速度慢的細(xì)胞如果想要更漂亮的細(xì)胞狀態(tài),比玻璃瓶會(huì)好,對(duì)于生長速度慢的細(xì)胞,玻璃瓶則會(huì)更好。同樣,對(duì)于同一種細(xì)胞,在其生長速度慢的時(shí)候,會(huì)好一點(diǎn),比如剛剛復(fù)蘇的時(shí)候,或者原代培養(yǎng)的時(shí)候。而在其生長旺盛的時(shí)候,玻璃瓶則相對(duì)會(huì)好一點(diǎn)。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 常見細(xì)胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長會(huì)產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因?yàn)楹窟^低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞營養(yǎng)不足,過高則會(huì)破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定,或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間,按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進(jìn)行更換;3)購買的復(fù)蘇細(xì)胞,為何會(huì)有脫落?因?yàn)檫\(yùn)輸?shù)倪^程中不可避免的會(huì)有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 KM-12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:T8細(xì)胞、MZCRC1細(xì)胞、U-251 MG細(xì)胞 PL-11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PA1細(xì)胞、RINm-5F細(xì)胞、B 95.8細(xì)胞 SW-1271細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HeLa/S3細(xì)胞、HEK293T/17細(xì)胞、DLD 1細(xì)胞 Neukoplast細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HKF細(xì)胞、Laboratory of Allergic Diseases 2細(xì)胞、TOV21G細(xì)胞 BEL-7404細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CO115細(xì)胞、RPMI.8226細(xì)胞、High5細(xì)胞 細(xì)胞生長特性:貼壁 PZ-HPV-7 Cell:人前列腺上皮細(xì)胞系 正確的細(xì)胞復(fù)蘇需知事項(xiàng):細(xì)胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯(cuò),就是記得到時(shí)間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細(xì)胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細(xì)胞:補(bǔ)充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞,計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細(xì)胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每?jī)龃婀懿怀^1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個(gè)最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細(xì)胞,以免其中的一個(gè)液氮罐出現(xiàn)問題!細(xì)胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點(diǎn):當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細(xì)胞時(shí),有可能會(huì)出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護(hù)面罩和防護(hù)服十分必要;其實(shí),細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn),不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié),不然,也不一定會(huì)盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對(duì)細(xì)胞的損傷等等。 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 MC3T3-E1 Subclone 14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3/X63/Ag8.653細(xì)胞、FLS細(xì)胞、DMS 53細(xì)胞 BC-3-H-I細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHP126細(xì)胞、Lewis Lung細(xì)胞、NBL-3細(xì)胞 OCI AML5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1693細(xì)胞、Hs-688A-T細(xì)胞、X63Ag8.653細(xì)胞 Ej138細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hi5細(xì)胞、MB-49細(xì)胞、G422細(xì)胞 MDA435細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NUGC-3細(xì)胞、MFE280細(xì)胞、JEG3細(xì)胞 EA hy 926細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM00637B細(xì)胞、SUDHL-6細(xì)胞、HS-68細(xì)胞 U373 MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:D-341細(xì)胞、NUGC-4細(xì)胞、H-1395細(xì)胞 PZ-HPV-7 Cell:人前列腺上皮細(xì)胞系 GM 2132細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM04154B細(xì)胞、GI-1細(xì)胞、EFM-192A細(xì)胞 TE354T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A2008細(xì)胞、RPMI6666細(xì)胞、PANC 813細(xì)胞 D324細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IMR32細(xì)胞、NCI-H211細(xì)胞、RMC-1細(xì)胞 MC3T3-L1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C-Li-7細(xì)胞、BV2細(xì)胞、MES-SA-Dx5細(xì)胞 RPE-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Hepatocyte Line 5細(xì)胞、H-1793細(xì)胞、HFLS細(xì)胞 SKOV-433細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1703細(xì)胞、Hs 729.T細(xì)胞、MC-26細(xì)胞 HuH-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NIH:OVCAR-8細(xì)胞、DHL10細(xì)胞、NCI-H2291細(xì)胞 CCD18Co細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HLE B-3細(xì)胞、NCI-H1385細(xì)胞、HBL 100細(xì)胞 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