"OK Cell:負(fù)鼠腎細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長:貼壁 細(xì)胞背景資料:腎 KPL-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM2219C細(xì)胞、WC00044細(xì)胞、Hs 940.T細(xì)胞 NCI747細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:N87細(xì)胞、KYSE0520細(xì)胞、NCI-H735細(xì)胞 SK-N-SH細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Moorfields/Institute of Ophthalmology-Muller 1細(xì)胞、DMS-79細(xì)胞、STC-1細(xì)胞 BN-CL2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-1271細(xì)胞、OCI/AML-4細(xì)胞、Calu-3細(xì)胞 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 OK Cell:負(fù)鼠腎細(xì)胞系 細(xì)胞凍存基本方法:1.細(xì)胞:選對數(shù)生長期細(xì)胞,收集細(xì)胞24小時(shí)前換液一次。2.計(jì)數(shù):按常規(guī)方法把細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù),令細(xì)胞密度達(dá)5×10(6)/ml,離心去上清,吸入離心管中。3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。4.分裝:分裝入無菌安剖中,每安剖加1.5毫升細(xì)胞懸液。5.封口:用塑料安剖時(shí)擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細(xì)檢查,定要封嚴(yán),必要時(shí)可浸入藍(lán)色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時(shí)因受熱發(fā)生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細(xì)胞名稱,凍存日期,以便日后查找。細(xì)胞株(系)的使用,為醫(yī)學(xué)研究和測試工作帶來了極大的方便。但細(xì)胞的傳代是有限制的,長期連續(xù)傳代的細(xì)胞,不僅消耗大量的人力和物力,而且細(xì)胞的生長與形態(tài)等會(huì)有一定退變或轉(zhuǎn)化,因而細(xì)胞失去原有的遺傳特性,有時(shí)還會(huì)由于細(xì)胞污染而造成傳代中斷,種子丟失。因此,在實(shí)際工作中常需凍存一定數(shù)量的細(xì)胞,以備替換使用。細(xì)胞冷凍與復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng) 室的常規(guī)工作和通用技術(shù)。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 為什么培養(yǎng)的細(xì)胞要及時(shí)傳代?體外培養(yǎng)的細(xì)胞大多具有生長接觸抑制的特性,也就是說當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時(shí)候,它就會(huì)停止生長,及時(shí)傳代后,細(xì)胞的生長得以繼續(xù)。培養(yǎng)細(xì)胞生長減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些?可能的原因有:更換了不同的培養(yǎng)液或血清;培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷眈肢或生長因子等耗盡或缺乏或己被破壞;培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;試劑保存不當(dāng);比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清等,找出其它可能的原因。解決辦法:增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度;讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;換入新鮮配制培養(yǎng)液;補(bǔ)加谷酷肢或生長因子等;用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,去棄培養(yǎng)物,或用抗生素除菌;血清需保存在5℃到20℃; 培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存,并在2周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物,檢測支原體。冷凍管應(yīng)如何解凍?取出冷凍管后,須立即放入37℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1-2分鐘內(nèi)大部分融化,特別注意,需殘留一小塊冰塊,就可拿到超凈工作臺(tái)操作細(xì)胞,用75%酒精消毒凍存管,用新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí),必須注意安全,預(yù)防冷凍管爆裂。 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 HCCC9810細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 840.T細(xì)胞、MEL細(xì)胞、Human Lung Microvascular Endothelial Cell line-5a細(xì)胞 SCLC-21H細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SPCA-1細(xì)胞、NCIH2107細(xì)胞、231-luc細(xì)胞 A172細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-Ly 8細(xì)胞、SN12C-PM6細(xì)胞、RPMI-7951細(xì)胞 H-2286細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WERI Rb-1細(xì)胞、LSC-1細(xì)胞、Hs-578-T細(xì)胞 SKO-007細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC1833細(xì)胞、NBL-5細(xì)胞、HKBML細(xì)胞 細(xì)胞生長特性:貼壁 OK Cell:負(fù)鼠腎細(xì)胞系 細(xì)胞凍存復(fù)蘇材料與方法步驟:常用的細(xì)胞冷凍貯存器為液氮貯存器,規(guī)格有35L和50L兩種。使用時(shí)要注意以下幾點(diǎn):(1)一般兩周需充液氮一次,至少一個(gè)月充氮一次。液氮溫度達(dá)-196℃,使用時(shí)注意勿讓液氮濺到皮膚上,以免引起凍傷。(2)液氮容器為雙層結(jié)構(gòu),中間為真空層,瓶口有雙層焊接處,應(yīng)防止焊接部裂開。(3)在裝入液氮時(shí),要注意緩慢小心,并用厚紙卷筒或特制漏斗作引導(dǎo),使液氮直達(dá)瓶底,如有專用液氮灌注裝置則更好。若為初次使用,加液氮時(shí)更要緩慢,以免溫度驟降而使容器損壞。細(xì)胞凍存時(shí)常備的材料有:0.25%胰蛋白酶,含10%~20%的血清培養(yǎng)液,DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(121°C蒸氣高壓消毒),2mL安瓿(或?qū)S眉?xì)胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為:(1)選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞,在凍存前一天換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng) 液去掉,用0.25%胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶,加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘)。(2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基,于4℃預(yù)冷15分鐘后,逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,細(xì)胞濃度為3×106~1×107/mL之間。(3)將上述細(xì)胞分裝于安瓿或?qū)S美鋬鏊芰瞎苤?,安瓿裝1~1.5mL在火焰噴燈上封口,封口處要完全封閉,圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊,并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期,同時(shí)作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù))。(4)將裝好細(xì)胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過夜,次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟:先將安瓿置入4℃冰箱中2~3小時(shí),再移至冰箱冷凍室內(nèi)3~4小時(shí),再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時(shí),最后沉入液氮中。細(xì)胞凍存在液氮中可以長期保存,但為妥善起見,凍存半年后,取出一只安瓿細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),觀察生長情況,然后再繼續(xù)凍存。 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 293T/17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU-DHL-16細(xì)胞、IPEC1細(xì)胞、H1693細(xì)胞 A10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-MEL2細(xì)胞、alphaTC clone 6細(xì)胞、OV90細(xì)胞 H-929細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C3H/10T1/2 CL8細(xì)胞、ZR751細(xì)胞、NCI-H661細(xì)胞 SU-DHL-16細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RH8994細(xì)胞、NPC-TW 01細(xì)胞、H184A1細(xì)胞 HEC-1A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Oka-C1細(xì)胞、SK Col 1細(xì)胞、OEC33細(xì)胞 SF 295細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB 453細(xì)胞、SW-1116細(xì)胞、HuP-T3細(xì)胞 WM 2664細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-9細(xì)胞、SK-MEL24細(xì)胞、MV411細(xì)胞 OK Cell:負(fù)鼠腎細(xì)胞系 293細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPA87細(xì)胞、HT-144細(xì)胞、A875細(xì)胞 HOPC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UACC-893細(xì)胞、Normal Rat Kidney細(xì)胞、H209細(xì)胞 HNEpC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Jurkat-77細(xì)胞、M-NFS-60細(xì)胞、C4-I細(xì)胞 COLO679細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EPC細(xì)胞、Hs-940細(xì)胞、SCH細(xì)胞 TC-1[JHU-1]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI/AML5細(xì)胞、BEL/FU細(xì)胞、MLA 144細(xì)胞 GDM-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCF7-GFP細(xì)胞、B16 melanoma F10細(xì)胞、UWB1289細(xì)胞 SW-1463細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HO1-N-1細(xì)胞、MCF.7細(xì)胞、BEAS2B細(xì)胞 F98細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC-CAR細(xì)胞、YES 2細(xì)胞、YAC-1細(xì)胞 F81細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UPCI-SCC-90細(xì)胞、Natural Killer-92細(xì)胞、BHK21細(xì)胞 A498細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-196細(xì)胞、C2-C12細(xì)胞、OSC19細(xì)胞 NCI-H1648細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CT26-clone 25細(xì)胞、UPCI:SCC154細(xì)胞、MSTO-211H細(xì)胞 32D/cl3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H4-II-E-C3細(xì)胞、Hs746-T細(xì)胞、EM-3細(xì)胞 HTR8svn細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-9204細(xì)胞、Panc3_27細(xì)胞、HT-144細(xì)胞 H295R-S1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AU565細(xì)胞、AN3-CA細(xì)胞、HEK-2細(xì)胞 DSL-6A/C1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR-420細(xì)胞、MDA175細(xì)胞、A427細(xì)胞 SGC-7901/DDP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD-841CoTr細(xì)胞、DHL5細(xì)胞、LLCPK1細(xì)胞 Ramos (RA 1)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:hESC細(xì)胞、K7M2 wt細(xì)胞、SW-1990細(xì)胞 HCC-70細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Swiss/3T3細(xì)胞、HBL100細(xì)胞、C8D1A細(xì)胞 THP1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBVP細(xì)胞、WM115-mel細(xì)胞、MUTZ3細(xì)胞 HCT_116細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RT4-D6P2T細(xì)胞、Hs-675-T細(xì)胞、WB F344細(xì)胞 ketr 3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HTSMC細(xì)胞、Granta-519細(xì)胞、OVCAR 4細(xì)胞 OEC19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE671細(xì)胞、PE/CA-PJ34細(xì)胞、Mia PACA 2細(xì)胞 C32 [Human melanoma]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:T/GHA-VSMC細(xì)胞、WC00097細(xì)胞、SCC-15細(xì)胞 253J-Bladder-V細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LA 4細(xì)胞、KMST-6細(xì)胞、PAI細(xì)胞 GM15452細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 343.T細(xì)胞、Human Hepatocyte Line 5細(xì)胞、COLO 320細(xì)胞 ECC 12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GC-2細(xì)胞、J774細(xì)胞、3T3 J2細(xì)胞 NCI-H460細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK Mel28細(xì)胞、NCI-H1793細(xì)胞、SW 480細(xì)胞 EL 4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L5178Y細(xì)胞、Hs 294T細(xì)胞、HuH-28細(xì)胞 MUTZ3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero-76細(xì)胞、HCC202細(xì)胞、HUCCT1細(xì)胞 Human fetal lung fibroblast 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI AML3細(xì)胞、LC-1 sq細(xì)胞、WM239細(xì)胞 KYSE 510細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1105細(xì)胞、RK 13細(xì)胞、Hs737T細(xì)胞 C17.2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U 138 MG細(xì)胞、Eca109細(xì)胞、U266S細(xì)胞 NCI-SNU-407細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAMA1細(xì)胞、UC-3細(xì)胞、H-2009細(xì)胞 NCI-SNU-387細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Scott and White No. 13細(xì)胞、SK-BR-3細(xì)胞、Y1細(xì)胞 LS513細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI Ly1細(xì)胞、A-10細(xì)胞、NCI-H102細(xì)胞 KATOIII細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-841細(xì)胞、Z310細(xì)胞、NIH:OVCAR-4細(xì)胞 BHK-21細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:QGP 1細(xì)胞、U266-B1細(xì)胞、SUM-190細(xì)胞 SCL-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BNCL-2細(xì)胞、LNCaP subline C4-2細(xì)胞、PIG3細(xì)胞 BTI-TN5B1-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HASMC細(xì)胞、NTera 2/cl.D1細(xì)胞、Human Pancreatic Duct Epithelial細(xì)胞 MIA PaCa-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H82細(xì)胞、SP2細(xì)胞、DoTc2-4510細(xì)胞 T. T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Experimental Mammary Tumour-6細(xì)胞、FDC-P1細(xì)胞、HSC-5 [Human skin squamous cell carcinoma]細(xì)胞 RS4:11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC-3/M細(xì)胞、Ramos (RA 1)細(xì)胞、COLO-394細(xì)胞 ATDC5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L23/P細(xì)胞、RGC-6細(xì)胞、Calf Pulmonary Artery 47細(xì)胞 OK Cell:負(fù)鼠腎細(xì)胞系 H-2444細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL85-1細(xì)胞、PA-1細(xì)胞、NCI-H1341細(xì)胞 OCI-AML-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PSN1細(xì)胞、DMS79細(xì)胞、KLE細(xì)胞 NR8383.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH520細(xì)胞、COC1/CDDP細(xì)胞、A2058細(xì)胞 Balb/c 3T3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ACCM細(xì)胞、NRK細(xì)胞、TOV-21G細(xì)胞 GM05372E細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU423細(xì)胞、NBL-7細(xì)胞、L5178YR細(xì)胞 SU-DHL-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DU-145細(xì)胞、H28細(xì)胞、A375-MEL細(xì)胞 COLO-357細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU449細(xì)胞、S91細(xì)胞、MM1.S細(xì)胞 Lieming Xu-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC細(xì)胞、H810細(xì)胞、U251n細(xì)胞 SF295細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2081細(xì)胞、Lu-165細(xì)胞、PK136細(xì)胞 H1618細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-12細(xì)胞、TCMK-1細(xì)胞、H810細(xì)胞 H-711細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM03570細(xì)胞、SNK1細(xì)胞、NIT-1細(xì)胞 LoVo細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE 270細(xì)胞、MFE 296細(xì)胞、SK-MEL-2細(xì)胞 "
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