"253J Cell:人膀胱癌細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 細(xì)胞背景資料:膀胱癌;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;男性 NCIH226細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-524細(xì)胞、LTPA細(xì)胞、COLO320DM細(xì)胞 LA795細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero from pool #76細(xì)胞、HLF-a細(xì)胞、OVCAR-5細(xì)胞 COLO824細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U87MG細(xì)胞、G422細(xì)胞、H146細(xì)胞 EFM-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKMES細(xì)胞、RD-ES細(xì)胞、HT-115細(xì)胞 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 253J Cell:人膀胱癌細(xì)胞系 細(xì)胞凍存基本方法:1.細(xì)胞:選對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,收集細(xì)胞24小時(shí)前換液一次。2.計(jì)數(shù):按常規(guī)方法把細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù),令細(xì)胞密度達(dá)5×10(6)/ml,離心去上清,吸入離心管中。3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。4.分裝:分裝入無(wú)菌安剖中,每安剖加1.5毫升細(xì)胞懸液。5.封口:用塑料安剖時(shí)擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細(xì)檢查,定要封嚴(yán),必要時(shí)可浸入藍(lán)色液中觀察,為安全起見(jiàn),把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時(shí)因受熱發(fā)生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細(xì)胞名稱(chēng),凍存日期,以便日后查找。細(xì)胞株(系)的使用,為醫(yī)學(xué)研究和測(cè)試工作帶來(lái)了極大的方便。但細(xì)胞的傳代是有限制的,長(zhǎng)期連續(xù)傳代的細(xì)胞,不僅消耗大量的人力和物力,而且細(xì)胞的生長(zhǎng)與形態(tài)等會(huì)有一定退變或轉(zhuǎn)化,因而細(xì)胞失去原有的遺傳特性,有時(shí)還會(huì)由于細(xì)胞污染而造成傳代中斷,種子丟失。因此,在實(shí)際工作中常需凍存一定數(shù)量的細(xì)胞,以備替換使用。細(xì)胞冷凍與復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng) 室的常規(guī)工作和通用技術(shù)。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)問(wèn)題總結(jié):1)一般客戶(hù)拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?客戶(hù)收到細(xì)胞后先不開(kāi)蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開(kāi)封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過(guò)80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過(guò)80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。細(xì)胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細(xì)胞多久能到,是寄凍存的細(xì)胞還是復(fù)蘇好的細(xì)胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細(xì)胞前請(qǐng)確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細(xì)胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無(wú)法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類(lèi)?不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 SKG3A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IOSE29細(xì)胞、B-3細(xì)胞、SW-48細(xì)胞 KCL22S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-10細(xì)胞、SHG-44細(xì)胞、SK UT 1細(xì)胞 I90細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MES 13細(xì)胞、SW1463細(xì)胞、INS-1細(xì)胞 RPMI-8226S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCSMC細(xì)胞、C32 mel細(xì)胞、HT115細(xì)胞 HCFB(HCF)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WEHI-231細(xì)胞、MG63細(xì)胞、OVCAR 420細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁 253J Cell:人膀胱癌細(xì)胞系 細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的問(wèn)題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過(guò)程沒(méi)有問(wèn)題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問(wèn)題,還有確信拿來(lái)的細(xì)胞沒(méi)問(wèn)題。總結(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實(shí)際上復(fù)蘇出問(wèn)題的可能非常小,因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單,而且死板。1、你凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過(guò)長(zhǎng),這是一般人所注意不到的,即使書(shū)上也不講這個(gè)問(wèn)題,太長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會(huì)死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過(guò)7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻,這個(gè)有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個(gè)事情,因?yàn)檫@個(gè)東西流程長(zhǎng)。6、如果你細(xì)胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個(gè)角度講建議去除離心這步。7、你的細(xì)胞在凍存前是否過(guò)密。還有,不贊成孵箱污染這個(gè)概念的,所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話,這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因?yàn)榉跸錈o(wú)論你如何處理都有大量的細(xì)菌,問(wèn)題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問(wèn)題,這個(gè)很重要,不能靠猜,否則你就有可能細(xì)胞養(yǎng)絕最后換課題,這個(gè)見(jiàn)得太多了,別不當(dāng)會(huì)事。 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū) REC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JROECL21細(xì)胞、SUD6細(xì)胞、C4-2B細(xì)胞 FDCP1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RT4P細(xì)胞、CCRF/CEM細(xì)胞、COR-L23細(xì)胞 MDA-MB-435細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H28細(xì)胞、3T3 L1細(xì)胞、HEK 293FT細(xì)胞 ssMCF-7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-C1細(xì)胞、NCI.H522細(xì)胞、AZ 521細(xì)胞 BNL 1ME A.7R.1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC2218細(xì)胞、SW 1573細(xì)胞、COLO 684細(xì)胞 GM07404A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU407細(xì)胞、HTori-3細(xì)胞、CTLL(2)細(xì)胞 H1755細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc_04_03細(xì)胞、ME180細(xì)胞、MDAPCa-2b細(xì)胞 253J Cell:人膀胱癌細(xì)胞系 DMS-153細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2052_MM細(xì)胞、OV 2008細(xì)胞、BJAB細(xì)胞 HNE1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RINm5F細(xì)胞、TE-14細(xì)胞、AX-Mel細(xì)胞 H1693細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC-14細(xì)胞、QGY7703細(xì)胞、NE1-E6E7細(xì)胞 RPMI #1846細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KE37細(xì)胞、HSC4細(xì)胞、HS578T細(xì)胞 MA-c細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H69/P細(xì)胞、UMUC-3細(xì)胞、Alexander cells細(xì)胞 SKNEP1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PG-LH7細(xì)胞、BV173細(xì)胞、HT3細(xì)胞 WERI Rb-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LY細(xì)胞、SW1116細(xì)胞、U-343 MG細(xì)胞 NBLS細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEF細(xì)胞、RT-BM 1細(xì)胞、RK 13細(xì)胞 ARPE-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CoCL3細(xì)胞、TMK-1細(xì)胞、MDA 1386細(xì)胞 ARPE-19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CoCL3細(xì)胞、TMK-1細(xì)胞、MDA 1386細(xì)胞 HCM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK-AD293細(xì)胞、AG 9細(xì)胞、WIL2-S細(xì)胞 87 MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs888 Lu細(xì)胞、KU.812細(xì)胞、HSC-T6細(xì)胞 U118MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2141細(xì)胞、TCCSUP細(xì)胞、SNU-878細(xì)胞 RIN Cl-5F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNB19細(xì)胞、HCC9204細(xì)胞、GM15452細(xì)胞 CMT-167細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCLC21H細(xì)胞、Hs-578-T細(xì)胞、SU8686細(xì)胞 LLC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JHH-7細(xì)胞、MDA-MB435細(xì)胞、JROECL33細(xì)胞 HOP 62細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU886細(xì)胞、NCI-SNU-16細(xì)胞、H-1105細(xì)胞 50.B1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TOV21G細(xì)胞、WIL2 S細(xì)胞、SW579細(xì)胞 MDA330細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Pt K2細(xì)胞、PG [Human lung carcinoma]細(xì)胞、ROS-17/2.8細(xì)胞 AZ 521細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A72細(xì)胞、H1651細(xì)胞、U-343-MG細(xì)胞 293-FT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3-NS1/1Ag 4.1細(xì)胞、H-2066細(xì)胞、LADMAC細(xì)胞 GM00637B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Neukoplast細(xì)胞、L-M(TK-)細(xì)胞、alphaTC1 Clone 6細(xì)胞 OV 2008細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FOXNY細(xì)胞、HFF-1細(xì)胞、NCI-H78細(xì)胞 IA-LM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD-19Lu細(xì)胞、H2009細(xì)胞、H-220細(xì)胞 FU-MMT-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KG-1a細(xì)胞、H-522細(xì)胞、SK-Mel 2細(xì)胞 SK Col 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KOSC-2細(xì)胞、NCIH2228細(xì)胞、NCI H929細(xì)胞 NCIH2081細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:74Int細(xì)胞、HPAFII細(xì)胞、Homo sapiens No. 578, breast cells細(xì)胞 TKB1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Anip[973]細(xì)胞、GM05862細(xì)胞、NCI-H1694細(xì)胞 TSCC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-756細(xì)胞、M4e細(xì)胞、HuP-T4細(xì)胞 ME-1 [Human leukemia]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Murine Thymic Epithelial Cell line 1細(xì)胞、U373MG細(xì)胞、NCIH2591細(xì)胞 ChaGo K-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UCH1細(xì)胞、HIT clone T15細(xì)胞、KYSE 510細(xì)胞 MDA-MB-330細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-226AR1細(xì)胞、SNU-216細(xì)胞、HLE B-3細(xì)胞 Ca759細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:130T細(xì)胞、C3H10T1/2CL8細(xì)胞、OAC-P4C細(xì)胞 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