"CAL-27 Cell:人舌鱗狀上皮細(xì)胞癌細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 細(xì)胞背景資料:該細(xì)胞1982年由J. Gioanni建系,源自一位56歲白人男性的舌頭中倍的病變部位,角蛋白強(qiáng)陽(yáng)性 HGMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MFE 296細(xì)胞、DSL-6A/C1細(xì)胞、OVCAR-8細(xì)胞 RPMI 2650細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JIMT細(xì)胞、HuLEC-5a細(xì)胞、H-735細(xì)胞 Sarcoma OSteogenic-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:8305C_1細(xì)胞、MZ-CRC-1細(xì)胞、MC116細(xì)胞 NCTC clone 1469細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 729T細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-27細(xì)胞、WM 239細(xì)胞 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 CAL-27 Cell:人舌鱗狀上皮細(xì)胞癌細(xì)胞系 細(xì)胞消化過程總結(jié):其實(shí)絕大部分細(xì)胞消化的時(shí)候是只要用胰酶潤(rùn)洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留的那些無法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞(絕大部分1min不到)。對(duì)于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞,連續(xù)這樣傳代,對(duì)細(xì)胞傷害很大。簡(jiǎn)單的程序是PBS潤(rùn)洗吸去,胰酶潤(rùn)洗吸去,然后37度消化。2,什么算是消化好了呢?不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層,只要能移動(dòng)了,多半呈沙壯移動(dòng),其實(shí)已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成完全分離細(xì)胞,這是沒有必要的。一般能移動(dòng)了,說明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細(xì)胞已經(jīng)獨(dú)立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個(gè)時(shí)候應(yīng)該停止消化,不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細(xì)胞就是完全成單個(gè)細(xì)胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會(huì)聚集,這個(gè)是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,尤其是腫瘤細(xì)胞的一個(gè)特性,無論死活的細(xì)胞都是如此,你可以嘗試,準(zhǔn)備100%的單個(gè)細(xì)胞懸液,貼壁后觀察細(xì)胞,仍然是幾個(gè)幾個(gè)細(xì)胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此,容易聚集,不要去嘗試過幾個(gè)小時(shí)就拿出來吹打成單細(xì)胞懸液(不要笑,這個(gè)是初養(yǎng)懸浮細(xì)胞的人常犯的錯(cuò)誤,以為懸浮培養(yǎng)就是一個(gè)一個(gè)分開)。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來,這個(gè)時(shí)候即使是成片的(比如Calu-3細(xì)胞),吹打不超過20次后(一般10次即可),成小規(guī)模聚集(10個(gè)細(xì)胞左右),是正常的,不要試圖再去延長(zhǎng)消化時(shí)間,或者像有的同學(xué)那樣吹打1h,等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。比較難消化的細(xì)胞(潤(rùn)洗方法5min還不能消化),比如HCT15, LS411和KM12,這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次最多加入500ul,就足夠了,一般我加300ul。即使這樣難消化的細(xì)胞,一般不超過5min,即可見細(xì)胞成片移動(dòng),就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會(huì)有難消化的時(shí)候,比如tsDC細(xì)胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動(dòng)。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:6傳代,2—3天換液一次 細(xì)胞凍存的步驟:1)選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,在凍存前一天換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉,用0.25% 胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶,加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘);2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基,于4℃預(yù)冷15分鐘后,逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,細(xì)胞濃度為5×106~1×107/mL之間。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢?答案是不一定的,具體要看培養(yǎng)的細(xì)胞類型來選擇;3)將分裝上述細(xì)胞懸液于2ml凍存管中,每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊,并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期,同時(shí)作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù));4)將裝好細(xì)胞的凍存管放到凍存盒中,-80℃冰箱過夜。;如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜,放入液氮罐);或者可以在4℃,2h;然后轉(zhuǎn)到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐;5)細(xì)胞凍存在液氮中可以長(zhǎng)期保存,但為妥善起見,凍存半年后,取出一只凍存管細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),觀察生長(zhǎng)情況,然后再繼續(xù)凍存。 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 PM6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1694細(xì)胞、hEEC細(xì)胞、HCT116細(xì)胞 OCI-Ly 8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:K562/ADP細(xì)胞、MOLT3細(xì)胞、MDA-MB-436細(xì)胞 C3H10T1-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:V79-1細(xì)胞、BT 325細(xì)胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-5細(xì)胞 OSRC2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GL261細(xì)胞、Hep 3B2.1-7細(xì)胞、CA-OV-3細(xì)胞 Clone M-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB435細(xì)胞、MOPC細(xì)胞、SNU-368細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng) CAL-27 Cell:人舌鱗狀上皮細(xì)胞癌細(xì)胞系 細(xì)胞傳代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn):體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞或細(xì)胞株要在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代,以便獲得穩(wěn)定的細(xì)胞株或得到大量的同種細(xì)胞,并維持細(xì)胞種的延續(xù)。培養(yǎng)的細(xì)胞形成單層匯合以后,由于密度過大生存空間不足而引起營(yíng)養(yǎng)枯竭,將培養(yǎng)的細(xì)胞分散,從容器中取出,以1:2或1:3以上的比率轉(zhuǎn)移到另外的容器中進(jìn)行培養(yǎng),即為傳代培養(yǎng);細(xì)胞“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間,與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中,細(xì)胞培增3~6次。細(xì)胞傳代后,一般經(jīng)過三個(gè)階段:游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度,即細(xì)胞群的分裂相數(shù)/100個(gè)細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2%~0.5%,腫瘤細(xì)胞可達(dá)3~5%;細(xì)胞接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力時(shí)期,稱指數(shù)增生期(對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期),適宜進(jìn)行各種試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)步驟:1.將長(zhǎng)成的培養(yǎng)細(xì)胞從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出,在超凈工作臺(tái)中倒掉瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液,加入少許消化液。(以液面蓋住細(xì)胞為宜),靜置5~10分鐘。2.在倒置鏡下觀察被消化的細(xì)胞,如果細(xì)胞變圓,相互之間不再連接成片,這時(shí)應(yīng)立即在超凈臺(tái)中將消化液倒掉,加入3~5ml新鮮培養(yǎng)液,吹打,制成細(xì)胞懸液。3.將細(xì)胞懸液吸出2ml左右,加到另一個(gè)培養(yǎng)瓶中并向每個(gè)瓶中分別加3ml左右培養(yǎng)液,蓋好瓶塞,送回二氧化碳培養(yǎng)箱中,繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。一般情況,傳代后的細(xì)胞在2小時(shí)左右就能附著在培養(yǎng)瓶壁上,2~4天就可在瓶?jī)?nèi)形成單層,需要再次進(jìn)行傳代。 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮細(xì)胞樣 CCD841CoTr細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-72細(xì)胞、MFM223細(xì)胞、U-343細(xì)胞 MDA 1386細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LC2/Ad細(xì)胞、Huh-7.5.1細(xì)胞、HCC2185細(xì)胞 MCMEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IB-RS2細(xì)胞、HUT28細(xì)胞、PC-3/M細(xì)胞 UM-RC-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PNEC30細(xì)胞、B95.8細(xì)胞、Hs832T細(xì)胞 AMC-HN-8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BEL7405細(xì)胞、HMSC細(xì)胞、SKMES-1細(xì)胞 IOSE 80細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2330細(xì)胞、NALM-6細(xì)胞、FHC細(xì)胞 DHL-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MLMA細(xì)胞、H719細(xì)胞、A549/DDP細(xì)胞 CAL-27 Cell:人舌鱗狀上皮細(xì)胞癌細(xì)胞系 Glioma-261細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BHP 10-3細(xì)胞、H2141細(xì)胞、COLO 205細(xì)胞 SK-MES1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:G519細(xì)胞、MCF7-CTRL細(xì)胞、MB468細(xì)胞 H8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-354細(xì)胞、HCC-78細(xì)胞、Jurkat Clone E6-1細(xì)胞 RPE D407細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM115F細(xì)胞、MGHU3細(xì)胞、SW-480細(xì)胞 RT112細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RS4;11細(xì)胞、P 815細(xì)胞、HaCaT細(xì)胞 NCIH28細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SJRH 30細(xì)胞、Tu 177細(xì)胞、3 LL細(xì)胞 Med 283細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MeT5A細(xì)胞、CHO-Lec1細(xì)胞、MS751細(xì)胞 SR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI 1788細(xì)胞、CaEs17細(xì)胞、MALME.3M細(xì)胞 Meat Animal Research Center-145細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hu-P-T3細(xì)胞、CWR22R細(xì)胞、CCD-841-CoN細(xì)胞 Meat Animal Research Center-145細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hu-P-T3細(xì)胞、CWR22R細(xì)胞、CCD-841-CoN細(xì)胞 TE8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RASMC細(xì)胞、NKM-1細(xì)胞、PLA-801D細(xì)胞 EoL-1 cell細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs746-T細(xì)胞、NGP細(xì)胞、143BTK-細(xì)胞 VeroC1008細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Bronchial Epithelium transformed with Ad12-SV40 2B細(xì)胞、CEMO-1細(xì)胞、EST81細(xì)胞 RPMI8226細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TERT-RPE1細(xì)胞、PLA801-95C細(xì)胞、LIPF178C細(xì)胞 MM1S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-1210細(xì)胞、FAT細(xì)胞、B5537SKIN細(xì)胞 A375SM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PBMC細(xì)胞、MKN-7細(xì)胞、SLMT1細(xì)胞 NPA'87細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Lewis-Lung細(xì)胞、HBZY1細(xì)胞、87 MG細(xì)胞 B-95-8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-cell細(xì)胞、CAMA細(xì)胞、KTC-1細(xì)胞 FDCP1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RT4P細(xì)胞、CCRF/CEM細(xì)胞、COR-L23細(xì)胞 GEO細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1373細(xì)胞、BSC-40細(xì)胞、OCI-LY-7細(xì)胞 Simpson細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RERFLCMS細(xì)胞、TE-9細(xì)胞、UMRC-2細(xì)胞 KMS-18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MALME.3M細(xì)胞、TCam 2細(xì)胞、HH [Human lymphoma]細(xì)胞 NCIH64細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Colo-201細(xì)胞、HL-1細(xì)胞、HOP62細(xì)胞 Kit225 K6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:2780細(xì)胞、PA12細(xì)胞、NCI-H508細(xì)胞 CAL-39細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16 subline B78細(xì)胞、EA.hy 926細(xì)胞、MC-3T3-E1細(xì)胞 Sol8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RAW2647細(xì)胞、Oregon J-111細(xì)胞、U-118MG細(xì)胞 P 3 HR 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-MEL-31細(xì)胞、Monomac-1細(xì)胞、NCI-HUT-460細(xì)胞 CCRF-CEM/S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc05.04細(xì)胞、PANC0403細(xì)胞、MLOY4細(xì)胞 KYSE 50細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HeLa S3細(xì)胞、HM1900細(xì)胞、Huh7.5.1細(xì)胞 CD-18細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16 melanoma F10細(xì)胞、NCIH1573細(xì)胞、RAEC細(xì)胞 697細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NUGC3細(xì)胞、CCD 841 CoN細(xì)胞、NCI-H841細(xì)胞 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