"J82 Cell:人膀胱移行癌細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 細(xì)胞背景資料:電子顯微鏡下未觀察到橋粒但觀察到數(shù)目不同的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和突出微絲。 含ras (H-ras)癌基因。 SKRC-20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2342細(xì)胞、JOSK-M細(xì)胞、SUM 52細(xì)胞 Balb/c3T3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IPLB-SF 21AE細(xì)胞、DLM8細(xì)胞、BL6細(xì)胞 Kuramochi細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-AML-4細(xì)胞、OP9細(xì)胞、SNU-C1細(xì)胞 CNE-2Z細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Centre Antoine Lacassagne-27細(xì)胞、WM35細(xì)胞、Line 870 Emory University-4細(xì)胞 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 J82 Cell:人膀胱移行癌細(xì)胞系 細(xì)胞消化過(guò)程總結(jié):其實(shí)絕大部分細(xì)胞消化的時(shí)候是只要用胰酶潤(rùn)洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留的那些無(wú)法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞(絕大部分1min不到)。對(duì)于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞,連續(xù)這樣傳代,對(duì)細(xì)胞傷害很大。簡(jiǎn)單的程序是PBS潤(rùn)洗吸去,胰酶潤(rùn)洗吸去,然后37度消化。2,什么算是消化好了呢?不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層,只要能移動(dòng)了,多半呈沙壯移動(dòng),其實(shí)已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成完全分離細(xì)胞,這是沒(méi)有必要的。一般能移動(dòng)了,說(shuō)明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細(xì)胞已經(jīng)獨(dú)立分布了(雖然沒(méi)有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個(gè)時(shí)候應(yīng)該停止消化,不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細(xì)胞就是完全成單個(gè)細(xì)胞懸液,之后在貼壁的過(guò)程中仍然會(huì)聚集,這個(gè)是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,尤其是腫瘤細(xì)胞的一個(gè)特性,無(wú)論死活的細(xì)胞都是如此,你可以嘗試,準(zhǔn)備100%的單個(gè)細(xì)胞懸液,貼壁后觀察細(xì)胞,仍然是幾個(gè)幾個(gè)細(xì)胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此,容易聚集,不要去嘗試過(guò)幾個(gè)小時(shí)就拿出來(lái)吹打成單細(xì)胞懸液(不要笑,這個(gè)是初養(yǎng)懸浮細(xì)胞的人常犯的錯(cuò)誤,以為懸浮培養(yǎng)就是一個(gè)一個(gè)分開(kāi))。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來(lái),這個(gè)時(shí)候即使是成片的(比如Calu-3細(xì)胞),吹打不超過(guò)20次后(一般10次即可),成小規(guī)模聚集(10個(gè)細(xì)胞左右),是正常的,不要試圖再去延長(zhǎng)消化時(shí)間,或者像有的同學(xué)那樣吹打1h,等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。比較難消化的細(xì)胞(潤(rùn)洗方法5min還不能消化),比如HCT15, LS411和KM12,這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次最多加入500ul,就足夠了,一般我加300ul。即使這樣難消化的細(xì)胞,一般不超過(guò)5min,即可見(jiàn)細(xì)胞成片移動(dòng),就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會(huì)有難消化的時(shí)候,比如tsDC細(xì)胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動(dòng)。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代 細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng):1)如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞,而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心,加15%血清的完全培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒(méi)有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡,請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決;2)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢;適當(dāng)提高血清濃度(最高不能超過(guò)20%),或可根據(jù)該細(xì)胞生長(zhǎng)密度,考慮胰酶消化后,轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng);3)生長(zhǎng)不均:貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長(zhǎng),可將細(xì)胞進(jìn)行消化,重懸打散細(xì)胞,加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 MGH-U3 (RN)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3X63Ag8細(xì)胞、MCF-10 Attached細(xì)胞、BV-173細(xì)胞 MDCC-MSB-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C-33-A細(xì)胞、RDES-1細(xì)胞、NCI-H1623細(xì)胞 Tca-83細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Centre Antoine Lacassagne-33細(xì)胞、NCI-H1648細(xì)胞、NCI-H1355細(xì)胞 NOR10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-387細(xì)胞、SL-29細(xì)胞、UM-UC14細(xì)胞 EC109細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ra No. 1細(xì)胞、Institute for Medical Research-90細(xì)胞、COLO678細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng) J82 Cell:人膀胱移行癌細(xì)胞系 貼壁消化難題:1,先用PBS 把細(xì)胞洗兩遍,使瓶?jī)?nèi)沒(méi)有血清了,減少對(duì)胰酶的中和,然后用新配的0.25%的胰酶加入3ml左右,放在37度,然后可以在細(xì)胞有些消化下來(lái)時(shí),拿著瓶口,運(yùn)用手腕的力量輕輕震蕩瓶?jī)?nèi)液體,這樣細(xì)胞很快就下來(lái)了,還不需要吹打,分散也均勻;2,成團(tuán)、絮狀:消化液里加入edta可以減少細(xì)胞成團(tuán)的現(xiàn)象,血清可以終止胰酶的作用,如果是進(jìn)口血清的話也能終止edta的作用。用胰酶消化后胰酶可以倒掉,也可以不倒,直接加血清終止,如果消化液中加入了edta的話,就要將消化液倒干凈,如果細(xì)胞貼壁要求不是很?chē)?yán)格的話,一般不需要進(jìn)行離心。鼻咽癌細(xì)胞的貼壁能力很強(qiáng),用0.5%胰酶(含0.1%EDTA)一般要消化12~15min。用PBS洗滌時(shí)要洗凈殘余的培養(yǎng)基,加入胰酶后在培養(yǎng)箱中消化(避免細(xì)胞室溫下受損以及在此溫度時(shí)胰酶活性最強(qiáng))至細(xì)胞收縮變圓(可顯微鏡下觀察)且有少許細(xì)胞脫落(有流下來(lái)的趨勢(shì)),隨后立即棄去胰酶(如果脫落的細(xì)胞很多且需要大量細(xì)胞實(shí)驗(yàn),則不能棄去胰酶),加入培養(yǎng)基仔細(xì)吹打(不能用無(wú)血清培養(yǎng)基或者PBS替代,否則細(xì)胞聚集成團(tuán)塊或絮狀)。一般我都離心一次棄去上清(去除殘留的胰酶及漂浮的死細(xì)胞或細(xì)胞碎片);消化過(guò)度:馬上用培養(yǎng)基中和,用吸管吹打細(xì)胞,收集全部的細(xì)胞到以無(wú)菌的離心管中800RPM 3分鐘。棄上清,用全培重懸,換新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng),狀態(tài)不好的細(xì)胞在培養(yǎng)的過(guò)程中會(huì)死亡脫落,在換液的時(shí)候可以清除掉! 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮細(xì)胞樣 LAN-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH460細(xì)胞、KMM1細(xì)胞、BTI-Tn5B14細(xì)胞 L- cell細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UMR 106細(xì)胞、32D CL3細(xì)胞、SK MEL-28細(xì)胞 H-865細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Huh-7.5細(xì)胞、A20細(xì)胞、SKES-1細(xì)胞 PC-2 [Human pancreatic carcinoma]細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SHSY5Y細(xì)胞、QBI-293A細(xì)胞、NCIH1623細(xì)胞 LS 180細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT-1080細(xì)胞、MODE-K細(xì)胞、H-661細(xì)胞 MRC-9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1155細(xì)胞、Hep-3B細(xì)胞、SNU-C2A細(xì)胞 Bac 1.2F5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:130-T細(xì)胞、K422細(xì)胞、NTERA-2cl.D1細(xì)胞 J82 Cell:人膀胱移行癌細(xì)胞系 MTC-TT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UMC11細(xì)胞、MeWo細(xì)胞、HBVSMC細(xì)胞 CHO-K1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:V 79細(xì)胞、MCF 7細(xì)胞、NCI-HUT-69細(xì)胞 P3 (Jiyoye)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:hMSC-BM細(xì)胞、CCD-1095Sk細(xì)胞、B-95-8細(xì)胞 Panc 04.03細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mono-Mac-1細(xì)胞、T2(174 x CEM.T2)細(xì)胞、L428細(xì)胞 EOC20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COV-434細(xì)胞、AgC11x3A細(xì)胞、Madin-Darby Canine Kidney細(xì)胞 MDA MB 436細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U266-B1細(xì)胞、EAC-E2G8細(xì)胞、KM12-SM細(xì)胞 CCRF-CEM C7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:1301細(xì)胞、Colon 26細(xì)胞、Alexander細(xì)胞 alpha TC1.6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HO1N1細(xì)胞、MIN-6細(xì)胞、BC-024細(xì)胞 AML-EOL-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSAS1細(xì)胞、FAK+/+細(xì)胞、NCI-H2009細(xì)胞 HCC827細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL 148細(xì)胞、CHO-S細(xì)胞、NTERA-2/D1細(xì)胞 BC-009細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCF-7細(xì)胞、L-540細(xì)胞、Pt-K1細(xì)胞 LM1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA231-LM2-4175細(xì)胞、TCC Sup細(xì)胞、149PT細(xì)胞 Lewis lung carcinoma line 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA157細(xì)胞、IPEC-1細(xì)胞、SNU119細(xì)胞 MB157細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-1細(xì)胞、18G3.cl 1細(xì)胞、SK-ChA-1細(xì)胞 Hepa-RG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF 763細(xì)胞、DHL4細(xì)胞、NCIH1373細(xì)胞 NCIH1975細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 480細(xì)胞、Tb 1 Lu細(xì)胞、ME-1 [Human leukemia]細(xì)胞 3T3J2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UMRC2細(xì)胞、CAL-39細(xì)胞、HEK-293-FT細(xì)胞 BTI-Tn5B14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 281.T細(xì)胞、CNE2細(xì)胞、LNCaP-ATCC細(xì)胞 OSA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SHIN3細(xì)胞、SUDHL-4細(xì)胞、OCI-Ly07細(xì)胞 R2C細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Y3-Ag1,2,3細(xì)胞、SW-620細(xì)胞、HOP-92細(xì)胞 KG1A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Colon-26細(xì)胞、UWB1.289+BRCA1細(xì)胞、Anip973細(xì)胞 HS578T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-468細(xì)胞、EAhy 926細(xì)胞、LA-N-6(OAN)細(xì)胞 Colon 26細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Jiyoye (P-2003)細(xì)胞、Ramos細(xì)胞、MHCC97細(xì)胞 A 172細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A427細(xì)胞、BEAS2B細(xì)胞、Tissue Culture-1細(xì)胞 HLFa細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1563細(xì)胞、SNU-398細(xì)胞、H2196細(xì)胞 GM07404D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1838細(xì)胞、NS20Y細(xì)胞、KP2細(xì)胞 H-2085細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BC-PAP細(xì)胞、GTL16細(xì)胞、NCTC 3960細(xì)胞 RS(4;11)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Stanford University Pediatric T-cell line 1細(xì)胞、MUTZ1細(xì)胞、THLE2細(xì)胞 NCIH740細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:95C細(xì)胞、NCI-H3255細(xì)胞、CCC-HHM-2細(xì)胞 C3H10T1/2 clone8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COS-1細(xì)胞、MCF10A細(xì)胞、NCIH322細(xì)胞 SCC 9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MLE-12細(xì)胞、SK-MEL-24細(xì)胞、GM03671C細(xì)胞 Medical University of Graz-Chordoma 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEH2細(xì)胞、CA46細(xì)胞、B95-8細(xì)胞 SW-837細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3HR-1細(xì)胞、WM451Lu細(xì)胞、TCam-2細(xì)胞 D324細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IMR32細(xì)胞、NCI-H211細(xì)胞、RMC-1細(xì)胞 AU-565細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LCLC-103H細(xì)胞、Clone 166細(xì)胞、Panc04.03細(xì)胞 Hs895T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Roswell Park Memorial Institute 7951細(xì)胞、SK-N-AS細(xì)胞、MOLP2細(xì)胞 MLFC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Murine Carcinoma-38細(xì)胞、Karpas422細(xì)胞、MM1細(xì)胞 IAR20細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW 1222細(xì)胞、WIL2-S細(xì)胞、NCIH1573細(xì)胞 MM-1S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C12細(xì)胞、Human Embryonic Skin細(xì)胞、G 292 Clone A 141B1細(xì)胞 TW 01細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A20細(xì)胞、ECC-1細(xì)胞、SC細(xì)胞 MGH-U1 (EJ)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Lewis lung carcinoma line 1細(xì)胞、HBL-100細(xì)胞、H1436細(xì)胞 SUIT 2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:K562/ADR細(xì)胞、P-3J細(xì)胞、SUDHL5細(xì)胞 MD Anderson-Metastatic Breast-157細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDCKII細(xì)胞、NCI-HUT-596細(xì)胞、SK-ES細(xì)胞 J82 Cell:人膀胱移行癌細(xì)胞系 MTEC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-1833細(xì)胞、Vero 76 clone E6細(xì)胞、HS-294細(xì)胞 Tj-905細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GH 3細(xì)胞、COLO678細(xì)胞、mousepodocyte細(xì)胞 NCI H508細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NB9細(xì)胞、NK-92.05細(xì)胞、J45.01細(xì)胞 GM03569D細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MSTO-211H細(xì)胞、MDA MB 175 VII細(xì)胞、HL-60 clone15細(xì)胞 SK-N-DZ細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-1847細(xì)胞、EC109細(xì)胞、BEL 7405細(xì)胞 rHSC-99細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:624細(xì)胞、Onda 11細(xì)胞、Panc327細(xì)胞 SBC3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-M[TK-]細(xì)胞、RPE1細(xì)胞、WERI Rb-1細(xì)胞 MPC5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-HSR細(xì)胞、CCRF.CEM細(xì)胞、H-2052細(xì)胞 HIEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 600.T細(xì)胞、DoHH-2細(xì)胞、CCRF.CEM細(xì)胞 HLFa細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1563細(xì)胞、SNU-398細(xì)胞、H2196細(xì)胞 Human ErythroLeukemia細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EBC-1細(xì)胞、LAN6細(xì)胞、GM3570細(xì)胞 NB19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IHC-ST1細(xì)胞、OSC19細(xì)胞、CHL1細(xì)胞 "
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